国家高技术研究发展计划(2001AA204011)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：廖威陈维春庞义贾艳华李广宏更多>>
- 相关机构：广西职业技术学院中山大学广东医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划“十五”国家科技攻关计划项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 苏云金芽孢杆菌生产菌株溶原性噬菌体pep基因的克隆、表达及功能分析被引量：1
- 2008年
- 溶原性噬菌体的随机爆发是微生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,B.t)发酵生产的首要危害。【目的】本文的目的就是通过研究B.t生产菌株溶原性噬菌体的遗传背景,以便从分子水平上控制其在生产中的随机爆发。【方法】通过对广东梅州某公司的生产菌株MZ1采用Mitomycin C进行诱导,提取噬菌体颗粒MZTP01的基因组DNA,克隆和表达该噬菌体的pep基因,并进行了功能分析。【结果】诱导获得的溶原性噬菌体MZTP01斑点清晰,直径约1mm,成斑时间12h;从噬菌体基因组DNA双酶切(HindⅢ/EcoRⅠ)片段中回收长度为2362bp的D片段(Genbank登录号:AY639599),又从D片段中克隆了长度为1101bp、编码367aa、分子量为47kDa的pep基因,表达载体M15(pQE30pep)在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中表达获得了47kDa的清晰表达带,在1h时开始产生蛋白并有逐步上升的趋势;Western blot也在47kDa处得到一条清晰的条带;可溶性分析表明PEP蛋白在重组菌株中是以不可溶的包含体形式存在的,该蛋白的产生明显地抑制了宿主的生长速度;噬菌体PEP氨基酸序列之间的同源性比较表明,噬菌体MZTP01PEP蛋白与来自E.coliK12噬菌体的PEP蛋白的同源性程度最大。【结论】我们获得了一种新的噬菌体MZTP01,并首次报道了该噬菌体D片段的核苷酸序列及pep基因的功能,试验证明PEP表达蛋白能够水解酪蛋白,其活力相当于0.3mg/mL的胰蛋白酶。
- 廖威陈维春贾艳华庞义
- 关键词：苏云金芽孢杆菌克隆功能分析
- MZTP02噬菌体tmp基因的鉴定:与尾巴装配相关的蛋白质
- 2013年
- 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)广泛用于生物防治,但溶原性噬菌体的随机爆发严重影响了它的生产。一种新的苏云金芽孢杆菌溶原性噬菌体被分离出来并进行了基因组测序。TMP(tape measure protein)蛋白质具有协助和控制噬菌体尾巴装配的功能,是噬菌体侵染期间协助其吸附宿主的一种必需蛋白质。使用PCR方法从MZTP02噬菌体基因组中扩增出tmp基因后,连接到pQE30质粒并用M15菌株进行表达,获得了相对分子质量为35 000的蛋白质条带;该蛋白质经Ni-NTA纯化后,作为抗原注入新西兰家兔制备获得多克隆抗体;Western blot分析发现了一条与原核表达大小一致的蛋白质表达带。噬菌体悬浮液混合TMP血清抗体后测定双层平板的滴度,在噬菌体的侵染复数(m.o.i)小于1的情况下,噬菌体的滴度与血清抗体的质量浓度呈反比关系。当一定滴度的噬菌体悬液分别混合25μg/mL和250μg/mL的血清质量浓度时,滴度分别为1×105pfu/mL和2×103pfu/mL。这一结果表明TMP血清抗体能够与TMP蛋白质相结合,从而导致了噬菌体滴度的降低。
- 宋少云廖威陈维春李广宏
- 关键词：苏云金芽孢杆菌原核表达
