山东省自然科学基金(Y2002C19)
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
- 相关作者：李中华栾保华孙良刘萌萌王小霞更多>>
- 相关机构：山东大学济南市第四人民医院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 兔外周血间充质干细胞的分离培养及诱导分化被引量：2
- 2009年
- 目的研究间充质干细胞(MSCs)在创伤修复中的作用并为MSCs作为组织工程种子细胞奠定实验基础。方法抽取创伤后兔外周血,用密度梯度离心法分离纯化单个核细胞;α-MEM培养基培养,并测定细胞生长曲线;应用成骨和成软骨诱导剂定向诱导,检测分化能力。结果原代培养的MSCs呈圆形、梭形、多角形,传代纯化后呈均一的长梭形。其生长曲线均呈典型的"S"形。外周血MSCs成骨诱导后7d碱性磷酸酶染色阳性;21d出现钙沉积,茜素红染色呈阳性。成软骨诱导2周后Ⅱ胶原免疫细胞化学染色阳性。结论皮肤损伤刺激后可从外周血中获取MSCs,体外分离培养的MSCs具备向成骨及成软骨细胞分化特性;可用于组织工程种子细胞的研究。
- 栾保华孙良李中华王小霞刘萌萌
- 关键词：外周血间充质干细胞分化
- 间充质源性软骨种子细胞与脱细胞软骨复合培养构建软骨组织被引量：1
- 2011年
- 目的兔外周血间充质源性软骨种子细胞与同种异体脱细胞软骨体外复合培养,构建新型软骨组织,为临床修复器官缺损及再造提供实验基础。方法提取兔外周血间充质干细胞,行体外诱导培养14 d获得软骨种子细胞,显微镜下观察细胞生长特性,制作细胞爬片行甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色。联合去垢剂—酶法获得兔脱细胞肋软骨支架,软骨种子细胞与同种异体脱细胞软骨支架体外复合培养7 d获得复合软骨,脱细胞软骨及复合软骨固定后行扫描电镜观察及组织学HE、甲苯胺蓝染色。结果兔外周血间充质干细胞体外诱导培养14 d,胞浆内较多软骨细胞特异性Ⅱ型胶原分泌;兔脱细胞软骨呈乳白色,结构完整、孔隙均匀,仍保存大量酸性黏多糖及胶原成分,其孔隙率(61.31±8.45)%,孔径长度(32.80±5.15)μm。支架与软骨细胞黏附良好,并伴有多量基质分泌。结论间充质源性软骨种子细胞与同种异体脱细胞软骨体外复合培养可构建新型软骨组织,本研究为临床修复器官缺损及再造提供了实验依据。
- 刘萌萌栾保华孙良李中华王小霞
- 关键词：间充质脱细胞软骨组织
- 兔肋软骨脱细胞基质的制备
- 2011年
- 背景:研究表明新西兰兔软骨组织可作为组织工程支架材料,其中关节软骨及耳软骨的脱细胞基质的研究较多,但采用肋软骨作为组织工程软骨支架的研究较少。目的:制备新西兰兔肋软骨脱细胞基质,探讨天然软骨支架作为组织工程支架的可行性。方法:用联合去垢剂-酶法获得软骨支架,根据脱细胞过程中TritonX-100第2次处理时间0,24,48,96h分为4组。脱细胞完毕后各组支架固定行扫描电镜采集图像观察计算支架孔隙率、孔径长度,并对支架进行苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,并将脱细胞支架植入异体新西兰兔皮下观察其相容性。结果与结论:兔肋软骨脱细胞基质呈乳白色,大小均一,染色示支架结构完整,仍保存大量酸性黏多糖及Ⅱ型胶原成分,扫描电镜观察经一定时间的脱细胞处理后可得到结构完整,孔隙均匀的天然软骨支架,其孔隙率为(61.31±8.45)%;孔径长度为(32.80±5.15)μm,符合正态性分布,各组脱细胞支架植入异体新西兰兔皮下7d后生物相容性良好,周围软组织无明显充血、化脓等炎症排斥反应出现。结果显示,兔肋软骨脱细胞支架具有良好的基质组成,有较完整、均匀的孔隙结构及孔径分布,可作为组织工程支架材料。
- 刘萌萌张健栾保华孙良李中华王小霞
- 关键词：软骨脱细胞生物相容性
- 兔外周血间充质干细胞的体外分离培养及诱导成骨被引量：7
- 2009年
- 背景:研究证明外周血中存在间充质干细胞,但含量极少。目的:拟从兔外周血中提取间充质干细胞,并诱导其向成骨细胞分化。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-06/12在山东省立医院中心实验室完成。材料:新西兰大白兔6只,购自山东省农科院。α-MEM培养基、L-DMEM培养基为Hyclone公司产品。方法:每隔2d从兔背部不同部位切去3cm×3cm的全层皮肤(保留背部肌层),所切皮肤做原位移植后包扎,每只兔连续创伤4次。分别于创伤前及末次创伤1周后从股静脉取外周血,采用密度梯度离心法获取间充质干细胞,设立2组,分别加入含体积分数为10%胎牛血清的α-MEM培养基或L-DMEM培养基。细胞传至第2代以1×105/cm2密度接种于12孔板,加入含成骨诱导剂的H-DMEM培养液进行成骨诱导。主要观察指标:创伤前后细胞形态观察,成纤维样细胞集落形成率,成骨诱导效果。结果:创伤前所获得的细胞首次换液后,未见有梭形细胞贴壁;创伤后所获得的细胞接种24h即可见有短梭形及多角形细胞贴壁,五六天后出现细胞集落。与L-DMEM培养基组比较,α-MEM培养基组外周血成纤维样细胞集落形成率明显升高(P<0.05)。外周血间充质干细胞成骨诱导后,呈梭形、三角形或多角形,有突起,可见两三个核仁和细胞分裂相,增殖速度缓慢,诱导7d后碱性磷酸酶阳性率达80%以上,诱导21d后茜素红染色形成钙结节。结论:皮肤损伤刺激后可成功从兔外周血中获取间充质干细胞,且具备成骨分化特性,α-MEM培养基较L-DMEM培养基更适合外周血间充质干细胞的体外生长。
- 孙良栾保华李中华王小霞刘萌萌
- 关键词：培养基成骨诱导
- 体外诱导兔骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的实验研究被引量：4
- 2008年
- 目的探讨兔骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)在特定培养条件下向软骨细胞定向分化的情况。方法密度梯度离心法分离兔BMSCs,在体外培养扩增后用含有骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)-2的条件培养液诱导其在体外单层培养模式下向软骨细胞分化。采用甲苯胺蓝染色、Masson染色、免疫组织化学染色、阿利新蓝比色法测定糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)的含量检测BMSCs分化情况。统计学分析比较第24、、7代(P2、P4、P7)BMSCs诱导后增殖能力及向软骨细胞分化能力的变化。结果定向诱导后BMSCs表现出软骨细胞的特性。P2、P4间的细胞增殖能力和成软骨细胞分化能力比较差异无统计学意义(P>0.05);P7与P2、P4相比,细胞增殖能力和成软骨细胞分化能力均降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论BMP-2能诱导兔BMSCs在体外单层培养模式下向软骨细胞分化;细胞传代对BMSCs向软骨细胞分化有重要影响。
- 李中华栾保华
- 关键词：间充质干细胞软骨细胞分化骨形态发生蛋白-2
