国家大学生创新性实验计划(201210635045)
- 作品数：2 被引量：8H指数：1
- 相关作者：张丹华宋明汤青林杨朴丽王志敏更多>>
- 相关机构：西南大学更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 甘蓝抽薹开花抑制因子FLC与SVP体外表达及相互作用被引量：7
- 2013年
- 甘蓝抽薹开花抑制因子FLC与SVP可能存在相互作用,从而调节开花时间。为进一步的验证该相互作用,以甘蓝‘ZQ’为材料,扩增了594 bp的FLC cDNA和726 bp的SVP cDNA序列,它们分别编码197和241个氨基酸,且均属MIKC型蛋白。NCBI比对发现FLC与BoFLC3同源性高达98%,SVP与BoSVP-a同源性高达99%。将甘蓝FLC和SVP分别与原核表达载体pET43.1a融合,构建重组质粒pET43.1a-FLC、pET43.1a-SVP,并转化宿主菌大肠杆菌BL21,均能够在体外表达目的蛋白。利用免疫共沉淀的原理及pET43.1a-FLC、pET43.1a-SVP融合蛋白序列中的6×His标签能与Ni+结合的特点,结合SDSPAGE,检测到体外表达蛋白FLC与SVP能相互作用并形成复合体,这为深入研究FLC与SVP互作机理及探讨其与抽薹开花因子的相互作用提供了理论依据和技术基础。
- 杨朴丽张丹华刘智宇许俊强王志敏汤青林宋明
- 关键词：甘蓝FLCSVP体外表达蛋白质相互作用
- 结球甘蓝雌蕊调控转录因子SPT基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2013年
- 以结球甘蓝E1为材料,提取花蕾总RNA,反转录cDNA。根据拟南芥SPT基因设计引物,采用同源克隆的方法从中克隆SPT基因序列1 085 bp,开放阅读框1 062 bp。通过cDNA推导得到的氨基酸序列分析表明,BoSPT编码353个氨基酸残基,预测分子量为37.67 kD,pI为6.83。经过EcoRⅠ和KpnⅠ限制酶双酶切后,构建原核表达质粒pET43.1a-BoSPT转化表达菌株E.coli Rosetta(DE3),通过SDS-PAGE检测该蛋白的表达。经Smart-embl预测其具有bHLH家族结构域,位于序列第173~221位氨基酸残基处。进化树表明结球甘蓝BoSPT与拟南芥AtSPT和筷子芥AlSPT的亲缘关系较近。BoSPT基因的原核表达得到纯化的融合蛋白。
- 杨朴丽许俊强刘智宇王志敏张丹华汤青林宋明
- 关键词：结球甘蓝雌蕊SPT基因克隆
