中央高校基本科研业务费专项资金(2009-2-06)
- 作品数：26 被引量：326H指数：10
- 相关作者：郭仰东赵冰吴新新李仁张海军更多>>
- 相关机构：中国农业大学北京市海淀区农业科学研究所北京市种子管理站更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 基于AlcR/alcA和Cre/loxP系统的标记基因诱导删除体系被引量：8
- 2011年
- 【目的】通过构建能够在植物生长发育阶段经乙醇诱导将选择标记基因删除的载体,消除选择标记基因带来的潜在安全隐患。【方法】利用AlcR/alcA诱导系统和Cre/loxP位点特异性重组系统删除选择标记基因。当外源诱导物乙醇存在时,激活下游Cre的表达。Cre重组酶识别2个同向loxP位点,剔除位点之间的DNA片段,包括选择标记基因、AlcR/alcA系统和Cre/loxP系统,而目的基因gus在诱导前后均为组成型表达。【结果】拟南芥转基因植株受乙醇诱导严格控制Cre表达的"开"和"关"。经诱导的转基因植株不能在选择培养基上继续生长。分子生物学检测显示,2个同向loxP位点间序列均已删除,表明标记基因删除效果明显。【结论】基于AlcR/alcA和Cre/loxP系统的标记基因诱导删除体系切实可行,有广泛的应用前景。
- 赵青郭仰东谢华马荣才姚磊
- 关键词：CRE/LOXP重组系统删除选择标记基因
- 苹果砧木中砧1号茎尖离体保存研究被引量：3
- 2011年
- 为了建立苹果砧木中砧1号茎尖离体保存技术,以M9和富士为对照,研究了培养基中添加不同浓度蔗糖或生长抑制剂对试管苗生长速率的影响以及包埋干燥法和玻璃化法预处理对试管苗茎尖超低温保存效果的影响。结果表明,不添加生长抑制剂,蔗糖浓度为20 g·L-1时,中砧1号试管苗离体保存效果比较好。常规培养基(蔗糖浓度30 g·L-1)中添加5 mg·L-1 CCC、0.1 mg·L-1 ABA或60 mg·L-1 B9,也可以达到相同的效果。用包埋干燥法和PVS3玻璃化液预处理,中砧1号超低温保存后的茎尖再生率较高。综合上述结果,中砧1号低温保存的适宜条件为培养基中蔗糖浓度20 g·L-1;超低温保存的适宜条件为包埋干燥法预培养蔗糖浓度0.3 mol·L-1,包埋干燥时间4 h。
- 韩沙沙王忆张新忠韩振海
- 关键词：苹果砧木离体保存超低温保存
- 青花菜ProDH基因的克隆及功能鉴定被引量：5
- 2010年
- 脯氨酸是水分胁迫植物中最常见的渗透保护物质之一,脯氨酸脱氢酶(ProDH)是存在于线粒体内的催化脯氨酸降解的关键酶,构建RNAi表达载体转化青花菜可以抑制脯氨酸分解提高其抵抗干旱胁迫和盐胁迫的能力。本研究利用同源重组和RACE技术克隆青花菜脯氨酸脱氢酶基因(ProDH),以酶切、连接的方法利用载体pFGC1008构建植物RNAi表达载体pFGC-PDHi。序列分析表明,本文首次克隆了1595bp的青花菜脯氨酸脱氢酶基因cDNA全长,该序列编码498个氨基酸;序列比对发现该核酸序列与拟南芥、甘蓝型油菜、芜菁分别有83.26%、89.07%和97.73%的同源性,其氨基酸序列和拟南芥、甘蓝型油菜、芜菁分别有89.78%、91.38%和98.80%的同源性。测序和酶切鉴定表明青花菜ProDH基因RNA干扰表达载体已经构建成功,并将其转化青花菜得到转化株,经PCR检测,转化株均为阳性株,证明干扰载体的T-DNA区已经成功地整合到了青花菜基因组中。研究还发现在外源的L-脯氨酸存在时,转化株的脯氨酸脱氢酶的活性受到了明显的抑制。本研究为青花菜的抗旱育种提供了非常有价值的新种质材料。
- 杨鹏刘莉莎温常龙赵立群赵冰郭仰东
- 关键词：青花菜RNA干扰
- 黑麦草与羊茅属间杂种研究进展被引量：3
- 2010年
- 黑麦草属(Lolium L.)与羊茅属(Festuca L.)是世界范围内重要的禾本科牧草和草坪草。黑麦草与羊茅杂交能综合黑麦草优良营养品质与羊茅抗逆性强的优点,可培育出优质抗逆的黑麦草羊茅杂种。同时黑麦草羊茅杂种是研究禾本科牧草遗传机制的优质试材,倍受世界各国育种工作者关注。本文总结了黑麦草羊茅杂种高产、优质、抗性强的优势;分析了杂种染色体配型特点;重点介绍了通过基因渗入、雄核发育和转基因手段改良牧草的方法;对黑麦草羊茅杂种基因组原位杂交、分子标记和遗传图谱建立、数量性状位点分析等分子遗传学的最新研究进展进行了综述。
- 温常龙赵冰杜建材山田敏彦郭仰东
- 关键词：黑麦草羊茅属间杂交
- 基于RHE元件和拟南芥转录组的根毛发育基因筛选被引量：1
- 2010年
- 拟南芥根毛发育是分子发育生物学的重要模型。本试验通过分析拟南芥根毛突变体bst的芯片数据,并对筛选到的下调表达变化超过2倍的基因的启动子进行根毛顺式作用元件RHE(Root HairElement)的筛查,初步获得了根毛发育候选基因。结果表明,在bst中下调表达变化超过2倍的494个基因中,共有13个基因启动子中有RHE元件,其中5个为已报道的参与根毛发育基因,8个为本研究首次发现的参与根毛发育的候选基因。
- 张素维蒋阿维孙扬吾李擎天黄黎芳孔瑾
- 关键词：BST基因芯片
- 草莓‘甜查理’和‘章姬’花药培养及单倍体植株的获得被引量：21
- 2012年
- 为筛选草莓花药培养及单倍体植株最适宜的培养条件,以草莓栽培品种‘甜查理’和‘章姬’为材料,研究不同预处理方式、花序以及激素种类和配比对草莓花药愈伤组织诱导和分化效率的影响。结果表明:在4℃低温预处理过程中,始终保持花蕾表面湿润状态较自然状态下更能提高草莓花药愈伤的诱导率,最佳处理时间为72h;北京地区越冬栽培的草莓第1、2花序的花药较第3、4花序花药具有更好的培养效果;筛选出最佳愈伤诱导培养基,其中‘甜查理’愈伤诱导效率最高达到91.67%,‘章姬’为87.28%;筛选出最佳分化培养基,其中‘甜查理’最高分化率达到19.10%,‘章姬’为10.59%。共获得花药培养植株688株,其中‘甜查理’445株,‘章姬’243株。‘甜查理’再生植株中八倍体(2n=8x=56)、四倍体(2n=4x=28)植株所占百分比分别为90.43%和7.62%,其他为非整倍体植株。‘章姬’再生植株中八倍体和四倍体植株所占百分比分别为93.42%和4.32%,其他为非整倍体植株。建立了草莓花药培养高频诱导体系并获得了单倍体植株。
- 赵永钦吴新新郑禾路河郭仰东
- 关键词：草莓花药培养单倍体育种
- 凤尾兰花丝诱导的组培再生体系的建立及遗传稳定性分析被引量：2
- 2012年
- 以凤尾兰(Yucca gloriosa L.)花丝为外植体,研究不同激素种类和配比对愈伤组织诱导和分化的影响,以及活性炭对外植体褐化率的影响,以期为进一步工厂化育苗提供技术支持。结果表明:以花丝为外植体不仅可以获得较高的繁殖系数,而且可以避免灭菌剂对外植体的伤害,从而有效降低组织培养的难度和污染率;凤尾兰花丝最佳愈伤诱导培养基为:MS+6-BA 5.0mg潘·L-1+KT 1.0mg·L-1+2,4-D 0.5mg·L-1,最佳分化培养基为:MS+6-BA 6.0 mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1,最佳不定芽增殖培养基为:MS+6-BA 3.0mg·L-1+KT 0.5mg·L-1+NAA 0.05mg·L-1+椰乳100mL·L-1,增殖系数达到3.5左右;利用RAPD分子标记技术,在DNA水平上对再生株进行遗传变异鉴定,未检测出遗传变异,表明再生植株能够保持遗传上的稳定性。本研究首次建立了凤尾兰花丝高效稳定的组培再生体系。
- 赵永钦张娜吴新新郑禾李洪波赵冰郭仰东
- 关键词：花丝遗传变异分析RAPD
- 棉花FAD2-1基因的克隆及其ihpRNA和amiRNA干扰载体的构建被引量：2
- 2011年
- 采用RT-PCR方法克隆了棉花△-12脂肪酸去饱和酶基因(GhFAD2-1)的cDNA全长序列,该基因含有1158 bp的完整开放阅读框。棉花FAD2-1是种子中编码催化油酸形成不饱和脂肪酸的关键酶的基因,选取GhFAD2-1基因中的一段特异的515 bp片段,构建了种子特异性启动子NAPIN调控的ihpRNA干扰表达载体pFGC1008-NAPIN-FAD2-1,同时构建了针对GhFAD2-1基因的人工miRNA表达载体pCAMBIA1302-amiRNA-FAD2-1。
- 赵立群李仁李蔚谭小力杨佑明华金平郭仰东
- 关键词：高油酸
- 多年生黑麦草高频再生体系的建立及农杆菌介导PEPC基因的转化被引量：3
- 2012年
- 以多年生黑麦草(Lolium perenne L.)成熟种子作为外植体,建立其高频再生体系,通过农杆菌介导法将磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因转入,为多年生黑麦草的抗逆转基因工作奠定基础。结果表明:种子充分灭菌后在附加6.0mg·L-1 2,4-D的培养基中诱导愈伤组织,诱导率可达61.33%。愈伤组织在2,4-D浓度减半的培养基上继代培养长势良好,分化培养基为MS培养基附加1.0mg·L-16-BA,分化率最高达到61.33%,在1/2MS+0.5mg·L-1 NAA培养基中进行生根培养,生根率达100%。以该再生体系为基础,将获得的愈伤组织作为外植体进行遗传转化,经筛选培养后得到再生植株,通过PCR及实时荧光定量(Real-Time)PCR验证表明PEPC基因已成功转入,转化率为8.67%。试验结果将为多年生黑麦草抗性品种的研究奠定基础。
- 李蔚张娜李仁赵冰郭仰东
- 关键词：多年生黑麦草胚性愈伤组织
- 植物激素对种子休眠和萌发调控机理的研究进展被引量：103
- 2012年
- 休眠与萌发是植物种子维持生存及适应环境变化的一种特征,受许多基因调控和环境因子的影响。目前,利用数量遗传学方法和突变体等手段对种子休眠和萌发特性已进行了深入研究,但至今尚无完全揭示植物种子休眠与萌发的详细机制。激素是调节种子休眠与萌发的关键因子,其与种子萌发及休眠的关系一直是种子生理生化研究的热点。随着分子生物学的快速发展和大量突变体的发现,在种子休眠和萌发过程中,单个激素的调控作用及激素之间相互作用关系的机理也日益明确,但不同激素之间的信号传导网络中还有很多关键点没有研究清楚。本文重点阐述脱落酸(ABA)、赤霉素(GA)、乙烯(ETH)和油菜素内酯(BR)等激素在种子休眠和萌发过程中调控机理的研究进展,同时进一步完善了这4种激素之间的信号传导关系。
- 杨荣超张海军王倩郭仰东
- 关键词：种子休眠萌发激素
