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“重大新药创制”科技重大专项(2009ZX09503-005)
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2
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相关作者:
尚广东
任杰
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相关机构:
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产2S-甲基丙二酰辅酶A的基因工程假单胞菌的构建
2011年
目的假单胞菌是次级代谢产物生物异源表达的优良宿主菌,然而它缺少许多次级代谢产物生物合成所需的小分子前体2S-甲基丙二酸辅酶A(2S-mm-CoA),因此构建产生2S-mm-CoA的宿主菌将有利于次级代谢产物的异源表达。方法本研究将来源于大肠埃希菌的编码甲基丙二酰辅酶A变位酶的sbm基因和编码甲基丙二酰辅酶A变位酶复合物保护蛋白的argK基因以及来源于天蓝色链霉菌的编码甲基丙二酰辅酶A异构酶的epi基因通过同源重组整合到恶臭假单胞菌KT2440(Pseudomonas putida KT2440)基因组,得到基因工程菌株P.putida LS-MCM。结果气质联用(GC/MS)分析表明P.putida LS-MCM能产生达2.22nmol/mL的2S-mm-CoA。结论 P.putida LS-MCM可作为异源表达需要2S-mm-CoA作为前体单元的次级代谢产物的宿主菌。
杨圣勇
任杰
尚广东
关键词:
假单胞菌
同源重组
异源表达
构建链霉菌小型基因文库的新型正选择克隆载体
2010年
目的构建链霉菌小型基因文库是获得链霉菌基因的一个重要手段,常规使用的克隆载体常有着一定程度的假阳性,因此构建的高效率的克隆载体有着实际的意义。方法本研究通过重叠延伸PCR手段将一个96bp的多克隆位点序列插入至rpsL基因的启动子和开放阅读框之间,将此DNA片段克隆至pBluescript KS(-)而获得了新型的正选择克隆载体pLS975。结果 pLS975有18个酶切位点可用于外源DNA片段的克隆,重组克隆以氨苄青霉素抗性和链霉素抗性进行筛选,宿主菌为链霉素抗性菌株如Escherichia coli DH10B。两个小型基因文库的制备显示pLS975具有很高的克隆效率(96%~100%)。结论 pLS975可成为构建链霉菌小型基因文库的良好载体。
马超
朱宇鹏
尚广东
关键词:
链霉菌
RPSL基因
链霉素
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