河南省高校青年骨干教师资助项目(2011GGJS-194)
- 作品数：3 被引量：10H指数：1
- 相关作者：赵丽陈红英赵绪永崔保安马小四更多>>
- 相关机构：郑州牧业工程高等专科学校河南农业大学河南工业贸易职业学院更多>>
- 发文基金：河南省高校青年骨干教师资助项目河南省科技攻关计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- PPV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：8
- 2012年
- 【目的】建立一种能够快速、灵敏地检测猪细小病毒(PPV)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank中的PPVVP2基因序列,设计并合成1对引物。通过常规PCR,扩增猪细小病毒VP2基因,并将其纯化的PCR产物克隆入pGEM-T Easy载体中,构建重组质粒。对扩增程序中的荧光染料浓度、引物浓度和Mg2+浓度条件进行优化,建立最佳的荧光定量PCR反应体系和标准曲线。以阳性重组质粒为模板,建立SYBRGreenⅠ荧光定量PCR方法,对其灵敏性、特异性和重复性进行检验。应用建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,对临床60份疑似PPV病料进行检测,同时与血凝试验(HA)和常规PCR方法的检测效果进行比较。【结果】在25μL扩增体系中,Mg2+终浓度为4.5mol/L、SYBR Green染料浓度为20μmol/L、引物浓度为25μmol/L时,本底反应最小、循环阈值最低、扩增效率最高。所建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法能够特异、定量地检测猪细小病毒,灵敏度达20TCID50/mL;在临床样品检测中,其检出率比常规PCR方法高13.3%。【结论】成功建立了PPVSYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,为临床猪细小病毒的早期诊断及定量分析病毒的感染程度奠定了基础。
- 赵丽赵绪永陈红英崔保安
- 关键词：猪细小病毒SYBR
- 生物制品中猪细小病毒污染的快速检测被引量：1
- 2013年
- 为了研究生物制品生产过程中污染病毒的快速检测,试验采用GenBank报道的猪细小病毒(PPV)基因组序列,设计合成1对引物,通过优化聚合酶链式反应(PCR)的条件,成功地从被PPV感染的生物制品细胞培养物中扩增出320 bp片段,回收该片段并酶切证实了该扩增片段的特异性。结果表明:该方法可以检测出10 fg的PPV基因组。说明本试验建立的PCR方法对生物制品生产过程中污染的外源PPV的检测具有快速、简便、经济、灵敏度高和特异性强的特点。
- 赵丽卢婷婷马小四
- 关键词：生物制品PCR
- 河南长白猪白细胞介素18基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2012年
- 为了获取河南长白猪白细胞介素18(IL-18)基因的表达产物,试验从6月龄河南长白猪脾脏分离的淋巴细胞中提取总RNA,然后进行RT-PCR扩增,对扩增产物克隆、测序后获得河南长白猪IL-18基因成熟蛋白序列。利用基因重组技术将河南长白猪IL-18成熟蛋白编码区(500 bp)定向插入原核表达载体pQE30中,构建重组表达质粒pQE-pIL-18,转化大肠杆菌M15,并用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导。结果表明:经序列分析,河南长白猪IL-18基因全长为500 bp;SDS-PAGE分析可检测到分子质量约为45 ku的重组蛋白。
- 段永兰赵丽
- 关键词：克隆原核表达
