安徽省自然科学基金(050430805)
- 作品数：10 被引量：23H指数：3
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- 相关机构：安徽医科大学安徽中医学院第一附属医院安徽中医药大学更多>>
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- 日本血吸虫表膜蛋白Tetraspanin 2-A基因的克隆、表达与鉴定被引量：6
- 2008年
- 目的扩增并表达日本血吸虫表膜蛋白(SjTsp2-A)基因SjTsp2。方法根据与曼氏血吸虫表膜蛋白SmT-sp2基因同源的SjTsp2序列(编号为AY810722)设计引物,体外扩增目的蛋白基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用纯化的重组蛋白免疫小鼠,ELISA检测其血清抗体效价,蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定其免疫反应性。结果PCR扩增获得SjTsp2基因大环核苷酸序列为228bp,与曼氏血吸虫表膜蛋白(SmTsp2)的氨基酸序列同源性为52%。SjTsp2基因亚克隆入pET28a并可溶性表达,免疫小鼠可产生高滴度(最高1∶32000)特异性抗体。Western blotting分析结果表明,纯化的SjTsp2-A蛋白能被疫区居民血吸虫抗体阳性者血清、急性及慢性血吸虫病患者血清识别,与健康人血清无反应。结论日本血吸虫表膜蛋白基因SjTsp2在体外获得表达,其表达蛋白具有一定的抗原性。
- 王阳阳刘淼朱绍春任翠平沈际佳
- 关键词：日本血吸虫膜蛋白基因抗原性
- 日本血吸虫丝氨酸蛋白酶抑制剂的克隆与表达
- 2015年
- 目的获得日本血吸虫丝氨酸蛋白酶抑制剂的原核表达蛋白。方法根据GenBank中日本血吸虫丝氨酸蛋白酶抑制剂的序列设计引物,以cDNA为模板聚合酶链反应(PCR)扩增该基因,将其亚克隆入原核表达载体pET28a中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白。结果成功克隆了具有完整开放阅读框的日本血吸虫丝氨酸蛋白酶抑制剂重组质粒,获得相对分子质量约44×103的目的蛋白。结论成功地克隆表达了丝氨酸蛋白酶抑制剂,为进一步研究该蛋白的特性、功能及免疫保护作用奠定了基础。
- 雷黎刘淼沈际佳
- 关键词：日本血吸虫丝氨酸蛋白酶抑制剂克隆
- 人源性抗日本血吸虫肌球蛋白Fab噬菌体抗体体外杀童虫作用
- 2010年
- 目的观察人源性抗日本血吸虫肌球蛋白Fab噬菌体抗体体外杀伤血吸虫童虫作用。方法利用日本血吸虫肌球蛋白(Sj myosin)对人源性抗日本血吸虫Fab噬菌体抗体库进行富集筛选,获得抗Sjmyosin的特异性噬菌体抗体,将该抗体和巨噬细胞或补体与日本血吸虫童虫共培养,测定体外杀伤日本血吸虫童虫作用。结果将抗Sj myosin噬菌体抗体和巨噬细胞及补体与血吸虫童虫共培养时,在培养后24h即出现杀伤作用(童虫死亡率为4.69%),48h童虫死亡率达84.06%,96h童虫死亡率达89.38%。结论人源性抗Sj myosin Fab噬菌体抗体具有体外杀伤日本血吸虫童虫活性。
- 任翠平程晓虎童晶晶汪洁成晓廖法学雷黎刘森沈际佳
- 关键词：日本血吸虫噬菌体抗体体外杀伤作用
- 噬菌体展示技术及其在血吸虫研究中的应用
- 2005年
- 血吸虫是严重危害人类健康的寄生虫之一,近几年噬菌体展示技术为血吸虫病防治研究提供了新的思路和方法,在血吸虫病的诊断、治疗、预防中起到一定的作用,现综述如下。
- 雷黎沈际佳
- 关键词：噬菌体展示技术血吸虫免疫球蛋白抗原决定簇
- 紫外线致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库被引量：3
- 2006年
- 目的筛选紫外线致弱尾蚴中起免疫保护作用的抗原分子,分析其主要表位,为血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原。方法以紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,对阳性克隆插入片段的核苷酸进行序列分析,并利用软件Antheprot对所筛基因编码的抗原分子进行表位预测。结果经三轮筛选,共获20个阳性克隆,序列同源性分析表明其中有5种已知基因(GST、副肌球蛋白、肌球蛋白、钙离子激活蛋白和3-磷酸甘油醛脱氢酶),6种未知基因,软件分析显示不同抗原分子分别具有多个不同的抗原表位。结论获得的阳性克隆插入基因片段可能为潜在的日本血吸虫病疫苗分子,可能是多抗原、多表位在照射致弱尾蚴中起免疫保护作用。
- 刘淼朱绍春雷黎赵志荣沈际佳
- 关键词：日本血吸虫致弱尾蚴免疫筛选表位分析
- 日本血吸虫体表蛋白Tetraspanin 2-A核酸疫苗的构建及其对小鼠的免疫试验被引量：1
- 2009年
- 采用PCR法扩增日本血吸虫体表四跨膜家族蛋白2-A(SjTsp2-A)基因,构建重组质粒pcDNA3.1(+)/SjT-sp2-A,将其转至大肠埃希菌DH5α制备DNA疫苗pcDNA3.1(+)/SjTsp2-A。24只BALB/c小鼠均分3组,每鼠于左股四头肌注射0.5mg/ml盐酸布比卡因50μl。次日,A组同法注射DNA疫苗pcDNA3.1(+)/SjTsp2-A,B组注射重组质粒pcDNA3.1(+)/SjGST,C组注射空质粒pcDNA3.1(+)。注射剂量均为100μg/只。每隔2周注射1次,共3次,末次免疫后2周各组均经腹部皮下感染日本血吸虫尾蚴40±2条/鼠,45d后剖杀,计数减虫率和减卵率。ELISA检测抗体效价,A组化分析股四头肌局部组织蛋白表达情况。结果A组的平均检虫数和每克肝组织虫卵数均显著低于B组和C组(P值均<0.05),A组的减虫率和减卵率分别为44.4%和28.4%。A组血清抗体效价高达1∶25600。A、B两组局部组织均有特异性蛋白表达。DNA候选疫苗pcDNA3.1(+)/SjTsp2-A能诱导小鼠产生一定的免疫保护作用。
- 张鹏张薇娜任翠平刘淼沈际佳
- 关键词：日本血吸虫核酸疫苗免疫保护
- 日本血吸虫童虫文库免疫筛选及其高丰度表达膜蛋白初步鉴定被引量：8
- 2006年
- 目的获得新的可能具有诊断意义的血吸虫蛋白分子并对其鉴定。方法免疫学方法筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,对获得的阳性克隆进行测序分析,设计引物体外扩增目的蛋白基因,将其亚克隆入原核表达载体pET28a中,并转化大肠埃希菌BL21,进行诱导表达,最后用Westernblotting鉴定。结果获得34个阳性克隆,选择其中24个进行测序,其中13个是日本血吸虫相对分子质量(Mr)为22600膜相关蛋白(Sj22.6)基因。Sj22.6基因在体外被成功扩增,并被亚克隆入pET28a中进行表达。WesternBlotting结果显示,菌体表达的条带可以被感染兔血清以及血吸虫患者血清识别。结论Sj22.6膜相关蛋白基因在童虫cDNA文库中可以被高频率筛出,融合蛋白Sj22.6成功地在BL21中表达并具有免疫反应性。
- 朱绍春赵志荣雷黎张林杰沈际佳
- 关键词：日本血吸虫童虫CDNA文库免疫筛选
- 血吸虫感染抗性人血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库被引量：2
- 2007年
- 目的 分析血吸虫感染抗性人血清中起免疫保护作用抗体针对的日本血吸虫蛋白抗原谱。为日本血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原分子。方法 采集血吸虫流行病区感染抗性人血清．免疫学方法筛选日本血吸虫童虫cDNA文库。对获得的阳性克隆核苷酸进行序列分析，并利用软件对所筛基因编码的抗原分子进行表位预测。结果 共筛选出29个持续阳性克隆，对其进行测序，获得25个基因，包括5种已知基因（其中日本血吸虫肌球蛋白12个、丝氨酸蛋白酶抑制剂2个、细胞色素b1个、延伸因子1吨1个和线粒体编码区1个）和5个未知基因。软件分析显示不同抗原分别具有多个不同的抗原表位。结论 获得的阳性克隆插入基因片段可能编码潜在的日本血吸虫病疫苗分子．其中日本血吸虫肌球蛋白为主要抗感染蛋白分子。
- 任翠平王晓楠雷黎朱绍春赵志荣刘淼沈际佳
- 关键词：血吸虫基因文库免疫学
- 人源性抗日本血吸虫噬菌体抗体库的构建及初步鉴定被引量：5
- 2007年
- 目的利用噬菌体抗体展示技术构建人源性抗日本血吸虫Fab段噬菌体抗体库并进行初步鉴定。方法RT-PCR从对血吸虫感染有一定抗性成年人外周血淋巴细胞中扩增出人IgG轻链和重链Fd段基因片段,将其克隆入PComb3中,构建人源性Fab段噬菌体抗体库,并用限制性内切酶酶切、序列分析、DOT-BLOT以及SDS-PAGE等方法对噬菌体抗体库进行初步鉴定。结果噬菌体抗体库的滴度为6.2ⅹ1011/L,库容量为1.2ⅹ107,酶切鉴定结果显示噬菌体抗体库轻重链重组率达到66.6%,测序结果表明克隆入PComb3的是人免疫球蛋白轻链和重链基因,DOT-BLOT实验证明该抗体库表达了人源性的抗体,而SDS-PAGE证实了免疫球蛋白Fab段的可溶性表达。结论成功地构建了人源性抗日本血吸虫Fab段噬菌体抗体库,为筛选人源性抗日本血吸虫的抗体、研究这些抗体的特性和功能奠定了基础。
- 雷黎赵志荣朱绍春刘淼卞茂红张林杰沈际佳
- 关键词：日本血吸虫人源性噬菌体抗体库
- 日本血吸虫双表膜抗原融合基因原核表达质粒的构建及表达被引量：1
- 2010年
- 目的构建编码日本血吸虫表膜蛋白SjTsp2与Sj29融合基因的原核表达质粒,并表达重组蛋白。方法利用基因SOEing PCR技术得到SjTsp2与Sj29融合基因,将其克隆入原核表达载体pET32a中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果序列分析显示,融合基因与两个目的基因的同源性达100%;SDS-PAGE显示表达的重组蛋白相对分子质量为43000,表达量占菌体总蛋白的20%以上;Western blot显示其分别能与SjTsp2和Sj29蛋白的单克隆抗体结合。结论已成功构建了SjTsp2与Sj29融合基因原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了重组蛋白,为研制血吸虫病疫苗提供了材料。
- 刘淼朱海玉彭强徐广文王盈沈际佳
- 关键词：日本血吸虫融合基因原核表达
