国家科技支撑计划(2012BAK25B01)
- 作品数：14 被引量：21H指数：3
- 相关作者：颜光涛董芸李娜金伯泉张春梅更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院第四军医大学中国测试技术研究院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划科技基础性工作专项公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学化学工程更多>>
- 四种方法检测抗核抗体的对比分析被引量：5
- 2013年
- 目的:比较间接免疫荧光法(IIF)、化学发光法(CMIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和线性免疫印迹法(LIA)四种方法检测ANA的检测效能。方法:同时采用四种方法检测血清ANA共185例,其中AID 125例,健康对照60例;采用四格表计算灵敏性(Sen)、特异性(Spe)、准确性(Acc)、阳性预测值(pPV)、阴性预测值(nPV)、阳性似然比(pLR)和阴性似然比(nLR),并通过受试者工作特征(ROC)曲线来分析四种方法检测ANA的准确性。结果:IIF法、CMIA法、ELISA法和LIA法检测ANA的灵敏性依次为:90.4%、78.4%、90.9%、68.8%,特异性依次为:90.0%、93.3%、91.7%、98.3%;ROC曲线下面积为:0.914、0.798、0.918、0.701。其中,IIF和ELISA法的灵敏性明显高于其他两种方法(P<0.01);LIA法的特异性最高;IIF和ELISA法的ROC曲线下面积明显大于其他两种方法(P<0.05)。结论:四种方法检测ANA均有较高的特异性和准确性,都可用于临床检测。
- 卢小岚杜娟王强汪光蓉林芳张国元凡瞿明
- 关键词：抗核抗体间接免疫荧光法化学发光法酶联免疫吸附试验
- 瘦素减轻6-羟基多巴胺诱导的SH-SY5Y细胞损伤被引量：1
- 2014年
- 目的探讨瘦素对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)所诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)凋亡的抑制作用。方法建立6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型,用瘦素进行干预,采用倒置显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞活性,LDH法检测细胞损伤,台盼蓝检测细胞死亡率,流式细胞术检测细胞凋亡率,并用免疫荧光检测active caspase-3的荧光强度,Western blot检测Bcl-2和Bax的表达水平。结果成功建立了6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型。在模型的基础上,瘦素干预后,细胞凋亡率降低约15%,细胞存活率提高约14%,细胞损伤降低率和死亡率,active caspase-3的浓度下降,Bcl-2/Bax的比值显著提高(P<0.05)。结论瘦素对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有一定的抑制作用,这对瘦素可能参与帕金森病的保护作用提供了证据。
- 韩铭邓子辉薛辉李永明颜光涛
- 关键词：6-羟基多巴胺细胞损伤瘦素
- 科研用高纯试剂中不挥发性有机杂质分析
- 2015年
- 对国内外典型科研用HPLC级的甲醇、异丙醇和乙腈中的有机杂质进行高效液相色谱-飞行时间质谱非目标分析。实验结果表明:对每一种HPLC级高纯有机试剂而言,使用原液样品进行非目标分析时,国产试剂中有机杂质含量与进口试剂中有机杂质无显著差异;但使用原液样品的浓缩液进行非目标分析时,国产高纯试剂中的有机杂质种类远远多于国外高纯试剂中的有机杂质。这有助于了解国产HPLC级试剂与进口试剂质量差异,对提高国产HPLC试剂质量具有参考价值。
- 谭和平侯晓妮邹燕周李华孙登峰
- 关键词：高纯试剂甲醇乙腈飞行时间质谱
- 微乳液-水热结合法制备光色可调的α-NaYF4：Yb,Er,Tm纳米材料被引量：1
- 2013年
- 采用微乳液-水热结合法制备了NaYF4:Yb3+,Er3+,Tm3+纳米粒子,利用X射线衍射(XRD)、扫描电镜(SEM)等手段对样品的物相、结构和形貌进行了分析与表征。产物的X射线衍射峰与标准卡片PDF#77-2042完全一致,属于立方相NaYF4;SEM图片显示所制备的纳米粒子形貌和粒径都比较均一,为120nm左右的棉花状小球,由纳米微粒聚集而成;在980nm光的激发下,纳米粒子能够同时发出蓝光(438和486nm)、绿光(523和539nm)和红光(650nm);通过调节Tm3+:Er3+的比例(0,0.5,0.8,1,2,3,5,7),由色度坐标图(CIE)可以看出当Tm3+和Er3+的比例从0增加到2时,样品的整体发光光色是向绿光方向移动;当Tm3+和Er3+的比例为1:1时,得到伪白光;Tm3+和Er3+的比例从2到7时,样品整体的发光向红光方向移动。
- 龙丹丹张清侠王煜张帆王燕飞周新齐小花张恒闫景辉邹明强
- 关键词：纳米晶体上转换荧光
- 脊髓灰质炎病毒2型和3型D抗原单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的制备脊髓灰质炎病毒2型(PV2)和3型(PV3)D抗原的单克隆抗体(mAb),并对抗体的特性进行初步鉴定。方法以PV2及PV3的D抗原为免疫原,常规方法制备小鼠源性mAb,用间接ELISA检测小鼠腹水效价、型别特异性及与C抗原的交叉反应。结果获得4株PV2特异性并与PV2的C抗原不交叉的mAb,2株PV3特异性并与PV3的C抗原不交叉的mAb。结论成功制备了PV2及PV3特异性并与C抗原不交叉的D抗原mAb。
- 张春梅宋朝君李娜董芸田莹张赟金伯泉李琦
- 关键词：脊髓灰质炎病毒D抗原C抗原单克隆抗体
- T4 DNA连接酶酶活力测定方法被引量：3
- 2014年
- 工具酶的酶活力检测是工具酶产品质量控制的关键,研究和建立工具酶酶活力的测定方法是工具酶产品标准化制定的重点和难点。该文采用改进的粘性末端单位测定T4 DNA连接酶酶活力。经验证,方法重复性好,稳定性佳,为建立T4 DNA连接酶质量检测标准奠定了基础。
- 周李华叶德萍王智唐祥凯
- 关键词：T4DNA连接酶酶活力
- 卵运铁蛋白夹心ELISA方法的建立及初步应用被引量：1
- 2012年
- 鸡蛋营养丰富,是人类一种重要的蛋白质来源。另一方面鸡蛋又是引发过敏反应最常见的食物之一。鸡蛋中的过敏原主要存在于蛋清中,包括卵清蛋白（ovalbumin,OVA）、卵类黏蛋白（ovomucoid,OVM）、卵运铁蛋白（ovotransferrin,OVT）和卵溶菌酶（lyso-zyme,LYS）。其中OVT约占蛋清蛋白的12%左右[1]。目前世界各国的流感疫苗是利用病毒株在鸡胚尿囊腔中培养后,经过灭活处理,
- 李琦张春梅孙元杰徐竹蔚董芸田莹李娜宋朝君金伯泉
- 关键词：ELISA单克隆抗体流感疫苗
- NK细胞可溶性KIR3DL1分子检测双夹心ELASA的建立
- 2014年
- 自然杀伤细胞（natural killer cells，NK细胞）是固有免疫中一类十分重要的淋巴细胞，约占循环淋巴细胞总数的15％。目前根据CD56和CD16的表达水平可将NK细胞分为CD56hi、CD56dim和CD56-CD16＋3个亚群。
- 李琦宋朝君李娜董芸田莹张赟张春梅金伯泉
- 关键词：NK细胞ELISA
- 检测牛血清白蛋白竞争ELISA的建立及其应用被引量：1
- 2013年
- 目的建立高特异性检测牛血清白蛋白（BSA）竞争ELISA并应用于检测生物制品中残留的BSA。方法采用商品化的BSA作为包被抗原及标准品，筛选高特异性、高纯度的抗BSA单克隆抗体（mAb）作为酶标抗体，建立敏感、特异的竞争ELISA。结果优化了竞争ELISA的实验条件，对BSA的最低检测限为1．0ng／mL，批内实验变异系数为4．3％～7．0％，回收率为92％一108％。该方法与人血清、马血清、兔血清、鼠血清、鸡血清均无交叉反应。结论该方法特异性强、灵敏度高、重复性好，适用于生物制品中BSA残留以及其他标本BSA的定量检测。
- 张春梅宋朝君董芸田莹李娜徐竹蔚张赟李琦金伯泉
- 关键词：牛血清白蛋白单克隆抗体生物制品竞争ELISA
- 人抑瘤素M在大肠杆菌中的表达、纯化及其对胆固醇代谢关键基因表达的影响
- 2015年
- 目的构建人抑瘤素M(OSM)的原核表达载体,通过表达及纯化获得重组蛋白,为深入研究OSM的功能及机制奠定基础。方法利用PCR技术,从质粒pOTB7-h OSM中扩增出人OSM蛋白编码序列,与原核表达载体pET-16b连接,构建表达质粒pET16b-OSM。在BL21(DE3)工程菌中表达目的蛋白,Western blot法检测OSM蛋白的表达。为提高OSM的可溶性表达,采用共表达分子伴侣的方法提高其上清产物的表达量。将放大发酵的产物处理后,经镍亲和层析法纯化,获得OSM成熟蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度。MTT法检测OSM对A375细胞的抑制活性,实时荧光定量PCR试验分析OSM对Hep G2细胞中胆固醇代谢相关基因(LDLR、ABCA1、Apo A-I和SR-BI)表达的影响。结果成功构建pET16b-OSM原核表达质粒,酶切鉴定和测序分析与预期结果完全一致。在E.coli BL21(DE3)中实现了目的蛋白的表达,通过共表达分子伴侣质粒pTf16,进一步提高了可溶性表达的水平。放大发酵产物经镍亲和层析纯化获得OSM成熟肽,电泳检测纯度大于98%。MTT法检测所制备的OSM蛋白抑制A375细胞生长的EC50为315ng/ml。mRNA水平检测证实OSM能剂量依赖地上调胆固醇代谢相关的低密度脂蛋白受体和ABCA1基因的表达。结论成功构建了OSM的原核表达载体,获得了具有生物学活性的目的蛋白,证实了其对胆固醇代谢关键基因转录的影响,为下一步功能及机制研究奠定基础。
- 杜郁贾晓健袁芳王丽王丽非洪斌
- 关键词：抑瘤素M原核表达分子伴侣胆固醇代谢
