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多管发酵-菌落PCR法定量检测水中可培养沙门氏菌被引量：6: 2012年; 采用膜吸附-洗脱法浓缩水样,通过多管发酵法筛选出以可培养沙门氏菌为主的活体细菌.根据沙门氏菌invA基因的保守性,利用沙门氏菌属通用引物进行菌落PCR鉴定,进而确定沙门氏菌阳性平板数量.运用最大可能数法分析数据,计算出水样中可培养沙门氏菌的含量.该方法对沙门氏菌具有良好的特异性和涵盖性.通过对人工污染水样和城市污水厂二级处理出水的检测,证明了多管发酵-菌落PCR方法的检测结果较为准确,可操作性强,能够更真实地反映样品中沙门氏菌的活性.; 张崇淼王晓昌周进宏孙婷婷魏梦楠曾颂

城市生活污水中志贺氏菌ipaH毒力基因的定量PCR检测被引量：5: 2013年; 基于ipaH毒力基因的实时荧光定量PCR检测,建立适合城市污水中志贺氏菌的定量检测方法。使用从临床分离出的志贺氏菌构建重组质粒作为实时荧光定量PCR的标准品。在ipaH基因模板量2.58×100～2.58×106copy范围内具有良好的线性关系,每100 mL水样中含有2.58×101copy以上的ipaH基因即可被检出。从西安市生活污水分离得到2株野生型志贺氏菌,分析ipaH基因数量和菌体数量的关系,从而确定ipaH基因定量检测志贺氏菌的可行性。该方法灵敏、快速、特异性好,适用于城市生活污水中志贺氏菌的检测。; 孙婷婷张崇淼王晓昌李宪谢润欣; 关键词：实时荧光定量PCR 志贺氏菌 IPAH基因城市生活污水

城市污水处理工艺对宿主特异性标记物和肠道病原菌的去除效果被引量：5: 2014年; 采用自制小型反应器模拟实验和实时荧光定量PCR检测方法,针对指示人类、犬类粪便污染的宿主特异性标记物,以及病原性大肠埃希氏菌、沙门氏菌和志贺氏菌等典型的肠道病原菌,分别考察了序批式活性污泥法(SBR)、混凝、过滤工艺对它们的去除效果。研究结果表明,SBR工艺的去除效果优于混凝和过滤工艺,对标记物和病原菌毒力基因的去除率都在93.5%以上。SBR工艺中初期短时间的搅拌即可去除大部分标记物和病原菌。在这3种处理工艺中,宿主特异性标记物与肠道病原菌毒力基因的去除率具有显著相关性,这说明宿主特异性标记物能够在一定程度上反映污水处理过程中肠道病原菌的含量。; 程艳艳张崇淼王晓昌周远涛; 关键词：肠道病原菌序批式活性污泥法混凝

人类特异性粪厌氧菌基因标记物实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用被引量：1: 2013年; 针对人类粪便污染,选择来源于拟杆菌和双歧杆菌16S rRNA的基因片段作为标记物,分别建立了相应的实时荧光定量PCR检测方法。选取不同来源的粪便样品进行检测,证实了引物的特异性。回收纯化从污水中扩增所得的目标PCR片段,经过连接转化,筛选阳性克隆提取其重组质粒作为实时荧光定量PCR的标准品。通过检测一系列梯度稀释的标准品,确定了拟杆菌基因标记物和双歧杆菌基因标记物定量PCR检测方法分别在1.98×102～1.98×107copy/μL和2.12×101～2.12×107copy/μL范围内具有良好的线性关系。; 李宪张崇淼王晓昌孙婷婷谢润欣; 关键词：实时荧光定量PCR

西安市景观水体肠道病毒实时荧光定量RT-PCR检测与健康风险评价被引量：9: 2010年; 根据肠道病毒基因非编码区保守序列的同源性设计肠道病毒通用引物,建立环境水体中肠道病毒的实时定量RT-PCR检测方法,对西安市的主要景观水体进行1 a的连续监测。通过统计分析数据,对肠道病毒感染的健康风险进行评价。结果表明,兴庆湖和北湖的肠道病毒检出浓度符合对数正态分布,浓度随季节变化波动明显,全年浓度几何平均值分别为16.05 copy/L和5.06 copy/L。肠道病毒与细菌总数、大肠菌群、粪大肠菌群等指标均无显著的相关性。根据景观用水的暴露评价和脊髓灰质炎病毒1型、柯萨奇病毒A21和B4型,埃可病毒12型的剂量-反应关系,计算得出兴庆湖和北湖中的各种肠道病毒感染的年风险分别为1.05×10^(-2),1.66×10^(-2),1.47×10^(-2);3.27×10^(-3),5.20×10^(-3),4.59×10^(-3)。结果表明这些景观水体已受到肠道病毒的污染,进一步加强城市景观水体肠道病毒的监测是十分必要的。; 张崇淼王晓昌彭党聪; 关键词：环境工程学肠道病毒景观水体

城市污水中病原性大肠埃希氏菌毒力基因eaeA和rfbE的实时荧光定量PCR检测被引量：6: 2012年; 针对病原性大肠埃希氏菌EHEC和EPEC的毒力基因eaeA和rfbE,选用特异性引物,建立了实时荧光定量PCR检测方法.利用从污水中分离出的目的核酸片段构建重组质粒,通过测序和BLAST比对分析,确定了PCR扩增的特异性.将重组质粒作为模板,分别测定标准曲线,在eaeA基因模板量8.77～8.77×105copy,rfbE基因模板量4.98～4.98×105copy的范围内,Ct(循环阈值)与模板量的对数值具有良好的线性关系〔R2为0.997(eaeA)和1.000(rfbE)〕.结合膜吸附洗脱浓缩方法,对于实际水样,eaeA和rfbE基因的检测限分别为1.75×102和9.96×101copy/100 mL.利用该方法对城市污水处理厂进、出水进行检测的结果显示,污水二级处理工艺对这2种毒力基因的去除效果明显.; 谢润欣张崇淼王晓昌孙婷婷李宪; 关键词：实时荧光定量PCR 城市污水

城市地表水中肠道病原微生物与粪便污染指示菌的关系研究被引量：18: 2012年; 本研究选择肠道病毒、伤寒沙门氏菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌作为城市水体中典型的肠道病原微生物,分别建立起相应的实时荧光定量PCR检测方法.对水源水、景观娱乐用水以及城市河流样品进行长期监测,考察典型肠道病原微生物的分布特征和变化规律.肠道病毒在各地表水体中都有检出,浓度大都在103copy·L-1以下.大肠埃希氏菌的含量在保护良好的水体和接纳城市污水的水体中有明显差别,而伤寒沙门氏菌和志贺氏菌通常出现在受粪便污染较重的水体中.统计学的分析结果显示各种水体中的肠道病原微生物检出浓度均符合对数正态分布规律.粪便污染指示菌与肠道病毒之间不存在显著的相关性,但却能在一定程度上反映典型肠道病原菌的存在情况.在大肠菌群或粪大肠菌群浓度为104CFU·L-1以上的样品中,伤寒沙门氏菌、志贺氏菌具有较高的阳性率.; 张崇淼王晓昌周进宏吉铮; 关键词：城市地表水实时荧光定量PCR

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国家自然科学基金(50908185)