国家自然科学基金(31260593)
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：中华人民共和国农业部内蒙古农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- JSRV-Env诱导转染TC-1、TC-1-Hyal2细胞后对AKT和ERK表达的影响被引量：1
- 2016年
- 为了探索JSRV与其受体相互作用后靶细胞的致瘤机制,本研究应用JSRV Env真核表达质粒分别诱导转染小鼠肺上皮细胞(TC-1)和稳定表达绵羊Hyal-2的小鼠肺上皮细胞(TC-1-Hyal2),而后检测细胞信号转导通路上AKT(丝氨酸/苏氨酸激酶)和ERK(细胞外信号调节激酶)在mRNA及蛋白水平上的表达变化,并分析绵羊Hyal-2在JSRV Env诱导TC-1细胞转化过程中的作用。首先体外培养TC-1和TC-1-Hyal2两种细胞,并分别设立pEGFP-C1-env转染组、pEGFP-C1转染组及未转染质粒组。通过实时荧光定量PCR和Western blot方法检测两关键酶在不同水平上的表达变化。qPCR结果显示:与未转染质粒细胞组比较,转染pEGFP-C1-env的两细胞组中AKT和ERK1/2mRNA表达均显著升高(P<0.05)。Western blot结果显示:与未转染质粒细胞组比较,转染pEGFP-C1-env两细胞组中p-Akt(S473)蛋白表达量显著升高(P<0.05);且p-Akt(T308)和p-Erk1/2蛋白在转染pEGFP-C1-env的TC-1细胞组中表达量也均呈显著升高变化趋势(P<0.05),而这两种蛋白在相同处理的TC-1-Hyal2细胞组中表达量均呈极显著升高(P<0.01)。此外,转染pEGFP-C1空载体的各细胞组与未转染质粒细胞组相比较AKT和ERK mRNA和蛋白含量差异均不显著(P>0.05)。JSRV Env在诱导上述细胞系转化过程中,Ras-Raf-MAPK和PI3K-Akt两条细胞信号转导通路被激活;实验检测得知,转染pEGFP-C1-env的两细胞组中AKT、ERK表达量均升高;相比之下,在TC-1-Hyal2细胞组中其表达量升高更显著。研究结果推测绵羊Hyal-2在JSRV Env诱导TC-1细胞转化过程中起促进作用。
- 么宏强孙丽红骆爽纪秀红
- 关键词：AKTERK
- AA-CYP表氧化酶代谢产物对胰岛β细胞增殖和胰岛素分泌的影响及其机制的研究
- 花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)经过细胞色素 P450(Cytochrome P450,CYP)表氧化酶途径生成环氧二十碳三烯酸(Epoxyeicosatrienoic acids,EETs)及20-...
- 程铭
- 关键词：EETS胰岛Β细胞胰岛素
- JSRV-Env重组质粒诱导转染TC-1、TC-1-Hyal2细胞后对TGF-α及VEGF因子表达的影响
- 2016年
- 通过脂质体法将JSRV-Env重组质粒瞬时转染小鼠肺上皮细胞(TC-1)和表达绵羊Hyal-2的小鼠肺上皮细胞(TC-1-Hyal2),而后探讨两细胞中转化生长因子-α(TGF-α)及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白表达的变化,以此分析TGF-α、VEGF与绵羊肺腺瘤病(ovine pulmonary adenomatosis,OPA)发生的关联性及其在细胞癌变过程中的作用。体外培养TC-1和TC-1-Hyal2细胞,按照不同质粒可将TC-1和TC-1-Hyal2细胞分别设为pEGFP-C1-env转染组、pEGFP-C1转染组和未转染组。利用实时荧光定量PCR和ELISA方法对TGF-α、VEGF的表达水平进行检测。实时荧光定量PCR检测结果表明,相比对照组(pEGFP-C1转染组及未转染组),在转染pEGFP-C1-env的两细胞组中VEGF mRNA的表达量均显著升高(P<0.05);而两细胞组中TGF-αmRNA的表达量均极显著升高(P<0.01)。ELISA检测结果表明,同两对照组相比,转染pEGFP-C1-env的TC-1-Hyal2细胞上清液中VEGF、TGF-α蛋白浓度均极显著升高(P<0.01);且VEGF在相同转染处理的TC-1细胞组中其蛋白浓度也极显著升高(P<0.01),而TGF-α的蛋白浓度呈显著升高(P<0.05)。比较pEGFP-C1转染和未转染各细胞组中TGF-α、VEGF的mRNA和蛋白表达量,结果均无显著差异(P>0.05)。本研究发现,通过实时荧光定量PCR和ELISA方法检测经JSRV-Env诱导转染上述两细胞系后TGF-α、VEGF的mRNA和蛋白表达量均升高,结果提示JSRV-Env可能上调两细胞因子,进而可推测TGF-α、VEGF的表达变化与OPA发病存在一定的关联性,由此为衍生出的OPA针对二者进行基因靶向治疗方案提供重要的理论依据。
- 骆爽孙丽红斯日古楞么宏强
- 构建稳定表达JSRV受体Hyal-2小鼠肺上皮细胞系
- 2015年
- 为了构建稳定表达绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)受体透明质酸酶-2(Hyal-2)蛋白的小鼠肺上皮细胞系,试验采用将重组质粒p DsRed-monomer-N1-Hyal-2转染小鼠肺上皮细胞后,用G418对转染后的细胞进行筛选、纯化,通过对不同培养代次的细胞系进行倒置荧光显微镜观察、RT-PCR、基因测序、Western-blot等方法加以验证。结果表明:试验成功构建了JSRV受体Hyal-2蛋白小鼠肺上皮细胞系,在传至20代后Hyal-2仍在该细胞系中稳定表达。说明该细胞系的成功建立,为研究绵羊Hyal-2对JSRV转化目的细胞能力的影响提供了一种体外试验平台。
- 孙丽红骆爽张德纯斯日古楞么宏强
- 关键词：受体转染
- EETs对胰岛β细胞增殖及胰岛素分泌的影响
- 2020年
- 本实验旨在分析不同浓度的EETs对胰岛β细胞的影响,为防治2型糖尿病提供理论依据。体外培养MIN6小鼠胰岛瘤细胞,经不同浓度EETs处理细胞后,分别采用CCK-8法和ELISA法检测细胞活性和胰岛素含量。浓度为100 nM的11,12-EET和14,15-EET对胰岛β细胞增殖及胰岛素分泌能力具有显著促进作用。100 nM11,12-EET和14,15-EET均显著增加胰岛β细胞的增殖以及其胰岛素分泌能力。
- 程铭么宏强武志红玉斯日古楞
- 关键词：EETS胰岛Β细胞增殖
