浙江省科技厅科技计划项目(2005C33017)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 相关作者：尉晓冬关翠萍许爱娥周妙妮李永伟更多>>
- 相关机构：杭州市第三人民医院更多>>
- 发文基金：浙江省科技厅科技计划项目卫生部科学研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人酪氨酸酶抗原表位肽的表达、纯化及生物学活性分析被引量：1
- 2007年
- 目的 探讨人酪氨酸酶抗原表位肽在白癜风患者自身抗体检测中的表达。方法 目的基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-2，转化大肠杆菌BL21菌株，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白表达，通过SDS-PAGE分析和蛋白质印迹鉴定目的蛋白表达，ELISA检测其生物学活性。结果 成功构建重组表达载体，SDS-PAGE和蛋白质印迹结果表明，重组蛋白成功表达。应用凝胶分析系统分析蛋白表达量发现，目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的90％。融合蛋白经过试剂盒纯化后，其蛋白纯度达95％以上。ELISA检测纯化蛋白的生物学活性，结果表明，纯化蛋白具有结合白癜风患者IgG的能力。结论 成功表达了人酪氨酸酶抗原表位肽，其表达蛋白具有生物学活性。
- 关翠萍李永伟尉晓冬张迪敏许爱娥
- 关键词：白癜风一元酚单氧酶原核表达
- 三种表达肽检测进展期白癜风患者血清酪氨酸酶抗体的比较被引量：3
- 2009年
- 目的应用三种表达肽TYR240—300，TYR240—479和TYR检测进展期白癜风患者血清酪氨酸酶IgG抗体，比较三者的抗体检测差异，筛选优势抗原。方法原核表达、纯化三种表达肽TYR240—300，TYR240—479和TYR，Western印迹鉴定纯化蛋白；以纯化的三种表达肽作为抗原，以提取的黑素细胞总蛋白作为阻断抗原，进行阻断ELISA分析；以纯化的三种表达肽作为抗原，检测100例进展期白癜风患者血清中酪氨酸酶IgG抗体，比较三种表达肽的抗体检测阳性率及滴度差异。结果三种表达肽均能被天然的黑素细胞抗原所阻断，100例进展期白癜风患者血清中，抗TYR240—300IgG抗体与抗TYR240—479IgG抗体阳性率分别为32．0％和62．0％，不同型别患者两种抗体检出阳性率差异较大，泛发性（8例）分别为4例和7例，局限性（8例）分别为3例和4例，散在性（48例）分别为31．3％和60．4％，肢端性（19例）分别为20．0％和52．6％，节段型（17例）分别为47．1％和82．4％。40例进展期白癜风患者血清中抗TYR240—479IgG抗体与抗TYRIgG抗体的阳性率相近，分别为62．5％和60．0％。表达肽TYR240—479和TYR检测的进展期白癜风患者血清中IgG抗体最高滴度均为1：320，而表达肽TYR240—300检测的进展期白癜风患者血清中IgG抗体最高滴度均为1：160。结论TYR240—479是用于白癜风患者中酪氨酸酶抗体检测的优势抗原。
- 关翠萍陈斐斐周妙妮洪为松尉晓冬许爱娥
- 关键词：白癜风一元酚单氧酶免疫显性表位
- 人酪氨酸酶抗原表位肽的表达、纯化及在白癜风患者中的抗原性检测被引量：4
- 2007年
- 目的表达人酪氨酸酶抗原表位肽,探讨其在白癜风患者自身抗体检测中的应用。方法目的基因合成后克隆至原核表达载体 pGEX-4T-2,转化大肠杆菌 BL21菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析和 Western 印迹鉴定目的蛋白表达,以此蛋白为抗原,检测100例进展期白癜风患者和30名正常人血清 IgG 抗体情况。结果成功构建重组表达载体,重组蛋白成功表达。应用凝胶分析系统分析蛋白表达量发现,目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的70%。融合蛋白经过谷胱苷肽 S-转移酶试剂盒纯化后,其蛋白纯度达90%以上。100例白癜风患者中64例血清与目的蛋白结合反应呈阳性,30名正常人血清结合反应均呈阴性。结论成功表达了人酪氨酸酶抗原表位肽,其在白癜风患者血清中具有抗原性。
- 关翠萍周妙妮李永伟尉晓冬许爱娥
- 关键词：白癜风一元酚单氧酶抗原表位
