江苏省高校自然科学研究项目(06KJD310036) 作品数:5 被引量:16 H指数:3 相关作者: 陈盛霞 姜旭淦 许化溪 吴亮 朱敏娟 更多>> 相关机构: 江苏大学 灌云县人民医院 宜兴市人民医院 更多>> 发文基金: 江苏省高校自然科学研究项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
口服Ⅱ型胶原蛋白对血清抗体和派氏集结细胞因子表达的影响 2011年 目的:探讨口服Ⅱ型胶原蛋白(CⅡ)对派[伊尔]氏集结(PP结)的形态学、细胞因子表达水平和血清特异性IgG、IgA、IgM含量的影响。方法:连续10 d给小鼠口服不同剂量的CⅡ,第11天和第21天用佐剂或CⅡ进行免疫,分别于第11天、第21天和第31天采集血液和PP结。PP结经HE染色后,镜下观察其增生的情况。用荧光实时定量RT-PCR法,检测PP结中IL-17、TNF-α、IFN-γ和TGF-β1 mRNA的水平。采用ELISA法检测血清抗CⅡIgG、IgA、IgM的水平。结果:口服CⅡ10 d后,PP结增生活跃,高剂量组可见清晰的帽状结构;血清中出现IgA,未见IgG和IgM水平增加;IL-17、TNF-α、IFN-γmRNA的表达受到抑制。以CⅡ初次免疫后,实验组IgA、IgM、IL-17的水平均低于对照组(P<0.05或P<0.01),TGF-β1的水平显著增加(P<0.05)。以CⅡ加强免疫后,高剂量组IgA的水平显著增加(P<0.05),实验组IgM的水平仍受到抑制(P<0.05或P<0.01),TGF-β1的水平高于对照组(P<0.05)。以佐剂免疫时PP结中细胞因子的表达与CⅡ免疫时相似,未见血清抗CⅡIgG、IgA、IgM水平的变化。结论:口服CⅡ能使血清中产生特异性IgA,抑制PP结IL-17、TNF-α、IFN-γ的基因表达,对CⅡ免疫后IgA、IgM的产生和IL-17 mRNA的表达具有一定的抑制作用。以上结果表明,血清特异性抗体的水平和细胞因子表达的变化在口服CⅡ诱导免疫耐受对类风湿性关节炎的治疗作用方面发挥着重要的作用。 姜旭淦 陈盛霞 吴亮 许化溪关键词:口服耐受 细胞因子 Ⅱ型胶原蛋白抗血清的制备和检测 被引量:9 2008年 目的:探讨Ⅱ型胶原蛋白(collagen protein typeⅡ,CⅡ)抗体产生规律,制备CⅡ抗血清。方法:采用纯化的鸡和猪CⅡ免疫新西兰白兔,每隔10 d收集血清,以改良间接ELISA法检测抗CⅡ抗体效价。结果:鸡CⅡ免疫新西兰白兔后,第10天抗体效价为1∶3 200,第20天升至1∶204 800;加强免疫后,第30天和第40天抗体效价分别达到1∶409 600和1∶819 200。猪CⅡ免疫新西兰白兔后,第10天血清中未能检测出抗体,第20天血清抗体效价为1∶3 200;加强免疫后,第30天和第40天抗体效价分别为1∶51 200和1∶102 400。结论:采用纯化的鸡和猪CⅡ免疫新西兰白兔后,经一定潜伏期血清中出现抗体,可以获得高效价抗CⅡ抗体血清。抗体产生情况符合机体初次及再次免疫应答的有关规律,但血清抗体产生的潜伏期和效价与不同种属来源的胶原蛋白有关。 姜旭淦 朱敏娟 葛彦文 吴亮 陈盛霞 许化溪关键词:酶联免疫吸附实验 血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体检测法的建立与应用 被引量:3 2008年 目的建立血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体的ELISA法,探讨其在类风湿关节炎(RA)患者中的应用价值。方法以自提可溶性鸡Ⅱ型胶原蛋白(soluble chicken collagen type Ⅱ,SCCⅡ)作为包被抗原,优化实验条件,建立抗Ⅱ型胶原蛋白抗体间接ELISA法。对124例RA病人和54例健康人血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体进行检测。结果血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体的检测条件为:SCCⅡ包被浓度为20μg/ml;以含10%羊血清的缓冲液进行封闭、稀释血清和酶标抗体;采用双波长(450nm/630nm)进行测定。RA患者和健康人血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体阳性率分别为19.35%(24/124)和1.85%(1/54),两组有明显的统计学差异(P<0.01)。结论以SCCⅡ为包被抗原检测抗Ⅱ型胶原蛋白抗体可作为判断RA患者病情的一个辅助诊断指标。 姜旭淦 陈盛霞 吴琴 汤俊民 马建芬 储青 吴亮 颜小云 刘荻 姚加平 许化溪关键词:类风湿关节炎 酶联免疫吸附实验 消化酶在口服Ⅱ型胶原蛋白治疗类风湿性关节炎中的作用 被引量:3 2011年 目的:观察消化酶在体内和体外对天然Ⅱ型胶原蛋白(native typeⅡcollagen,N-CⅡ)和变性Ⅱ型胶原蛋白(denatured typeⅡcollagen,D-CⅡ)的酶解作用,探讨口服Ⅱ型胶原蛋白(typeⅡcollagen,CⅡ)治疗类风湿性关节炎的机制。方法:在体外将胃蛋白酶、胰蛋白酶和α-糜蛋白酶分别作用于N-CⅡ和D-CⅡ,采用SDS-PAGE电泳和免疫印迹法分析酶解产物。将N-CⅡ和D-CⅡ注入鼠胃内和十二指肠,把不同时间收集的胃和肠内容物进行SDS-PAGE电泳分析。结果:N-CⅡ分子和亚基都能与兔抗鸡CⅡ抗体反应;D-CⅡ可被分解成十多条免疫印迹反应呈阳性的蛋白片段。CⅡ在胃、肠道能处于溶解状态。在体外,N-CⅡ在胃蛋白酶和α-糜蛋白酶作用下电泳和免疫印迹图谱无变化,而被胰蛋白酶作用后出现10条免疫印迹为阳性的条带;D-CⅡ易被上述消化酶分解。N-CⅡ不被胃内环境水解,可被肠道消化酶缓慢降解;D-CⅡ可被胃、肠道消化酶迅速分解。结论:N-CⅡ可被胰蛋白酶水解产生多条活性片段,但对胃内环境、胃蛋白酶和α-糜蛋白酶具有抵抗力;D-CⅡ易被胃、肠道消化酶水解。结果提示口服CⅡ诱导免疫耐受、治疗类风湿性关节炎可能与CⅡ特性和胰蛋白酶对它的作用有关。 姜旭淦 陈盛霞 吴亮 许化溪关键词:胃蛋白酶 胰蛋白酶 Α-糜蛋白酶 类风湿性关节炎 可溶性鸡Ⅱ型胶原蛋白的理化特性研究 被引量:2 2011年 目的研究可溶性鸡Ⅱ型胶原蛋白(SCCⅡ)的物理化学特性。方法用光谱法测定吸收峰和等电点,HPLC法检测氨基酸组成,乌氏黏度计测定不同条件下溶液的增比黏度。用SDS-PAGE测定相对分子量(Mr),结合免疫印迹法分析胃蛋白酶、胰蛋白酶、α-糜蛋白酶和Ⅱ型胶原酶作用于SCCⅡ和热变性后的SCCⅡ(D-SCCⅡ)的酶解产物。结果 SDS-PAGE显示SCCⅡ亚基的Mr约为120×103,能与抗SCCⅡ抗体反应;D-SCCⅡ含有10多条免疫印迹呈阳性反应的片段。SCCⅡ溶液的最大吸收峰为230 nm,等电点pH约6.25。氨基酸组成中,Gly、Pro、Glu和Ala含量高,芳香族氨基酸低。SCCⅡ溶液的增比黏度随浓度的增加而增加,在25~45℃范围内随着温度的升高逐渐下降。在胃蛋白酶和糜蛋白酶作用下SCCⅡ的电泳和免疫印迹图谱无变化,Ⅱ型胶原酶可使SCCⅡ快速水解,胰蛋白酶作用后出现10条免疫印迹阳性条带;D-SCCⅡ经酶解后免疫印迹无阳性条带。结论 SCCⅡ具有独特的物理化学性质,对消化酶有一定抵抗作用,胰蛋白酶作用后可出现多条活性片段。 姜旭淦 陈盛霞 吴亮 许化溪关键词:类风湿关节炎 胰蛋白酶