广东省自然科学基金(001322)
- 作品数：8 被引量：33H指数：3
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- 相关机构：中山大学中山医科大学西安交通大学更多>>
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- 过氧化氢预处理对抗氧化应激诱导的PC12细胞凋亡(英文)被引量：8
- 2005年
- 氧化应激可明显地诱导细胞凋亡。本研究旨在探讨H2O2。预处理能否对H2O2诱导的PC12细胞凋亡产生保护作用及ATP 敏感性K+(ATP-sensitive potassium,KATP)通道在其中的作用。采用PI染色流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测PC12细胞凋亡。结果表明,经10 μmol/L H2O2预处理90 min的PC12细胞,分别在20、30、50和100 μmol/L H2O2作用24 h后,其细胞凋亡率明显下降,与未经H2O2预处理的PC12细胞相比,差异极显著(P<0.01),表明H2O2预处理对H2O2诱导PC12细胞凋亡具有保护作用。用10μmol/L的KATP通道激动剂pinacidil(Pin)可显著减少30和50μmol/L H2O2诱导的PC12细胞凋亡,10 μmol/L的KATP通道拮抗剂glybenclamide(Gly)则可显著地抑制甚至取消KATP通道激动剂Pin对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用,但并不影响H2O2预处理对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用;然而,当联合应用H2O2预处理与Pin时,对PC12 细胞凋亡的保护作用明显大于各自的抗凋亡作用。提示KATP通道开放不仅对H2O2诱导PC12细胞凋亡具有保护作用,而且与H2O2预处理一起产生抗PC12细胞凋亡的协同作用,但KATP通道开放可能不参与H2O2预处理的适应性保护作用。
- 唐小卿陈静唐二虎冯鉴强陈培熹
- 关键词：H2O2PC12细胞凋亡
- 大鼠前额叶锥体神经元的NMDA受体的单通道特性被引量：3
- 2002年
- 【目的】探讨大鼠前额叶皮层神经元N 甲基 D 天冬氨酸 (NMDA)受体通道的特性 ,为研究人脑前额叶锥体神经元的NMDA通道提供动物实验依据。【方法】对急性分离的大鼠前额叶的神经元进行细胞贴附式单通道膜片钳记录。【结果】前额叶神经元NMDA受体通道的开放呈现多电导状态 ,表现为 5 5 1,36 5 ,18 6 pS 3种状态 ,以 18 6 pS为优势电导。开放时间主要表现为快时程和慢时程两种状态 ,时间常数均值分别为 :(0 5 5± 0 38)ms和 (13 5 9± 3 2 6 )ms,以短时程为主。关闭时间常数为 (0 34± 0 2 7)ms和 (19 73± 2 4 1)ms。开放概率为 (0 2 5± 0 0 9)。【结论】前额叶神经元NMDA受体通道呈多电导 ,以低电导 18 6pS为优势。开放时程短者占优势 ,关闭时间短暂 ,开放概率高 ,表明前额叶锥体神经元NMDA受体通道的活动以快速短暂样开放为主。
- 王福顺冯鉴强郭瑞鲜王艳陈培熹
- 关键词：前额叶皮层N-甲基-D-天冬氨酸膜片钳技术
- BDNF基因修饰淋巴细胞的蛋白表达及对PC12细胞的增殖和H_2O_2损伤的影响被引量：2
- 2003年
- 目的 研究脑源性神经营养因子 (brain derivedneu rotrophicfactor,BDNF)基因修饰淋巴细胞的蛋白表达及对PC12细胞的增殖和H2 O2 损伤的影响。方法 采用Lipofec tAMINE将重组大鼠BDNFcDNA导入PA317细胞 ,获取高滴度的病毒上清转染大鼠淋巴细胞 ,流式细胞仪 (FCM)和免疫组化检测BDNF的表达 ,MTT法检测PC12细胞增殖 ,PI染色流式细胞仪 (FCM)检测PC12细胞凋亡。结果 BDNF基因修饰的大鼠淋巴细胞高表达BDNF蛋白 ,其培养上清可促进PC12细胞增殖并能抑制H2 O2 诱导PC12细胞凋亡。结论 BDNF基因修饰淋巴细胞能高表达和分泌具有生物活性的BDNF。
- 唐小卿冯鉴强郭瑞鲜李平阳叶美红
- 关键词：逆转录病毒脑源性神经营养因子淋巴细胞PC12细胞
- BDNF基因逆转录表达载体的构建和在淋巴细胞中的表达被引量：1
- 2003年
- 【目的】构建含脑源性神经营养因子基因(brain-derivedneurotrophicfactor,BDNFgene)逆转录表达载体并了解其在淋巴细胞中的表达,探讨治疗基因的非损伤性脑内转移的新途径。【方法】用RT-PCR方法从大鼠海马组织总RNA中扩增(cDNA)BDNF片段,应用基因重组技术将大鼠(cDNA)BDNF克隆到逆转录病毒载体pLXSN中,用限制性内切酶酶切分析和DNA测序对重组质粒进行鉴定,采用LipofectAMINE将重组大鼠(cDNA)BDNF导入PA317细胞,获取高滴度的病毒上清转染大鼠淋巴细胞,应用流式细胞仪(FCM)检测大鼠淋巴细胞BDNF的表达,噻唑蓝(MTT)法检测淋巴细胞培养上清对PC12细胞增殖的影响。【结果】扩增出大鼠(cDNA)BDNF片段,限制性内切酶酶切和DNA测序证实获得正确的重组质粒pLXSN-BDNF,BDNF基因修饰的大鼠淋巴细胞能高表达BDNF蛋白,其培养上清能促进PC12细胞增殖。【结论】成功构建了BDNF基因逆转录表达载体,BDNF基因修饰的大鼠淋巴细胞能高表达和分泌具有生物活性的BDNF蛋白,为治疗基因的非损伤性脑内转移奠定了一定基础。
- 唐小卿冯鉴强周继斌郭瑞鲜李平阳叶美红
- 关键词：脑源性神经营养因子淋巴细胞RT-PCR法
- iNOS和COX-2在过氧化氢预处理诱导的适应性细胞保护中的作用被引量：4
- 2007年
- 目的探讨H2O2预处理对PC12细胞iNOS与COX-2蛋白表达的影响及其在适应性细胞保护中的作用。方法在PC12细胞建立H2O2预处理对抗H2O2诱导细胞凋亡的实验模型,采用甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞仪(FCM)检测iNOS与COX-2蛋白表达水平。结果用10μmol.L-1H2O2预处理PC12细胞90min可明显地抑制20～100μmol.L-1H2O2作用24h后引起的细胞毒性和细胞凋亡,并可明显地促进PC12细胞iNOS与COX-2蛋白表达;选择性iNOS抑制剂AG和COX-2抑制剂NS-398分别阻断H2O2预处理诱导的抗细胞凋亡作用。结论H2O2预处理可诱导适应性细胞保护作用,其机制之一可能与促进PC12细胞的iNOS与COX-2蛋白表达有关。
- 李景田唐小卿陈秀琴职君利崔宇刘微冯鉴强
- 关键词：过氧化氢预处理INOSCOX-2
- 多巴胺对大鼠前额叶皮层锥体神经元NMDA受体通道的影响
- 2005年
- 【目的】探讨多巴胺(DA)对前额叶皮层锥体神经元谷氨酸/N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的调节作用。【方法】使用细胞贴附式膜片钳技术进行单通道记录,观察不同浓度DA对急性分离的前额叶皮层锥体神经元NMDA受体通道电流的影响。【结果】结果表明:当DA浓度为0逐渐升高到60!mol/L时,NMDA受体通道的电流幅度由(2.78+0.68)pA升高到(5.42+1.26)pA;短开放时间常数变化不明显,但长开放时间常数由(13.59+1.26)ms升高到(36.19+1.17)ms;长关闭时间常数由(19.73+1.46)ms降低到(2.67+0.75)ms;通道开放概率由0.25+0.09升高到0.56+0.25;当DA浓度继续由60!mol/L升高到100!mol/L时,NMDA受体通道的电流幅度回落到(3.56+0.79)pA,长开放时间常数回落到(14.40+1.37)ms;长关闭时间常数恢复为(17.74+1.79)ms,与对照组比较无显著性变化;通道开放概率由0.56+0.25降低到0.17+0.08。【结论】DA可以影响前额叶皮层锥体神经元NMDA受体通道的活动,而且具有浓度依赖性,低浓度有明显促进作用,高浓度则促进作用减弱,甚至有抑制作用。
- 王福顺郭瑞鲜冯鉴强李平阳陈培熹
- 关键词：前额叶皮层多巴胺NMDA受体通道膜片钳
- BDNF基因修饰淋巴细胞培养上清对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用被引量：3
- 2004年
- 【目的】研究脑源性神经营养因子基因(brain-derivedneurotrophicfactor,BDNFgene)修饰淋巴细胞对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用。【方法】MTT法检测H2O2和多巴胺(dopamine,DA)对PC12细胞生长的抑制率,Hoechst染色和PI染色流式细胞仪(flowcytometry,FCM)检测H2O2和DA对PC12细胞凋亡的诱导作用。【结果】BDNF基因修饰的大鼠淋巴细胞的培养上清可降低H2O2和DA对PC12细胞生长的抑制率并能抑制H2O2和DA诱导PC12细胞凋亡。【结论】BDNF基因修饰淋巴细胞的培养上清对PC12细胞氧化应激损伤具有保护作用。
- 黄居科唐小卿潘渊明冯鉴强陈培熹陈明振
- 关键词：PC12细胞淋巴细胞BDNF基因培养上清氧化应激损伤
- 模拟失重影响大鼠比目鱼肌梭内外肌纤维肌球蛋白重链的表达被引量：12
- 2002年
- 【目的】探讨模拟失重条件下大鼠比目鱼肌梭外肌纤维和梭内肌纤维肌球蛋白重链表达的变化。【方法】采用免疫组织化学技术 ,检测模拟失重条件下大鼠比目鱼肌梭内肌纤维及梭外外肌纤维对单克隆抗体NOQ7.5 .4.D和MY32的免疫反应性。【结果】经历模拟失重的大鼠比目鱼肌Ⅰ型纤维 (对NOQ7.5 .4.D呈阳性反应 )的构成比减少 ,Ⅱ型纤维 (对抗体MY32呈阳性反应 )的构成比增加。模拟失重 3d ,7d ,14d ,30d组Ⅰ型肌纤维分别占 86 96 % ,84 91% (P <0 0 1) ,6 9 14%(P <0 0 1) ,6 6 0 7% (P <0 0 1) ;Ⅱ型纤维分别占 16 14% ,18 2 1% (P <0 0 1) ,31 0 8% (P <0 0 1) ,32 15 % (P <0 0 1)。核袋纤维对NOQ7.5 .4.D的免疫反应性增强 ,核链纤维无改变 ,呈阴性反应 ;核袋纤维对MY32的免疫反应性减弱 ,核链纤维对MY32的反应增强。【结论】模拟失重除影响肌梭外肌纤维MHC的表达、引起肌纤维类型转换外 ,还导致梭内肌纤维MHC表达表型发生改变。
- 周继斌邢东琦冯鉴强樊小力
- 关键词：模拟失重比目鱼肌肌球蛋白重链
