国家质检总局科技计划项目(2007IK022)
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
- 相关作者：刘荭杨金先郑晓聪兰文升何俊强更多>>
- 相关机构：深圳出入境检验检疫局福建省农业科学院华中农业大学更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家高技术研究发展计划“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鲤春病毒血症病毒单克隆抗体的制备及其特性鉴定被引量：4
- 2011年
- 为获得针对鲤春病毒血症病毒(SVCV)特异性的单克隆抗体(MAb),以纯化的SVCV为抗原,免疫BALB/c小鼠。将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA法筛选获得4个能稳定分泌抗SVCV MAb的杂交瘤细胞株;4个杂交瘤细胞制备腹水的MAb效价为1∶160000～1∶640000。亚型鉴定结果表明,这些MAb分属2个亚型(1F1、3E1,IgG2a;3F5、4F9,IgG1),轻链均为Κ链。Western blot分析显示,MAb1F1、3F5、4F9能特异性地识别SVCV的N蛋白(47ku),3E1能特异性地识别SVCV的G蛋白(69ku)。采用相加ELISA法对抗原表位分析结果显示,1F1、3F5、4F9可能识别相同的表位,3E1则识别不同的表位。间接免疫荧光试验结果显示4株MAb均能对染毒病灶产生特异性的荧光染色。这些MAb的制备为SVCV免疫学检测方法的建立奠定了基础。
- 张朋刘荭陈孝煊吴志新余剑敏杜娟兰文升史秀杰郑晓聪何俊强贾鹏申斯思朱家增
- 关键词：鲤春病毒血症病毒单克隆抗体N蛋白
- 中华鳖虹彩病毒单克隆抗体的制备及其抗原表位的初步分析被引量：5
- 2009年
- 以纯化的中华鳖虹彩病毒为抗原免疫Balb／C小鼠，取免疫鼠脾细胞经杂交融合获得了8个能稳定分泌抗中华鳖虹彩病毒特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。单克隆抗体亚级份分析结果表明，Mab2A4属IgA，Mab8E1是IgG2a，其他的6株单抗Mab1D3、Mab2H1、Mab3A1、MaMB5、Mab5E1和Mab6F2均为IgG1。酶联免疫吸附剂测定（ELISA）分析表明，8株单抗均能特异性地识别中华鳖虹彩病毒，与EPC、CO、FHM等宿主细胞不产生交叉反应，腹水抗体的ELISA效价在10^5～10^6。IFA分析表明，8株单抗中仅Mab5E1没有免疫荧光反应特性，其余7株单抗均能对染毒病灶产生特异性的荧光染色。中和试验结果证实8株单抗均没有中和病毒的特性。应用Western—blotting进行中华鳖虹彩病毒的抗原表位初步分析，结果显示：Mab1D3和Mab2A4分别识别分子量为84ku和35ku中华鳖虹彩病毒结构蛋白，Mab3A1能够同时识别分子量分别为14ku和16ku的两条多肽，说明这3株单抗结合位点是非构象依赖性抗原决定簇，其余单抗不具备Western—blotting反应特性。这些结果提示上述单抗对中华鳖虹彩病毒抗原特异、灵敏，可用于中华鳖虹彩病毒的检测和结构蛋白分析。
- 朱春华刘荭刘晓东杨金先郑在予林天龙
- 关键词：中华鳖虹彩病毒单克隆抗体抗原
- 杀鲑气单胞菌单克隆抗体的制备及其特性分析被引量：1
- 2009年
- 应用杂交瘤单克隆抗体技术制备了6株分泌抗杀鲑气单胞菌杀鲑亚种的单抗细胞株,并对其特性进行分析。结果显示:6株单抗中IgM有3株,IgG1有2株,IgG2a有1株,且抗体效价为1:12800—1:51200,检测灵敏度为1.0×105—1.0×108cfu·mL-1。进一步实验证实这些单抗与其他病原菌都无交叉反应。但单抗5C7、7H6与杀日本鲑亚种有交叉反应;单抗8A2与无色亚种存在阳性反应。表明杀鲑气单胞菌亚种之间既有独特的抗原决定簇,又有共同抗原位点。制备的单抗可用于杀鲑气单胞菌的快速诊断和亚种鉴定,为该菌的进一步研究提供必要手段。
- 林娟娟陈强刘荭杨金先
- 关键词：杀鲑气单胞菌单克隆抗体特性分析
- 中华鳖虹彩病毒的纯化及分析被引量：1
- 2009年
- 为制备高纯度的中华鳖虹彩病毒，分析其免疫相关抗原，采用3种方法纯化中华鳖虹彩病毒粒子并对其结构蛋白进行了初步分析。结果表明：差速离心法回收的样品中病毒纯度差、密度低，在电镜下不易观察到病毒粒子；病毒培养物经冻融、磁力搅拌、超声处理后，进行差速离心可提高病毒的回收率，但超声处理易造成病毒结构破坏；病毒培养物经离心浓缩、匀浆、磁力搅拌处理，再通过差速和蔗糖密度梯度二步离心纯化后，在蔗糖密度为30％～40％、40％～50％和50％～60％之间分层的样品中均可观察到病毒粒子，其中，蔗糖密度为50％～60％之间回收的病毒粒子纯度最高，且结构完好。SDS—PAGE分析表明，纯化病毒至少含20条蛋白条带，分子量为50kDa的核衣壳蛋白是中华鳖虹彩病毒的高丰度蛋白。Western-blot分析结果证实大多数蛋白条带能被鼠抗中华鳖虹彩病毒高免血清特异性地识别。
- 朱春华刘荭杨金先刘晓东郑在予林天龙
- 关键词：虹彩病毒中华鳖纯化
- 鲤春病毒血症病毒糖蛋白的高效表达和纯化被引量：7
- 2010年
- 本研究从鲤春病毒血症病毒（Spring viremia of carp virus，SVCV）SVCV-741毒株克隆鲤春病毒血症病毒糖蛋白基因（sue—g），将svc-g亚克隆到原核表达载体pET-28a，转化大肠杆菌E．coli BL-21（DE3）后，用IPTG诱导培养，获得菌体总蛋白。用SVCV毒株免疫山羊所得到的抗血清作为一抗进行免疫印迹实验，结果在硝酸纤维素滤膜上检测到50～71 kDa之间的特异性免疫条带，与SVCV糖蛋白预测分子量一致，研究证明了工程茵表达获得的重组蛋白具有与SVCV毒株相同的免疫原性，也证明了该蛋白的糖基化对其免疫表位是非必需的。本研究进一步通过发酵基因工程菌和蛋白质纯化过程，获得大量的鲤春病毒血症病毒糖蛋白，为后期免疫动物获得抗血清储备了原料，也为SVCV的免疫学检测方法的建立奠定了物质基础。
- 兰文升刘荭高隆英史秀杰郑晓聪何俊强卢体康
- 关键词：糖蛋白鲤春病毒血症病毒
