安徽省自然科学基金(050430706)
- 作品数：9 被引量：18H指数：2
- 相关作者：邓松华潘卫曹广文朱秀徐凌更多>>
- 相关机构：安徽医科大学第二军医大学上海市肺科医院更多>>
- 发文基金：安徽省自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 胃癌相关基因Serpine1的RT-LAMP快速检测法被引量：8
- 2007年
- 目的建立逆转录-环介导的等温扩增快速检测高侵袭型胃癌转移相关基因。方法快速抽提肝转移胃癌患者标本的RNA用环介导的等温扩增反应(LAMP)扩增转移相关基因Serpine1,扩增条件为63℃保温30min,扩增后产物通过特异性内切酶进行鉴定。结果RT-LAMP能特异性快速的扩增目的基因。结论RT-LAMP能因其特异,快速,高效的优点可以广泛运用于肿瘤转移相关基因的检测,对临床早期诊断提供标准。
- 徐凌殷建华朱秀唐毕锋曹广文邓松华
- 关键词：胃肿瘤肿瘤
- 前列腺癌转移小鼠模型的建立及转移相关基因表达分析
- 2008年
- 目的建立前列腺癌转移小鼠模型,筛选同一标本来源的转移性和非转移性前列腺癌。方法采用皮下注射DU145细胞悬液、肾包膜下组织块移植、原位细胞悬液注射法对BNX小鼠接种(或注射)组织块(或细胞悬液),观察各种方法所致的成瘤及转移情况,并采用RT-PCR初步对比分析MAPK4、SELM、IL-6、Stanniocalcin2、Serpin1、Caveline-1、Laminin4、AL793338在小鼠体内的转移性和非转移性前列腺癌的表达情况。结果①皮下注射DU145细胞悬液的BNX小鼠均成瘤,但未发现明确转移;肾包膜下组织块移植小鼠均成瘤,肠系膜淋巴结均发生转移;而原位细胞悬液注射法小鼠均成瘤,并都伴有肠系膜、腹股沟淋巴结,3只小鼠发现肝、肺转移。②RT-PCR结果示MAPK4、SELM、IL-6、Stanniocalcin2、Serpin1、Laminin4的目的条带在前列腺转移癌中与原位癌中有差异。结论原位注射细胞悬液可能是有效的前列腺癌转移模型制作方法,采用该法在小鼠中获得转移性和非转移性前列腺癌的成功率较高。RT-PCR结果分析证实,转移灶的IL-6、MAPK4、SELM表达量与原位灶相比表达降低,Stanniocalcin2、Serpin1和Laminin4表达量相对增加。
- 朱秀翟羽佳徐凌谭晓洁张玉侠曹广文邓松华
- 关键词：前列腺肿瘤肿瘤转移动物基因表达
- 基因表达芯片分析筛选胃癌转移相关基因被引量：1
- 2008年
- 目的:筛选高侵袭型胃癌转移相关基因,探讨其在胃癌发生发展中可能通路的分子水平机制。方法:分别以年龄相近、性别相同的3例肝转移胃癌患者标本的转移灶和原发灶为实验组和对照组做高通量cDNA表达谱芯片,初选3张芯片共同上、下调基因;利用pathway V1.0分析软件寻找初筛基因中存在多种可能影响胃癌发生发展及其转归的分子通路;通过RT-PCR测定数例转移胃癌病例原发和转移灶中相关基因的mRNA转录水平。结果:通路分析筛选出来的上调基因CLDN1和下调基因UGT1A10在6组病例中经RT-PCR定性检测全部与分析结果相符。结论:pathway在芯片初选相关基因的基础上发现与疾病相关的分子机制通路及相关基因,为研究胃癌转移基因提供依据和参考。
- 徐凌朱秀殷建华张敏峰赵晋丰曹广文邓松华
- 关键词：胃肿瘤肿瘤转移寡核苷酸序列分析
- HIV-1 HXB2株Tat蛋白在大肠杆菌中的分段表达及免疫原性分析被引量：1
- 2008年
- 目的研究对人类免疫缺陷病毒Ⅰ型HXB2株调控蛋白Tat原核表达产生影响的区域和Tat蛋白重要的抗原表位。方法用PCR方法获得Tat(1-48aa)、Tat(22-72aa)和Tat(38-101aa)DNA片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)和pET32a-Tat(38-101aa),并转入E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达及纯化,SDS-PAGE鉴定表达及纯化产物。采用间接ELISA方法用兔抗pET32a-Tat抗血清对三种肽段进行免疫原性分析。结果成功构建了pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)和pET32a-Tat(38-101aa)质粒,分别表达出相对分子质量(Mr)为23×103、23×103和25×103的融合肽段,其浓度分别为4.26、3.35和5.11mg/ml。间接ELISA结果表明三种融合肽段与兔抗pET32a-Tat抗血清均呈特异性结合反应,其抗体滴度分别为1:128000、1:32000、1:64000,而抗血清与pET32a蛋白仅有较弱结合。结论半胱氨酸富集区(22-37位氨基酸)对Tat蛋白的原核表达有较显著影响;Tat蛋白的N端区、碱性区和C端区是其重要的抗原表位,其中N端区的免疫原性最强。
- 陈璐潘卫曹洁卢海妹何俊蒋少华唐萍李存枚廖文婷邓松华
- 噬菌体展示耐药突变HIV-1蛋白酶敏感切割位点六肽随机文库的构建被引量：1
- 2007年
- 目的构建耐药性突变HIV-1蛋白酶(protease PR)敏感切割位点序列体外噬菌体筛选模型,研究HIV-1蛋白酶耐药性突变与敏感切割序列的关系。方法用含随机核苷酸序列的引物PCR方法对HIV-1gag基因上的CAP2片段的PR切割位点处的氨基酸序列进行随机化,再将重组CAP2片段和NC片段拼接克隆于噬菌体展示载体LD3-pCANT-AB5S上,建立HIV-1蛋白酶靶蛋白切割位点随机化的噬菌体展示文库。结果该噬菌体展示文库库容量为2.6×106,滴度为4.1×1015TU·L-1,CAP2片段插入率为47.8%;序列分析显示切割位点中随机化的核苷酸与氨基酸均呈随机性分布。结论成功地构建HIV-1蛋白酶的敏感切割序列噬菌体筛选文库,为筛选到突变PR敏感切割序列噬菌体及研究耐药HIV-1蛋白酶抑制剂与突变PR的关系打下基础。
- 卢海妹周波潘卫贾建安王锦红温宗梅何俊陈露邓松华
- 关键词：人类免疫缺陷病毒-1蛋白酶耐药突变
- 不同转移潜能的人前列腺癌细胞原位转移模型的建立与比较被引量：1
- 2006年
- 目的建立不同转移潜能的人前列腺癌细胞转移模型,并比较其结果。方法利用人前列腺癌细胞系PC3单克隆细胞株裸鼠皮下移植瘤,通过外科原位移植技术植入BALB/c-nu/nu雄性裸小鼠,建立人前列腺癌高、低转移细胞株转移模型;并观察比较两细胞株转移模型的原位成瘤率、自发转移率、两细胞株形态学特征和转移抑制基因CD44s的表达。结果人前列腺癌高转移细胞株裸鼠原位种植后原位成瘤率100%,主动脉旁淋巴结转移率为100%,低转移细胞株裸鼠原位种植后原位成瘤率100%,主动脉旁淋巴结转移率为40%,两者主动脉旁淋巴结转移率差异有显著性(P<0·05)。高、低转移细胞株形态学特征亦不同。CD44s蛋白在人前列腺癌高转移性单克隆细胞株PC3-H中的表达强度低于低转移性单克隆细胞株PC3-L。结论遗传背景相似的人前列腺癌高、低转移细胞株原位移植转移模型为研究人前列腺癌转移机制提供了有力工具。
- 张明霞张玉侠邓松华
- 关键词：前列腺肿瘤肿瘤转移细胞系基因表达
- 噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库的构建被引量：1
- 2007年
- 目的构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选及结构和功能的研究打下基础。方法应用overlapping PCR制备Protein A的Z结构域。用含随机核苷酸序列的引物,制备对Z结构域的第10、13、27、28、31和32位氨基酸进行随机突变的定点随机突变体库。并在突变体片段两端引入KpnⅠ位点,3′端引入3个氨基酸大小随机连接肽的序列。经KpnⅠ酶切后随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S。克隆产物转化大肠杆菌TG1,辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体展示定点随机突变组合文库。结果该定点随机突变组合文库的转化子数目为6.4×106个,滴度为1.4×1015TU/L;文库中含0.72以上的阳性克隆,其中有2个单结构域的阳性克隆占0.15;15个样品的序列分析显示各突变位点和随机连接肽的氨基酸序列呈随机性分布。结论成功构建了噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,该库库容量在一级结构上具有良好的随机性和多样性,可满足体外分子进化研究的要求。
- 何俊周霞陈璐陈秋莉王锦红蒋少华陈铭卢海妹潘卫邓松华
- 关键词：基因文库体外分子进化
- 结核分枝杆菌CE复合物对人单核-巨噬细胞的功能表型的影响及其作用机制被引量：4
- 2008年
- 目的研究结核分枝杆菌早期分泌抗原CFP-10-ES-AT-6复合物（CE复合物）对人单核-巨噬细胞功能表型的影响及其作用的细胞信号传导通路。方法分别采用ELISA法以及流式细胞仪检测大肠杆菌克隆表达纯化的CE复合物在不同时间及浓度对人单核-巨噬细胞TNF-α产生对细胞表型的影响，并且应用各种细胞信号传导通路抑制剂来探讨CE复合物作用的细胞信号传导通路。结果结核分枝杆菌CE复合物能够在早期（6～8h）诱导人单核-巨噬细胞活化，大量产生TNF-α，但在晚期（〉48h），则没有此作用；细胞信号传导通路MEK1／2和p38 MAPK的选择性抑制剂SB203580、PD98059、U0126能抑制CE的这种作用；CE复合物在早期（18h）促进单核-巨噬细胞表面抗原提呈功能分子CD80、CD40的表达。结论CE复合物在感染早期可能通过激活MEK1／2和p38MAPK刺激单核巨噬细胞活化，但在晚期则没有此作用。在感染早期可能具有重要的抗结核保护作用。
- 杨鑫冯永红刘中华粟波胡忠义邓松华
- 关键词：分枝杆菌结核肿瘤坏死因子-Α
- 噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库的构建被引量：1
- 2006年
- 目的构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,研究IgA结合分子结构与功能的关系。方法基因合成IgA亲和体ZA1、ZA2片段。片段两端引入Kpn I酶切位点,3′端引入随机连接肽序列,Kpn I酶切,随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S的Kpn I克隆位点上,转化大肠杆菌TGI,辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体展示随机组合文库。结果基因合成IgA亲和体;构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,容量为3·4×107,滴度为1·6×1012TU/L;文库中含79%以上的阳性克隆;序列分析显示组合文库由ZA1、ZA2随机组合而成,连接方式符合随机连接的特点,各亲和体之间连接肽序列也呈随机分布。结论合成IgA亲和体,构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,该文库库容量、多样性和随机性可满足体外分子进化研究的要求。
- 温宗梅潘卫张玉侠周波潘欣陈秋莉周霞贾建安蒋少华邓松华
