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人胃癌细胞系BGC-823中SP细胞的耐药性研究被引量：8: 2008年; 鉴定人胃癌细胞系BGC-823中的SP(side population)细胞,并进一步研究SP细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶的耐受性。利用Hoechst33342对细胞染色,通过流式细胞仪检测及分选Hoechst低染的SP细胞;同样的方法检测5-氟尿嘧啶处理后的细胞中SP细胞比例的变化;MTT法检测分选后的SP与非SP细胞的抗药性差异。结果表明,人胃癌细胞系BGC-823中存在4%左右的SP细胞;细胞经过5-氟尿嘧啶处理后,SP细胞的比例显著升高;体外正常培养条件下SP细胞并不具备增殖优势,但分选后的SP细胞较非SP细胞显示出了更强的耐药存活能力。; 吴松洁贾晓渊钱其军; 关键词：SP细胞 ABCG2 多药耐药性

隧道纳米管:一种新型的细胞间通讯连接方式被引量：3: 2008年; 多细胞生物体的细胞间存在着细胞连接、细胞通讯等多种形式的相互作用,这对于个体的生长发育是至关重要的。最近在哺乳动物细胞间发现了一种新型的细胞间通讯连接方式,根据其形态及结构特征,这种细长的膜管被命名为隧道纳米管(tunneling nanotubes,TNTs)。TNTs一直处于形成和断裂的持续变化状态之中,在相互连接的细胞间形成了复杂的网络结构,并且可以作为细胞间交流的通道,从而在广泛的生理过程中发挥着重要的作用。TNTs在动物细胞间很可能是一种普遍存在的生物学现象。; 刘鸿王毅刚石文芳钱其军

增殖型溶瘤腺病毒SG511-pHSP70-IL24体外杀伤肝癌细胞的研究: 2011年; 研究溶瘤腺病毒SG511携带由热激蛋白70(hsp70)启动子调控IL-24构成的增殖型溶瘤腺病毒SG511-pHSP70-IL24对人肝癌细胞株的体外杀伤效果。实验采用ELISA法检测不同MOI值感染肝癌细胞SMMC-7721和Hep3B细胞3 d后IL-24的表达;MTT法检测SG511、Ad11-IL24以及SG511-pHSP70-IL24对肝癌细胞株SMMC-7721、Hep3B以及人正常成纤维细胞株MRC-5及BJ增殖的抑制作用;并通过结晶紫实验检测进一步证明联合用药对肿瘤细胞的杀伤情况。ELISA检测到SG511-pHSP70-IL24感染SMMC-7721和Hep3B细胞后,IL-24有明显表达;MTT实验结果表明SG511-pHSP70-IL24对肿瘤细胞的杀伤能力比SG511和Ad-IL24更强。同时结晶紫实验也证明了SG511-pHSP70-IL24对肿瘤细胞的杀伤能力比SG511和Ad-IL24更强。增殖型溶瘤腺病毒SG511-pHSP70-IL24相比腺病毒Ad11-IL24以及SG511,对肝癌细胞有较明显的生长抑制和凋亡诱导作用。; 王芳刘辉周秀梅钱其军; 关键词：增殖型腺病毒肝癌细胞 IL-24

携带RGD多肽的嵌合型腺病毒载体AD11-RGD-4C-EGFP的构建及其感染效率的研究被引量：1: 2010年; 目的在嵌合型腺病毒的fiber中插入具有整合素特异性的RGD肽,构建可提高腺病毒感染效率的腺病毒载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2、BEL-7404以及成纤维细胞BJ的感染效率。方法将RGD-4C插入到AD5/11嵌合型腺病毒载体fiber的HI区,与腺病毒骨架质粒pPE3共转染大肠杆菌BJ5183,同源重组产生腺病毒重组质粒(pPE3-F11-RGD-4C),该重组质粒与PDC328-EF1-EGFP共转染人胚肾293细胞进行包装,产生重组腺病毒(AD11-RGD-4C-EG-FP)。用该重组腺病毒感染HepG2、BEL-7404以及BJ细胞,通过荧光显微镜观察感染效率。结果所构建的重组腺病毒PCR扩增出1 123 bp包含目的片段的基因片段。同时,制备了高滴度的重组病毒,纯化后病毒滴度为1.3×1010pfu/ml。当MOI=10,48 h时该重组病毒对HepG2、BEL-7404及BJ细胞的感染效率明显高于对照组腺病毒(AD11-EGFP)。结论成功构建了可提高腺病毒感染效率的嵌合型腺病毒(AD11-RGD-4C-EGFP),为进一步的研究奠定了基础。; 刘辉王春红陈亚龙李林芳吴红平钱炎珍姜梨华钱其军; 关键词：腺病毒载体肝细胞癌

氧依赖性降解结构域-RANTES融合基因腺病毒表达载体的构建及体外趋化活性观察: 2009年; 目的:构建携带活化T细胞表达和分泌调节因子(regulated upon activation normal T-cell expressed and secreted,RANTES/CCL5)基因及氧依赖性降解结构域(oxygen-dependent degradation domain,ODD)融合基因的重组腺病毒,并观察其体外趋化活性。方法:PCR法将人RANTES基因与ODD融合,构建携带该融合基因的重组腺病毒SG511-CCL5-ODD;增殖实验观察重组腺病毒增殖特性,ELISA法观察常氧和缺氧条件下RANTES蛋白的表达;趋化试验观察重组腺病毒感染肝癌细胞后的趋化活性。结果:成功构建携带人RANTES-ODD融合基因的重组腺病毒SG511-CCL5-ODD;增殖实验表明重组腺病毒具有肿瘤选择性复制的特性;缺氧条件下重组病毒转染肝癌细胞后RANTES蛋白表达量均比常氧条件下高(P<0.05),显示ODD可有效调节RANTES蛋白表达;趋化试验表明重组腺病毒感染肝癌细胞具有趋化NK92细胞的作用。结论:重组腺病毒SG511-CCL5-ODD体外能有效感染肝癌细胞株HepG2和Hep3B,并在ODD调控下表达RANTES蛋白,有效发挥体外趋化NK92细胞的活性。; 黎江吴红平李林芳刘辉王春红金华君钱其军; 关键词：RANTES 腺病毒

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浙江省自然科学基金(Z205618)