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制备嵌合体小鼠实验中ES细胞的处理方法被引量：2: 2008年; 目的介绍两种制备嵌合体小鼠实验中ES细胞的处理方法。方法一种为差速贴壁分离法即消化后的ES细胞接种在明胶包被的平皿中,利用饲养层细胞与ES细胞贴壁速度的不同来分离ES细胞;另一种方法为冰水浴自然沉淀分离法,即消化后的ES细胞移入15ml离心管中冰水浴,利用细胞间自然沉淀的位置不同分离ES细胞。结果两种方法均可得到足够数量处于未分化状态的ES细胞。结论这两种方法都可以应用于制备嵌合体小鼠实验中的ES细胞处理。; 王惟于洋张梅英王禄增郑志红; 关键词：嵌合体小鼠 ES细胞

RNA干扰技术在基因治疗中的应用进展被引量：9: 2009年; RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种双链RNA分子在mRNA水平上关闭相应序列基因的表达或使其沉默的过程,在基因治疗方面有着无可比拟的优势,已成功的应用于肿瘤、病毒感染、遗传性疾病及神经系统疾病等重大疾病的治疗。本文将主要介绍siRNA基因治疗的导入方法与途径,以及在不同疾病中,RNAi技术进行基因治疗的应用。; 董婉维孙开来郑志红; 关键词：RNA干扰 SIRNA 基因治疗

GST-Fank1融合蛋白表达载体构建及表达纯化的研究: 2011年; 目的研究转录因子Fank1与GST融合蛋白原核表达载体的构建和表达。方法根据Fank1基因的DNA序列,经引物设计软件Primer Premier 5.0优化设计出上下游引物(Ⅰ,Ⅱ),同时在5′端引入BamHⅠ酶切位点,3’端引入SalⅠ酶切位点。以pdsRED-Fank1质粒为模板进行PCR扩增Fank1目的片段,经限制性内切酶酶切后连接到原核表达载体pGEX4T-2,构建成pGEX4T-2-Fank1原核表达载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3),通过异丙基硫代-β-D半乳糖苷诱导进行目的蛋白表达。结果经菌液PCR、电泳分析及测序证明成功构建了Fank1融合表达载体,融合蛋白产物经蛋白印迹显示,相对分子量为43 kDa的蛋白条带,与预期一致。结论成功构建了pGEX4T-2-Fank1原核表达载体,并在原核细胞中有表达,为进一步研究转录因子Fank1的功能奠定了基础。; 黄华亮杨葳刘佳郑志红; 关键词：融合蛋白谷胱甘肽S-转移酶

小鼠睾丸组织特异基因RNA干扰载体的构建及其表达的研究: 2008年; 目的构建并筛选小鼠睾丸组织特异基因Fank1干扰载体,为进一步研究Fank1基因功能及与Fank1基因相关男性不育的基因治疗奠定基础。方法根据Fank1基因cDNA序列,利用http://www.dharmacon.com/在线设计软件设计2条干扰序列,分别克隆至带有H1启动子的质粒载体pSuper-neo-GFP中,同时从成年B6小鼠睾丸组织扩增Fank1基因全序列,构建Fank1基因与红色荧光蛋白表达融合载体pdsRED-Fank1。采用脂质体法将2个Fank1基因干扰载体及阴性对照分别与Fank1基因表达载体共转染293T细胞,并观察siRNA对Fank1基因的抑制效应及红色荧光蛋白表达情况,分别采用RT-PCR和Western blot方法检测mRNA及蛋白质表达水平。结果经PCR检测鉴定,含干扰序列的重组质粒pSuper-sh Fank1631#,pSuper-shFank1247#及pdsRED-Fank1表达载体构建成功,测序分析完全正确。转染293T细胞36h后,荧光显微镜检查发现shFank1631、247均能明显抑制红色荧光蛋白表达,抑制效率分别为95%和90%,RT-PCR和Western blot结果表明Fank1基因在mRNA和蛋白质水平都受到显著抑制(P<0.05)。结论成功构建出小鼠睾丸特异基因干扰载体,为制备Fank1基因敲减转基因小鼠及研究Fank1基因在精子生成过程中的作用奠定了基础。; 董婉维李兆阳王惟杨葳郑志红; 关键词：RNAI 293T细胞小鼠

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国家自然科学基金(30770818)