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HIV-1 vpr基因表达载体pAFVPRA的构建被引量：2: 2002年; 目的　构建可在肝癌细胞中特异性表达人HIV 1vpr基因的重组表达载体。方法　用PCR的方法从 pBSX CYPYVPR xcTHY(简称vpr质粒 )中扩增HIV 1vpr基因片段 ,克隆到pGEM T载体中 ,构建克隆载体 pGEM T/vpr,切下vpr片段后插入到 pCI质粒中 polyA的上游 ,构建中间载体pCI/vpr ,再切下vprA(vpr+polyA)插入到pAF5 .1中AFP启动子的下游 ,从而把AFP启动子和polyA尾分别克隆到vpr基因的上游和下游 ,构建成 pAFVPRA载体。结果　成功构建了带有AFP启动子和polyA尾的载体 pAFVPRA。结论　pAFVPRA质粒构建成功后 ,可进一步通过合适的方式把HIV 1vpr基因导入肝细胞。; 郭丽王健伟史百芬黄升海赵玉琪洪涛; 关键词：VPR基因甲胎蛋白类基因表达 HIV-1 肝癌细胞

以人甲胎蛋白启动子控制表达HIV-1vpr基因的重组腺病毒诱导肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡作用的研究被引量：2: 2006年; 目的研究人甲胎蛋白(AFP)启动子控制表达HIV-1 vpr基因的重组腺病毒对AFP(+)肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡的作用,评估以该策略利用vpr进行肿瘤特异性基因治疗的可行性。方法将以AFP启动子控制HIV-1vpr表达的重组腺病毒rvAdAFP-vpr和空白载体rvAd-null分别感染AFP(+)的肝癌细胞BEL-7402和AFP(-)的肝癌细胞SMMC-7721,利用流式细胞仪检测Vpr的特异性表达和细胞周期分布,用细胞荧光染色和线粒体膜电位检测等方法观察细胞凋亡。结果与对照病毒rvAd-null相比,重组腺病毒rvAdAFP-vpr只在AFP(+)肝癌细胞中表达HIV-1Vpr,并诱导肝癌细胞的细胞周期G2期阻滞和细胞凋亡,而在AFP(-)肝癌细胞中不明显表达Vpr,不能显著诱导肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡。结论重组腺病毒rvAdAFP-vpr对于Vpr的表达是AFP表达特异性的,可有效诱导肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡,有望用于AFP(+)肝癌的基因治疗研究。; 魏强王健伟郭丽屈建国赵玉琪洪涛; 关键词：甲胎蛋白启动子 HIV-1 重组腺病毒

HIV Vpr蛋白诱导细胞凋亡研究进展被引量：2: 2003年; Vpr蛋白是HIV的一个辅助蛋白 ,可以诱导多种细胞的凋亡。目前的研究表明Vpr蛋白引起细胞凋亡主要是通过线粒体途径实现的。Vpr蛋白通过直接而且特异地与结合在PTPC中的ANT相互作用 ,改变线粒体膜通透性 ,导致凋亡诱导因子 (AIF)和细胞色素C的释放 ,激活Caspase、DNases等的级联反应 ,引起核染色质的固缩 ,最终引起细胞凋亡。; 魏强王健伟李凡洪涛; 关键词：人类免疫缺陷病毒 HIV 细胞凋亡线粒体

HIV-1蛋白酶和逆转录酶抗药基因变异检测方法的建立及临床应用被引量：3: 2000年; 目的　应用现有DNA序列分析技术对人类免疫缺陷病毒 1型 (HIV 1)的蛋白酶 (PR)和逆转录酶 (RT)基因进行简便、快速、准确的序列分析 ,在临床上为HIV 1患者治疗方案的确定提供可靠依据。方法　从HIV 1感染者血清中提取RNA ,用套式逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增HIV 1的PR和RT基因片段 ,并对此片段进行核苷酸序列分析。结果　本方法对血清中HIV 1RNA含量约 2 0 0 0拷贝 ml以上的样品都能有效扩增。在序列分析时背景干扰少 ,对 2 5 %左右的混合序列均能准确反映。通过对临床治疗病人进行动态序列分析观察 ,发现在药物治疗过程中 ,病人血浆中HIV 1RNA含量变化与PR和RT基因抗药性变异具有很大相关性。结论　PR和RT基因序列分析方法能够及时、准确地反映HIV 1患者在抗病毒药物治疗过程中病毒的变异情况。该方法的建立能在临床上能为不同患者治疗方案的确定提供直接。; 俞敏William Kabat王健伟洪涛Ram Yogev赵玉琪; 关键词：HIV-1 蛋白酶逆转录酶耐药性

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国家自然科学基金(3000761748)