广东省科技计划工业攻关项目(2007A0203006)
- 作品数：2 被引量：7H指数：1
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- 相关机构：华南农业大学广州市良种猪场更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株实时荧光定量PCR鉴别诊断方法的建立
- 根据GenBank登录的PRRSV基因序列,利用PRRSV非缺失变异株与缺失变异株NSP2基因序列特点,设计合成两对特异性引物,经RT-PCR扩增后,用T4连接酶将目的片段与pMD18-T载体连接,并转化到大肠杆菌DH-...
- 孔留五康艳梅李小康何选民张桂红
- 文献传递
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量RT-PCR鉴别诊断方法的建立被引量：1
- 2009年
- 根据GenBank收录的PRRSV基因序列,利用PRRSV经典变异株与缺失变异株NSP2基因序列特点,设计合成两对特异性引物,经RT-PCR扩增后,用T4连接酶将目的片段与pMD18-T载体连接,并转化到大肠杆菌DH-5a株感受态细胞。提取的质粒经PCR、酶切和测序鉴定,证实为PRRSV缺失变异株与经典变异株的阳性重组质粒。将重组标准质粒进行10倍系列稀释后作为模板,通过实时荧光定量PCR法(Real-timePCR),建立了PRRSV缺失变异株与经典变异株的标准曲线及其直线回归方程,并确定其最佳读板温度。该方法具有线性关系好、特异性强、敏感性高、重复性好等特点,为鉴别诊断及分析PRRSV缺失变异株与经典变异株感染猪体内病毒的绝对含量提供了技术手段。
- 孔留五张桂红姜增固康艳梅秦宏阳曹宗喜张得玉张翔峰
- 关键词：PRRSV实时荧光定量
- 猪生殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP检测方法的建立被引量：6
- 2009年
- 针对美洲型猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守的N蛋白基因设计了一套RT-LAMP的检测引物,通过优化反应条件,建立了一种检测PRRSV的RT-LAMP诊断方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法能够特异地检测美洲型PRRSV,其最低检测限为10个拷贝,而RT-PCR的最低检出限为1×104个拷贝。分别用建立的RT-LAMP法与RT-PCR法对临床50份样品进行检测,结果二者的符合率在96%以上,呈现很好的一致性。表明,建立的RT-LAMP法可应用于PRRSV的快速检测。
- 张得玉康艳梅张翔峰秦宏阳孔留五曹宗喜张桂红
- 关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒
