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精子发生过程中的基因表达被引量：1: 2009年; 肖琴于洁; 关键词：基因表达减数分裂转录因子组蛋白生殖细胞

小鼠睾丸组织移植物二次移植后的生长发育研究被引量：3: 2009年; 目的通过将第一次移植后的移植物进行再移植,探讨二次移植的睾丸组织生长发育情况,为今后采用睾丸组织裸鼠移植模型探讨性成熟期较长动物(包括人类)睾丸组织的体外成熟提供实验依据。方法将1～2d龄昆明小鼠睾丸组织植入去势裸鼠背部,于移植后2周取出移植物,并将其立即移植到另一只去势裸鼠背部,并在二次移植4周后取出移植物,制作HE染色切片,在光镜下观察二次移植后睾丸组织的生长发育情况;同时采用检测鱼精蛋白-2 mRNA的方法对二次移植物的生长发育程度进行鉴定。结果移植2周后的小鼠睾丸组织再次移植后,仍可观察到移植物中的血管组织再生以及生精小管的继续发育:二次植入的44块组织经4周生长发育后收集到22个二次移植物,回收率为50%;在仅含有精原细胞和精母细胞的移植物二次移植后收集到的移植物中,观察到了圆形精子细胞甚至长形精子细胞,并在所有的二次移植物中检测到鱼精蛋白-2 mRNA的表达。结论新生小鼠睾丸组织移植物转移到另一只受体中后可继续存活并生长发育。; 于洁尹美珺万汇涓龙霞张芳婷徐安平吴夏枫房家智; 关键词：睾丸

睾丸组织异体异位移植研究进展被引量：3: 2006年; 自从2002年《自然》杂志发表了第1篇用同种或异种睾丸组织移植进行的生精细胞体外发育研究以来,该技术被广泛应用于不同种类动物(包括人类)睾丸组织的体外成熟的探讨。这种采用免疫缺陷动物作为受体,同种或异种睾丸组织为供体的技术与其他生精细胞体外成熟方法相比具有环境条件较易控制、重复性较好等优点。迄今为止,在用小鼠、仓鼠、猫、兔、猪、山羊、牛和恒河猴等动物睾丸组织进行的移植研究中,未成熟生精细胞在作为受体的裸鼠体内均发育到精子阶段,并通过卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)技术,用发育成的小鼠、兔精子分别产生了下一代。本文总结了供体组织的种类和年龄,受体的性别、完整性、免疫状况和移植部位以及移植时间对移植物发育的影响,概述了近几年来采用该技术所进行的睾丸组织移植研究发展现状,并对该技术的应用以及存在的问题进行了讨论。; 于洁张芳婷蔡志明房家智; 关键词：睾丸组织异种移植

异体异位发育睾丸组织的蛋白质组图谱构建及差异蛋白分析被引量：5: 2009年; 目的应用蛋白质组学实验方法对在异体异位生长发育的新生小鼠睾丸组织进行差异蛋白分析,从而对睾丸组织体外移植模型用于生精细胞发育研究的可行性提供进一步的理论依据。方法以新生小鼠睾丸组织为供体,免疫缺陷小鼠为受体进行组织移植,移植8周后收集移植物组织,采用双向凝胶电泳(2-DE)分离移植物组织总蛋白,同时分离8周正常小鼠睾丸组织总蛋白作对比分析,运用Im ageM aster 2D E lite 5.0图像分析软件识别移植物组织与正常组织差异表达的蛋白质点,应用基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALD I-TOF-MS)获取肽质量指纹图谱(PMF),检索数据库鉴定差异表达的蛋白质点。结果正常睾丸组织和移植物组织双向电泳图谱的平均蛋白质点数分别为(1 326±15)个和(1 561±20)个,3次重复实验的蛋白质点位置重复性较好。通过比较两者的双向凝胶电泳图谱,得到表达差异量较大的蛋白质点21个。选取6个仅在正常睾丸组织中有表达的蛋白质点进行质谱和生物信息学分析,鉴定出的6种蛋白质,除血红蛋白α1链(Hbα-α1)外,其他5种蛋白均为在小鼠睾丸中有较高表达的蛋白质,包括A激酶锚定蛋白结合的精子蛋白(ASP)、磷脂过氧化氢物谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)、精子蛋白(Sp17)、天门冬酰胺酶样蛋白(ASRGL1)和过氧化物氧化还原因子4(Prdx4)。结论在本实验中,从异体异位生长发育成熟的新生小鼠睾丸组织中检测到5种在睾丸中特异性高表达蛋白质的缺失,这些蛋白质主要在精子运动、精子顶体形成以及精子的受精等功能中发挥作用。; 于洁廖东江叶静张芳婷龙霞万汇涓尹美珺杨会林房家智蔡志明; 关键词：双向凝胶电泳

小鼠原始生精细胞裸鼠皮下移植动物模型的制作被引量：6: 2005年; 目的制作睾丸组织异体异位移植动物模型,并观察原始生精细胞在异体异位继续生长、发育情况。方法将鼠龄为1～2d昆明小鼠睾丸组织移植至去势裸鼠背部(n=29),于移植后30～110d取出移植物,观察移植物的生长情况、表观形状以及各级生精细胞、生精上皮发育的期相情况。结果术后29只受鼠全部存活,在其背部均观察到移植物的生长,移植物直径由移植前的(0.73±0.05)mm增加到(6.75±0.73)mm,湿重由移植前(5.67±0.72)mg增加到(113.12±78.23)mg,受鼠皮肤血管已广泛深入到移植物内;光镜下可见移植物中生精小管结构清晰,移植物与受鼠皮肤之间建立了紧密连接,移植物中含有各级生精细胞及精子,在过碘酸Schiff(PAS)染色的移植物标本可见整个精子发生周期(从StageⅠ到StageⅫ)各阶段的生精细胞。结论新生小鼠睾丸组织移植到去势裸鼠背部能够继续生长、发育,可作为研究生精细胞增殖发育规律和精子发生调控机制的动物模型。; 于洁蔡志明叶静张芳婷万汇涓房家智宗书东王介东; 关键词：动物模型皮下移植裸鼠生精上皮皮肤血管生精小管

新生小鼠睾丸组织移植到裸鼠体内不同时期移植物的组织学观察被引量：14: 2007年; 目的通过测量不同发育时期移植物的重量及观察其中生精小管结构和生精细胞组成情况，对去势雄性小鼠中移植的新生小鼠睾丸组织生长和发育进行系统观察。方法将出生1．2d昆明小鼠睾丸移植到7—12周去势雄性免疫缺陷小鼠背部；在移植后不同时间段（分为3d、1—11周和3．6月16个组）取出移植物，计算移植物的回收率，测定移植物重量，观察移植物中生精小管结构及生精细胞的组成。结果从移植的450个新生小鼠睾丸组织，回收到405个移植物，总回收率为90．0％。重量比移植前增加约40倍。移植物中生精小管的发育及各阶段生精细胞出现时间与在正常小鼠中所见基本相同。移植时间超过8周后，生精上皮的退化现象显著增加。结论将新生小鼠睾丸组织异位移植到受体背部后的发育进程与在体情况相同，第1次生精波结束后的时间应为获取精子细胞和精子的最佳时间，大约是移植后5．7周。; 于洁万汇涓蔡志明房家智张芳婷叶静尹美; 关键词：免疫缺陷小鼠小鼠睾丸

小鼠精原细胞体外分化为精子细胞的研究被引量：4: 2006年; 目的探讨在辅以外源生殖激素混合培养的小鼠睾丸细胞中，精原细胞向精子细胞的转化。方法采用7～8d龄小鼠睾丸组织，以组合酶消化法制备睾丸细胞，在含重组卵泡刺激素（r-FSH）和睾酮的培养基中进行体外培养；定期观察细胞的生长和形态变化；用分子生物学和流式细胞技术对生长各阶段细胞进行分析。结果培养5d即可观察到形态与大小类似于圆形精子细胞，7d后可见带有鞭毛与变形的精子细胞；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）结果显示，培养前细胞的睾丸特异蛋白激酶（TESK1）与鱼精蛋白2（Prm2）mRNA表达阴性，培养9与17d细胞TESK1与Prm2 mRNA表达均阳性；DNA倍体分析显示，培养5d细胞有单倍体峰出现，并随培养天数增加而增加。结论在体外混合培养的小鼠睾丸细胞中加入外源生殖激素可以使精原细胞转化为精子细胞。; 叶静于洁龙霞张芳婷万汇涓尹美珺房家智蔡志明; 关键词：精原细胞精子细胞单倍体鞭毛

受体性别及完整性对睾丸组织移植物发育的影响被引量：7: 2007年; 目的以免疫缺陷小鼠为受体,探讨受体的性别及完整性对未成熟睾丸组织移植物生长发育的影响。方法将作为受体的免疫缺陷小鼠分为4组:雄性正常组、雄性去势组、雌性正常组和雌性去势组。移植供体组织均为新生1～2d的昆明小鼠睾丸,移植部位为受体背部皮下。移植7周后取材,计算移植物的回收率并称重,对各组移植物中生精小管结构和生精细胞的组成情况以及生精细胞的染色体进行观察分析。结果移植7周后,从4组受体中获得的移植物体积和重量与移植前相比均有明显增加。染色体观察显示,所有4组移植物中生精细胞染色体数量均为正常2倍体(40条)和单倍体(20条);HE染色结果显示,所有4组受体取出的移植物中均发现带有长形精子的生精小管,其中雄性正常组、雄性去势组、雌性正常组和雌性去势组分别有1、5、1和3只受体中观察到含有长形精子的生精小管。结论新生昆明小鼠睾丸组织分别移植到去势的、未去势的雄性和雌性免疫缺陷小鼠背部7周后,未成熟的生精细胞均可发育成为长形精子。; 于洁房家智万汇涓张芳婷尹美珺; 关键词：免疫缺陷小鼠

小鼠睾丸移植物中3种生精阶段特异性基因的表达被引量：5: 2007年; 目的采用逆转录-聚合酶链反应,探讨新生小鼠睾丸组织移植到裸鼠体内后,3种阶段特异性基因,缺失型无精子基因(Dazl)、磷酸甘油激酶2(Pgk2)和鱼精蛋白-2(Prm2)在不同发育阶段移植物中的表达情况。方法将180只出生1～2d昆明小鼠睾丸移植到60只7～12周去势雄性免疫缺陷小鼠背部;在移植后不同时间段(分为3d、1周～8周和12周10个组)取出移植物,对在发育不同阶段表达的3种基因出现的时间及表达情况进行分析测定,并与相应各年龄段正常小鼠睾丸中的基因表达相比较。同时进行组织形态学观察,对比各种基因出现的时间与小鼠睾丸发育周期的吻合性。结果在10个时间段取出的移植物中,所测定的3种基因表达趋势与在正常昆明小鼠睾丸中所见基本相同,并与小鼠发育周期基本吻合。结论新生小鼠睾丸组织移植到免疫缺陷小鼠体内后,生精细胞的发育在形态学和几种受试基因出现的时间上与在正常小鼠中表现均相似。从而对该睾丸组织移植模型用于生精细胞异体异位生长发育研究及基因调控机制研究的可行性提供了进一步的理论依据。; 于洁蔡志明龙霞万汇涓叶静张芳婷尹美珺房家智; 关键词：免疫缺陷小鼠

新生小鼠睾丸组织异体异位移植物中精子形态及功能的研究: 2006年; 目的采用卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)技术探讨新生小鼠睾丸组织异体异位移植到裸鼠体内后所生成精子的受精能力。方法将含有原始生精细胞的新生1-2 d小鼠睾丸组织异体异位移植到BALB/c-nu/nu免疫缺陷小鼠背部皮下。8周后取出移植物,通过常规染色和电镜技术对生精小管中生精细胞组成和形态进行观察;以薄层明胶水解法检测精子顶体蛋白酶活性;采用ISCI技术检测移植物中具有成熟形态精子的受精能力。结果移植物的HE染色发现,新生小鼠睾丸组织在裸鼠体内已启动并进行精子发生过程,生精小管中含有包括精子在内的所有类型生精细胞;移植物组织经处理后,可计数到具有镰刀头状的长尾精子约1×103个/mg移植物;透射电镜标本中观察到的精原细胞和精母细胞均具有正常超微结构;薄层明胶水解法检测可观察到顶体蛋白酶呈阳性反应的精子;ICSI结果显示,单纯ICSI处理组与ICSI+电激活组均有受精和卵裂现象发生。结论仅含有原始生精细胞的新生小鼠睾丸组织在异体异位移植到裸鼠体内后,可以产生形态正常并具有受精能力的精子。; 张芳婷于洁蔡志明房家智万汇涓叶静尹美珺; 关键词：睾丸组织精子卵胞浆内单精子显微注射新生小鼠

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深圳市科技计划项目(200404101)

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