山西省自然科学基金(2010011050-6)
- 作品数：7 被引量：16H指数：2
- 相关作者：杨自权梁大川白洁玉王震康宁更多>>
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- 敲减SOX9基因对骨髓间充质干细胞表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:构建小鼠S0X9基因干扰的慢病毒载体,体外转染小鼠骨髓间充质干细胞,观察小鼠SOX9基因在小鼠间充质干细胞中的表达影响。方法:针对小鼠SOX9基因序列,设计RNA干扰靶点序列,合成含干扰序列的双链DNAoligo连入酶切后的RNA干扰载体上,构建Lenti-SOX9-siRNA-EGFP载体,鉴定扩增。利用SOX9基因沉默载体体外转染小鼠骨髓间充质细胞,利用倒置荧光显微镜观察转染是否成功,并通过流式细胞仪测定转染效率。同时利用RT-PCR和Western Blot检测小鼠SOX9基因的表达。结果:成功构建了Lenti-SOX9-siRNA-EGFP,SOX9基因沉默慢病毒载体,能高效转染小鼠骨髓间充质细胞。RT-PCR和Western Blot检测显示经SOX9基因转染的小鼠骨髓间充质细胞基因表达沉默。结论:利用慢病毒结合RNA干扰技术敲减小鼠SOX9基因成功地转染小鼠骨髓间充质干细胞,且SOX9基因在小鼠骨髓间充质干细胞中发生了沉默,这为SOX9修复软骨损伤的进一步研究奠定了基础。
- 梁大川白洁玉杜少华程鹏王震康宁杨自权
- 关键词：SOX9慢病毒属转染
- 慢病毒介导SOX9基因转染骨髓间充质细胞中的基因表达被引量：2
- 2013年
- 目的:构建携带小鼠SOX9基因的慢病毒载体,体外转染小鼠骨髓间充质细胞,观察小鼠SOX9基因在小鼠间充质细胞中的表达。方法:从含有小鼠SOX9基因的质粒提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增目的基因。连接目的基因与经Age-Ⅰ酶切线性化的慢病毒载体,转化感受态的大肠杆菌对质粒进行扩增,筛出阳性转化子,经293T细胞包装,收集病毒后,通过基因测序和限制性核酸内切酶酶切的方法对质粒进行鉴定。Lenti-SOX9-EGFP体外转染小鼠骨髓间充质细胞,利用倒置荧光显微镜观察转染是否成功,并通过流式细胞仪测定转染效率。同时利用RT-PCR和Western Blot检测小鼠SOX9基因的表达。结果:成功构建了携带SOX9基因慢病毒载体,Lenti-SOX9-EGFP能高效转染小鼠骨髓间充质细胞。RT-PCR和Western Blot检测显示经SOX9基因转染的小鼠骨髓间充质细胞表达目的基因产物。结论:利用慢病毒介导SOX9基因成功地转染小鼠骨髓间充质细胞,而且SOX9基因在小鼠骨髓间充质细胞中得到表达,这为SOX9修复软骨损伤的进一步研究奠定了基础。
- 白洁玉梁大川程鹏杨自权卫小春
- 关键词：骨关节炎细胞介导免疫慢病毒属SOX9基因骨髓间充质细胞
- 小鼠间充质干细胞三系分化中SOX9与Ⅱ型胶原mRNA的定量
- 2013年
- 背景:研究表明,软骨中的主要成分Ⅱ型胶原的基因-Col2a1在软骨细胞中的表达与SOX9的浓度呈剂量依赖正相关关系。目的:通过成骨、成软骨、成脂肪诱导干细胞分化,分析3种分化过程及不同时期的SOX9与Ⅱ型胶原mRNA含量的变化,探讨SOX9在不同时空分布的表达规律及与Ⅱ型胶原的相关关系。方法:取4周龄昆明小鼠骨髓间充质细胞,体外培养得到间充质干细胞并传达至第3代,对间充质干细胞进行流式细胞仪鉴定细胞表型,共分3组每组设3个时间段,通过成骨、成软骨、成脂肪3种诱导培养液对3组细胞进行诱导,另设不进行诱导的细胞作为对照组。分别在诱导3,7,14 d后收集提取细胞的总RNA,通过RT-PCR进行SOX9与Ⅱ型胶原的mRNA定量检测,同时对诱导后的细胞进行染色、免疫荧光染色,观察其分化状态及相关统计分析。结果与结论:第3代骨髓间充质干细胞生长良好,流式细胞仪鉴定细胞表型证实为干细胞,对诱导后细胞进行染色、免疫荧光染色结果证实细胞分化为骨、软骨、脂肪细胞。经RT-PCR检测,在3组诱导分化细胞中SOX9 mRNA含量由高到低分别是成软骨、成骨、成脂肪,Ⅱ型胶原mRNA含量由高到低分别是成软骨、成脂肪、成骨。在成软骨分化中SOX9在3,7 d表达不断升高,14 d呈下降趋势。Ⅱ型胶原在3,7,14 d均逐渐升高。在成骨分化中SOX9 mRNA含量随着时间推移而增加,而Ⅱ型胶原则随着时间推移而不断降低。在成脂肪分化中SOX9 mRNA表达与对照组比较差异无显著性意义(P>0.05);而Ⅱ型胶原的表达没有规律可循,时间点的延伸及检测未观察到。结果提示,SOX9在软骨分化中作用优于成骨、成脂肪组,且软骨分化中SOX9与Ⅱ型胶原存在相关性,可能在软骨分化的早期Ⅱ型胶原随着SOX9的变化而变化;且软骨分化和成骨分化过程中SOX9可能起到了一个互相协调促进平衡的关键作用。
- 梁大川白洁玉杜少华程鹏康宁王震黄强开杨自权
- 关键词：干细胞间质干细胞
- 血浆组织因子途径抑制物水平与肺血栓栓塞症相关性研究被引量：1
- 2011年
- 目的探讨血浆组织因子途径抑制物(TFPI)水平与肺血栓栓塞症(PTE)的关系。方法选择PTE患者35例,健康对照组34名。采用全自动血凝分析仪检测TFPI的活性、酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行TFPI抗原测定。结果 PTE患者血浆TFPI活性、截短TFPI抗原、总TFPI抗原和全长TFPI抗原与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 PTE患者血浆TFPI活性及其抗原活性可能与PTE发病无明显相关性。
- 王崇刚关志明刘秀娥张玲侯丽虹
- 关键词：肺栓塞凝血致活酶
- 组织因子途径抑制物基因多态性在肺栓塞中的研究被引量：2
- 2011年
- 目的探讨组织因子途径抑制物(TFPI)基因多态性与肺血栓栓塞症(PTE)的关系。方法选择PTE患者35例,健康对照组34名。采用聚合酶链反应(PCR/RT-PCR)检测PTE组和健康对照组TFPIC-399T、T-287C基因型及等位基因频率,结果经测序证实。结果 PTE组C-399T纯合突变型TT、杂合子突变型CT和正常纯合子CC与健康对照组之间差异无统计学意义(P>0.05);T和C等位基因型频率与健康对照组比较差异无统计学意义。PTE组T287-C杂合子突变型CT、纯合突变CC和正常纯合子CC与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);T和C等位基因频率分布与对照组比较,差异也无统计学意义(P>0.05)。结论 TFPI基因C-399T、T287-C多态性可能与PTE无相关性。
- 王崇刚赵文燕张玲刘秀娥侯丽虹
- 关键词：肺栓塞组织因子途径抑制物
- 慢病毒介导的Sox9基因在兔骨髓间充质干细胞的过表达促进软骨损伤修复被引量：11
- 2015年
- 目的 :明确在体内Sox9基因过表达的兔骨髓间充质干细胞对于关节软骨损伤修复的作用。方法:以慢病毒介导的Sox9基因转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),体外检测软骨特异性分子,将新西兰大白兔24只48个膝关节随机分为3组,动物麻醉后,双侧股骨滑车处的关节面上用直径4 mm的钻头钻孔,深度3 mm,穿透软骨下骨,造成全层关节软骨损伤,将转染后的细胞植入体内用以修复全层关节软骨损伤,实验组植入BMSCs-(Lenti-Sox9-EGFP)-藻酸钙复合物,实验对照组植入BMSCs-藻酸钙复合物,空白对照组只钻孔。术后6、12周分别进行光镜、电镜观察,以及HE、免疫组织化学染色检测软骨的修复程度。结果:经Sox9基因转染后的细胞在3 d时,Sox9基因表达最高,随后下降。转染后3 d,Ⅱ型胶原开始表达,到14 d时达到最高。表明Sox9过表达启动了兔骨髓间充质干细胞的软骨分化。组织学观察显示,实验组术后6周缺损处有透明软骨样组织填充,术后12周缺损处软骨和软骨下骨修复良好。两对照组,缺损处由纤维组织填充。免疫组织化学显示,修复组织内Ⅱ型胶原,免疫组化染色结果阳性强于两对照组。组织学评分结果显示实验组软骨损伤修复各时间点效果明显优于两对照组,差异有统计学意义。结论:Sox9基因过表达的兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)促进软骨损伤的修复。
- 王震梁大川白洁玉康宁冯军宇杨自权
- 关键词：SOX9基因骨髓间充质干细胞软骨
- 慢病毒载体在基因治疗关节软骨损伤中的实验应用
- 2013年
- 基因治疗关节软骨损伤是传送目的基因至预定靶细胞,并且直接表达该基因的性质,达到修复治疗软骨损伤的目的。基因载体是传递目的基因进入靶细胞的介导工具。但大部分基因载体由于转染效率低、表达时间短、免疫反应大等诸多问题而运用新型的慢病毒载体使其介导目的基因获得持续表达,从而使关节软骨损伤修复顺利进行。慢病毒载体在多用性和安全性上展示了令人满意的特点,在基因工程中的运用更加安全,因此慢病毒载体成了最有潜力的基因工程工具。它不仅能应用于实验室操作,还能应用于疾病的诊断和治疗方面。本文按慢病毒载体的发展简介、慢病毒载体的生物安全性、在基因治疗软骨损伤中的应用以及展望四个方面对其予以综述。
- 杨自权梁大川
- 关键词：基因工程关节软骨慢病毒载体
