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人外周血树突状细胞MicroRNA表达谱的鉴定与分析被引量：5: 2012年; 目的:探讨MicroRNA在专职抗原提呈细胞(APC)树突状细胞(DC)中的表达数种与数量分析。方法:从健康人外周血中分离单核细胞,经重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhlL-4)刺激,待成长为成熟DC后,提取总RNA,用miRCURY LNATMmicroRNAArray进行分析。结果:经分析显示DCs中高表达(标准值>2)的miRNA有85个,其中显著高表达的有hsa-miR-720、hsa-miR-142-3p、hsa-miR-1260b、hsa-miR-1290、hsa-miR-22、hsa-miR-21、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-1246、hsa-miR-4284、hsa-miR-24、hsa-miR-491-3p、hsa-miR-3613-3p、hsa-miR-23b、hsa-miR-1280、hsa-miR-342-3p、hsa-miR-1260、hsa-miR-23a、hsa-miR-29b、hsa-miR-16等。结论:提示以上miRNA分子在DCs参与的免疫应答中可能发挥着重要作用。; 董辉魏军贾伟赵志军赵婧张兆波徐广贤; 关键词：树突状细胞 MICRORNA 表达谱

小鼠miRNA-203慢病毒过表达载体的构建及病毒包装与滴度测定被引量：3: 2011年; 目的构建microRNA-203(miR-203)过表达慢病毒载体,并对其进行病毒包装、鉴定与滴度测定。方法利用化学合成miR-203发夹前体结构RNA(small hairpin RNAs,hRNA),并将其克隆入pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定;利用脂质体将鉴定的阳性重组pSicoR-miR-203表达载体、pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91三个质粒共转染到HEK-293T细胞,分别在48h和72h收获上清,包装产生慢病毒。将所得病毒悬液梯度稀释后感染293T细胞,检测病毒滴度,并将制备的病毒颗粒尾静脉注射Balb/c小鼠,检测miR-203在小鼠体内的表达与分布情况。结果酶切及测序结果证明成功构建了pSicoR-miR-203重组质粒,并成功的包装成慢病毒,病毒滴度为5×107 TU.mL-1。重组病毒在Balb/c小鼠肝脏、脾脏、肺脏、肾脏均有表达。结论成功构建miR-203慢病毒表达载体,获得高效表达miR-203的慢病毒颗粒,为miR-203靶基因筛选及其功能的研究奠定了基础。; 黄学兰徐广贤贾伟王妍柏董辉魏军; 关键词：慢病毒绿色荧光蛋白

pri-miR-21重组腺病毒载体构建及其对TLR4基因调控的研究被引量：8: 2012年; 目的:构建能高效表达成熟miR-21小分子的腺病毒载体,探讨其对TLR4基因的靶向调控关系。方法:以正常小鼠基因组DNA为模板,PCR扩增pri-miR-21基因,克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中经PCR、酶切及基因测序分析正确无误后,与pAdEasy-1腺病毒骨架质粒进行同源重组,并利用293A细胞,包装成pri-miR-21重组腺病毒感染HeLa细胞,通过Western blot检测TLR4的蛋白表达水平,验证miR-21与TLR4靶向调控的关系。结果:经PCR、酶切、测序及GFP表达证实,成功构建携带pri-miR-21基因的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒。Western blot证实,miR-21可抑制TLR4蛋白的表达。结论:所制备的小鼠pri-miR-21重组腺病毒,可以高效表达成熟miR-21小分子,能够抑制靶基因TLR4的表达。; 赵婧徐广贤贾伟董辉张一琳赵志军魏军; 关键词：重组腺病毒载体靶向调控

miR-21在巨噬细胞对MRSA感染过程中免疫应答的调控被引量：1: 2012年; 目的建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的体外感染模型,研究miR-21的生物学功能及其在巨噬细胞中对MRSA感染过程中的免疫应答调控机制,以期为临床提供更多关于MRSA感染的相关免疫应答信息,为临床治疗提供参考数据和新的治疗思路。方法利用前期冻存的高效表达成熟miR-21的重组腺病毒颗粒pAd/pri-miR-21感染小鼠巨噬细胞RAW264.7。利用MRSA感染已经侵染腺病毒颗粒pAd/pri-miR-21的细胞,建立感染模型,Real-Time PCR检测TLR4、NF-κB和IL-6 mRNA水平的表达。结果 miR-21可下调TLR4基因的表达,降低TLR/4Myd88/NF-κB下游分子NF-κB、IL-6的活性。结论证实miR-21对TLR/4Myd88/NF-κB信号通路具有负向调控作用,在MRSA感染的巨噬细胞的免疫调控中发挥着重要的作用。; 徐广贤赵婧贾伟董辉张一琳魏军; 关键词：重组腺病毒靶向调控

miRNA-21/pG-super真核表达载体构建及其在肺泡巨噬细胞RAW264.7中的表达: 2010年; 为了研究miRNA-21在免疫细胞中的调控作用,试验构建了miRNA-21过表达载体,并将其成功转染到RAW264.7细胞中。结果表明:miRNA-21在RAW264.7细胞中获得了大量表达,说明miRNA-21/pG-super真核表达载体构建成功。; 赵锡兰汤建中杨凤琴徐文锦赵婧徐广贤; 关键词：真核表达 MIRNA-21 肺泡巨噬细胞

TLR4红色荧光蛋白融合载体的构建与表达: 2011年; 目的构建在哺乳动物细胞中表达的含Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)基因的红色荧光蛋白融合表达载体(pDsRed1-N1/TLR4),并观察在细胞内的表达情况。方法应用PCR扩增鼠TLR4全基因,将其克隆至红色荧光蛋白载体pDsRed1-N1中,重组质粒经PCR、酶切以及序列分析正确无误后,转染到Hela细胞中,并利用Western blotting鉴定TLR4蛋白在细胞中的表达。结果重组pDsRed1-N1/TLR4融合蛋白在Hela细胞中持续高表达,经连续观察发现48h红色荧光表达量最高。结论成功构建带有红色荧光蛋白的TLR4基因表达载体,为研究TLR4在细胞内的相关生物学功能及与mircoRNA之间的关系提供了方便有力的工具。; 赵婧徐广贤贾伟吴若芬师志云魏军; 关键词：基因表达红色荧光蛋白

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国家自然科学基金(30960275)