国家高技术研究发展计划(102-08-04-01)
- 作品数：6 被引量：25H指数：3
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- 相关机构：军事医学科学院扬州大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 端粒酶hEST2基因为靶的反义寡核苷酸体外抗肿瘤活性评价被引量：5
- 2002年
- 根据端粒酶在肿瘤细胞中活性较高而在正常细胞中不表达的特性,针对端粒酶催化亚基hEST2mRNA的二级结构设计了12条反义寡核苷酸,以脂质体介导进行转染,MTT染色计算细胞生长抑制率,筛选出具有较强抗肿瘤活性的反义寡核苷酸hEST212,进一步对反义寡核苷酸进行了抗肿瘤特异性、抗瘤谱和抗肿瘤作用持续性分析.结果表明,反义寡核苷酸hEST212在体外细胞水平具有良好抗肿瘤活性,有望成为一种新型抗肿瘤候选药物;同时提示端粒酶催化亚基hEST2是研究肿瘤药物的潜在靶点.
- 王升启林莉陈忠斌林汝仙陈苏红管伟王小红
- 关键词：端粒酶反义寡核苷酸抗肿瘤活性抗肿瘤药物
- 硫代反义寡核苷酸对裸鼠异植瘤HCV 5′NCR基因表达的抑制作用
- 2001年
- 目的 在HCV 5′NCR转基因细胞模型HepG2.9706细胞建立成功的基础上，采用裸鼠异植瘤模型进行HCV特异性硫代反义寡核苷酸(HCV363、HCV279及HCV349)的体内活性评价。 方法 将HepG2.9706细胞接种于4～6周龄的雌性BALB/C裸鼠的侧腹皮下，动物随机分组，约1周后，采用腹腔注射途径，开始给药。 结果 针对HCV 5′NCR的硫代反义寡核苷酸HCV363、HCV279及HCV349对异植瘤细胞内HCV 5′NCR调控荧光素酶表达具有明显的序列特异性抑制作用，抑制率分别为80.4%、78.6%及47.9%。三个不同浓度的HCV363作用结果表明随着药物浓度的增加，HCV363对荧光素酶基因的表达抑制活性明显增强，最大抑制率可达82.7%。 结论 该研究提示反义寡核苷酸有可能成为HCV感染治疗的新途径。
- 王小红王升启管伟毛秉智
- 关键词：丙型肝炎病毒基因表达裸鼠
- 反义寡核苷酸对丙型肝炎病毒调控基因表达的体外抑制活性研究被引量：13
- 1999年
- 为探讨反义寡核苷酸（ Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎｓ） 对丙型肝炎病毒（ Ｈ Ｃ Ｖ） 的抑制活性，研究和开发新型抗 Ｈ Ｃ Ｖ 药物。采用 Ｈ Ｃ Ｖ ５′ Ｎ Ｃ Ｒ 调控荧光素酶基因的稳定表达细胞株 Ｈｅｐ Ｇ２９７０６ ，评价了３ 条针对 Ｈ Ｃ Ｖ 调控基因的 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ，即 Ｈ Ｃ Ｖ３６３ 、 Ｈ Ｃ Ｖ３４９ 及 Ｈ Ｃ Ｖ２７９ 。将 Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ 包封的 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 与 Ｈｅｐ Ｇ２９７０６ 细胞株每天作用５ 小时，连续３ 天后检测荧光素酶活性。结果提示，在 Ｈｅｐ Ｇ２９７０６细胞中，三种 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎｓ 均具有特异性的剂量依赖性抑制活性。浓度在０５μｍｏｌ／ Ｌ 时， Ｈ Ｃ Ｖ３６３ 、 Ｈ Ｃ Ｖ３４９ 及 Ｈ Ｃ Ｖ２７９ 对 Ｈ Ｃ Ｖ５′ Ｎ Ｃ Ｒ 调控荧光素酶表达抑制率分别为６１ ％ 、５５ ％ 及４８ ％ 。 Ｈ Ｃ Ｖ３６３ 连续作用８ 天，其抑制率可达８１ ％ 。上述资料论证了 Ｈ Ｃ Ｖ３６３ 、 Ｈ Ｃ Ｖ３４９ 及 Ｈ Ｃ Ｖ２７９ 在 Ｈ Ｃ Ｖ５′ Ｎ Ｃ Ｒ 调控荧光素酶基因的稳定表达细胞中对 Ｈ Ｃ Ｖ 调控基因具有明显的抑制活性。
- 王小红王升启李梦东朱宝珍
- 关键词：丙型肝炎病毒反义寡核苷酸细胞株荧光素酶
- HCV 5'NCR转基因小鼠模型的初步建立被引量：3
- 2002年
- 目的 为进行反义核酸抗ＨＣＶ药物的体内活性评价。方法 以含ＣＭＶ启动子的ＨＣＶ ５＇ＮＣＲ与荧光素酶基因的融合基因为转基因片段，经显微注射导入ＩＣＲ小鼠受精卵原核，由移植鼠获６８只仔鼠，取鼠尾组织经ＰＣＲ方祛鉴定转基因整合鼠，取整合鼠的子代阳性鼠的肝肾组织采用ＲＴ—ＰＣＲ方法进行ｍＲＮＡ表达鉴定，同时取其心、肝及肾组织进行荧光素酶活性检测。结果 共有１３只Ｇ０代阳性整台鼠，整合率为１９．２％；有３只整合鼠后代的肝肾组织中有ｍＲＮＡ表达；有１个转基因小鼠系心、肝、肾组织中显示荧光素酶活性。该系小鼠在外形、生长速度及繁育方面与正常小鼠无异。结用 ＨＣＶ ５＇ＮＣＲ转基因小鼠模型的初步建立提示ＣＭＶ启动子启动转录的ＨＣＶ ５＇ＮＣＲ－荧光素酶融合基因构件在转基因小鼠体内能够表达，这为ＨＣＶ ５＇ＮＣＲ转基因小鼠模型的进一步研究奠定了基础。
- 王小红郭鹏管伟成勇王升启
- 关键词：转基因小鼠动物模型
- 寡核苷酸自动合成试剂的研究进展被引量：2
- 2000年
- 主要介绍近几年来核酸自动化固相合成试剂的研究进展。
- 文思远王升启
- 关键词：寡核苷酸固相合成保护基活化剂化学合成
- 丙型肝炎病毒5’NCR转基因细胞模型及在反义核酸药物筛选和评价中的应用被引量：2
- 2001年
- 为了进行以基因为靶的抗丙型肝炎病毒(HCV)药物的筛选及评价,将HCV5＇NCR-C基因与荧光素酶基因的融合基因片段插入pCI-neo表达载体,通过PCR扩增、酶切反应及荧光素酶瞬间表达活性鉴定,获得HCV 5＇NCR调控荧光素酶的稳定表达质粒pHCV-neo4,将其转染HepG2细胞,经C418筛选,从150个克隆中获得一个高荧光素酶活性表达的细胞株HepG2.9706.该株细胞内HCV片段的DNA及mRNA检测均呈阳性,转基因拷贝数为140.利用该细胞株,通过脂质体介导,对3条针对HCV调控基因的反义寡核苷酸(ASODNs)即HCV363,HCV349,HCV279进行了活性评价,结果显示,三种ASODNs均具有特异性的剂量依赖性抑制活性,浓度在0.5μmol/L时,三者对HCV 5＇NCR调控荧光素酶表达抑制率分别为61％,55％及48％.该研究提示反义寡核苷酸有可能成为治疗HCV的新途径.
- 王小红王升启管伟毛秉智
- 关键词：丙型肝炎病毒反义寡核苷酸荧光素酶药物筛选药物评价
