国家高技术研究发展计划(2012AA022208)
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
- 相关作者：石鹏君卢海强姚斌曹云鹤陈轶群更多>>
- 相关机构：中国农业科学院饲料研究所中国农业大学湖南省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学天文地球更多>>
- 一种酸性木聚糖酶在毕赤酵母中的分泌表达及体外活性评价研究被引量：1
- 2013年
- 通过构建硫色曲霉酸性木聚糖酶基因xynA串联双拷贝工程菌,提高酶的发酵活力。10 L发酵罐中,双拷贝菌株发酵活力达3 574 U/mL。重组木聚糖酶的最适催化温度为50℃,最适反应pH为2.2～3.4,在pH 1.7的酸性缓冲液下保持100 min,酶活残留70%以上。重组木聚糖酶对胃蛋白酶和胰蛋白酶也具有较好的耐受性。该木聚糖酶在低pH条件下的高催化活性、耐酸性及蛋白酶耐受性,使之具有较好的应用前景。通过体外模拟猪胃肠道环境以快速评价重组酶的作用效果。试验以小麦型日粮作为基础日粮,设计4个处理组,重组酶的添加量分别为0 U/kg、2 000 U/kg、4 000 U/kg和6 000 U/kg,每个处理5个重复,使用SDS-Ⅱ单胃动物仿生消化系统模拟猪的胃肠道环境消化试验日粮,消化后的残渣烘干后测定其总能、粗蛋白质、中性洗涤纤维含量以计算其消化率。结果表明,添加重组酸性木聚糖酶显著提高了总能、粗蛋白质(线性和二次;P<0.01)和中性洗涤纤维的消化率(线性和二次;P<0.05)。重组酶的最适宜添加量为4 000 U/kg。
- 杨雯涵郭晓晶陈轶群吕俊楠谢飞曹云鹤
- 关键词：毕赤酵母体外法
- 绵羊瘤胃细菌阿拉伯糖异构酶基因多样性的初步研究
- 2015年
- L-阿拉伯糖异构酶可以催化醛酮糖的异构化反应,将D-半乳糖转化为D-塔格糖,从而在动物营养与食品应用研究中获得重视。动物瘤胃是一个特殊的厌氧环境,而瘤胃微生物含有大量的多糖降解酶的新颖基因。初步分析了绵羊瘤胃液中细菌来源的阿拉伯糖异构酶基因的多样性。以饲喂后4h的瘤胃液的宏基因组为模板,通过兼并PCR技术和内切酶方法获得了61条与已知序列相似性达68%~98%的阿拉伯糖异构酶基因片段,并对38条差异片断（相似性低于95%）进行聚类分析。结果表明普雷氏菌来源的L-阿拉伯糖异构酶基因在绵羊瘤胃中占有绝对优势（36/38）,而来自于Catonella morbi和Marinilabilia salmonicolor的L-阿拉伯糖异构酶基因则数量稀少（2/38）。研究结果不但丰富了L-阿拉伯糖异构酶的基因资源,并确定了普雷氏菌在绵羊瘤胃的重要性。
- 张三燕马锐石鹏君黄火清徐波
- 关键词：瘤胃D-塔格糖基因多样性
- Achaetomium sp.Xz8来源的甘露聚糖酶Man5Xz8热稳定性的研究
- 2015年
- 嗜热真菌Achaetomium sp.Xz8来源的甘露聚糖酶Man5Xz8和Humicola sp.Y1来源的嗜热甘露聚糖酶Man5A氨基酸序列一致性高达90.0%,然而两者的酶学性质尤其是最适温度和热稳定性却存在着很大的不同。Man5Xz8的最适温度为50℃,仅在30℃下保持稳定,而Man5A最适温度为70℃,且在50℃下具有良好的热稳定性。为研究不同区域关键氨基酸位点对甘露聚糖酶热稳定性的影响,以Man5Xz8为研究材料,通过生物信息学方法分析,分别构建了单点突变体V124I及△SG。实验结果表明,突变体V124I及△SG和原酶Man5Xz8具有相似的最适p H和最适温度,但在热稳定性方面较原酶有很大提高:在50℃下处理10 min后,突变体V124I的相对剩余酶活力较原酶Man5Xz8提高了26.9%,突变体△SG在50℃下处理1 h保持稳定。通过对甘露聚糖酶不同区域氨基酸位点的研究,发现了与酶热稳定性相关的关键结构区域及位点,为以后更好的研究第5家族的甘露聚糖酶提供了一定的理论指导。
- 刘赟卢海强石鹏君谢响明
- 关键词：甘露聚糖酶嗜热微生物热稳定性生物信息学
- α-半乳糖苷酶对生长猪生长性能及营养物质体内外消化率的影响被引量：5
- 2015年
- 本试验旨在探讨日粮不同仪一半乳糖苷酶添加水平对生长猪生长性能和营养物质表观消化率的影响，并研究仿生酶法对酶制剂评价试验的准确性。试验选用180头生长猪（杜×长×大），试验初始体重为（18．45±2．00）kg，按照随机区组试验设计，分为5个处理，每个处理6个重复，每个重复6头猪（公、母各半）。日粮d一半乳糖苷酶添加量为0、100、200、300、400U／l（g，试验期为24d。仿生酶法使用相同处理，每个处理5个重复，每个重复1根模拟消化管。结果表明：相对于其他处理组，添加300U／kg α-半乳糖苷酶显著提高了平均日采食量和平均日增重（P〈0．05）；随着α-半乳糖苷酶添加量的增加，大部分营养物质的体内外消化率呈二次提高（P〈0．05）；仿生酶法的消化率与体内消化率高度相关。本试验证明，18~33kg生长猪的该α-半乳糖苷酶最适宜添加水平为300U／kg，且仿生酶法可准确预测体内消化率，用于酶制剂的体外评价试验。
- 陈轶群杨雯涵郭晓晶韩帅娟杨勇智曹云鹤
- 关键词：Α-半乳糖苷酶消化率
- Achaetomium sp.Xz8甘露聚糖酶在毕赤酵母中的表达及其酶学性质分析被引量：7
- 2015年
- 甘露聚糖酶作为最主要的半纤维素酶类现已被广泛地应用在饲料、造纸、洗涤剂、食品及石油开采等领域。本研究从高温真菌Achaetomium sp.Xz8菌株中利用兼并引物和Thermal asymmetric interlaced PCR（Tail-PCR）的方法克隆获得一个新的糖苷水解酶5家族的甘露聚糖酶基因（man5Xz8）。基因全长1 239bp,序列分析发现其编码412个氨基酸和1个终止密码子,预测的信号肽序列为N端的20个氨基酸。将成熟蛋白序列克隆到毕赤酵母分泌型表达载体p PIC9中,利用甲醇诱导重组酵母菌表达目的蛋白,经SDS-PAGE电泳分析,表达蛋白分子量约55.0 k Da。对其酶学性质进行测定,Man5Xz8的最适p H值为5.0,在p H值9.0可以保持40%以上的酶活性,在p H值5.0~9.0具有良好的p H稳定性。最适作用温度为50℃,并对SDS具有较高的耐受性。以角豆胶为底物,Man5Xz8的比活、Km及Vmax值分别为101.6 U·mg-1、4.4 mg·m L-1、128.2μmol·min-1·mg-1。因此,Man5Xz8为后期研究甘露聚糖酶的工业应用和酸碱催化机制提供了良好的材料。
- 李文革石鹏君卢海强姚斌张祺玲戴良英
- 关键词：甘露聚糖酶克隆毕赤酵母酶学性质
- 嗜酸真菌Bispora sp.MEY-1酸性糖苷水解酶的产酶优化及在动物饲料中的应用被引量：1
- 2014年
- 嗜酸真菌Bisporasp.MEY-1可以分泌多种酸性糖苷水解酶。以不同的农业废弃物和副产品为碳源诱导该菌产酶以提高液体发酵效率并降低生产成本,结果表明0.5%的魔芋粉和9%的麦麸/玉米芯粉/豆粕混合物诱导效果最佳,木聚糖酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶、纤维素酶、淀粉酶、果胶酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖苷酶的产量分别为15、50、3.7、5.7、3.2、0.6、3.4、0.1、1.8U·ml-1。菌株MEY-1最适产酶pH为3,温度为30℃。与优良的商业糖苷水解酶生产菌株Trichoderma reesei RUT C30相比,菌株MEY-1分泌的糖苷水解酶偏酸,且在模拟胃肠道条件下保留了更多的木聚糖酶和葡聚糖酶活性,可降低大麦/豆粕饲料的黏度,在动物饲料工业中具有良好的应用前景。
- 马锐柏映国罗会颖
- 关键词：糖苷水解酶动物饲料
- 嗜酸糖苷水解酶研究进展
- 2013年
- 随着极端微生物及极端酶的广泛研究,嗜酸酶因其在极端酸性环境中具有高的酶活性和稳定性而倍受关注,并取得了较大的研究进展。嗜酸糖苷水解酶是嗜酸酶中最重要的一类,在生物能源、饲料、食品等工业中具有重要的应用前景。综述了重要嗜酸糖苷水解酶,包括嗜酸淀粉酶、嗜酸纤维素酶、嗜酸木聚糖酶和甘露聚糖酶在基因的挖掘、表达、分子改良嗜酸机制研究以及应用等方面国内外的研究进展,展望了嗜酸糖苷水解酶未来可能的研究方向和发展前景。
- 罗会颖姚斌范云六
- 关键词：极端酶
