国家自然科学基金(30371177)
- 作品数：11 被引量：59H指数：5
- 相关作者：陈由强叶冰莹陈如凯王冰梅黄庆煌更多>>
- 相关机构：福建师范大学中华人民共和国农业部福建农林大学更多>>
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- pQE30-bgln原核表达质粒的构建和鉴定被引量：2
- 2005年
- 构建重组原核表达质粒pQE30-bgln使之可以在大肠杆菌中表达以获得β-葡糖苷酶,用于提高从植物中提取白藜芦醇的得率.以克隆质粒pUCP67为模板,用降落PCR的方法扩增β-葡糖苷酶基因片段(bgln).利用原核表达载体pQE30构建pQE30-bgln重组质粒,用酶切电泳验证重组结果的正确性,测序检测质粒重组后序列情况.PCR结果显示扩增片段2.2 kb,与预期相同.重组质粒酶切后显示其大小约5.6kb,大小及酶切图谱与预期相同.经测序发现插入片段读码框正确.可用于原核表达的pQE30-bgln质粒构建成功.
- 潘海芳王冰梅叶冰莹黄骐陈如凯陈由强
- 关键词：Β-葡糖苷酶原核表达白藜芦醇
- 应用RNA原位杂交技术研究马尾松针叶中银松素合酶的基因表达被引量：5
- 2006年
- 以马尾松(Pinus massonianaLamb.)银松素合酶(PS)基因为模板,体外转录合成带地高辛标记的反义RNA全长及特异探针,并用这2个探针与马尾松针叶组织石蜡切片进行原位杂交,研究该基因在马尾松针叶中的表达特性以及外界诱导因素对该基因表达的调节特性。结果表明,该基因的转录表达主要集中在针叶的韧皮部;紫外线照射和酵母提取液处理均可使该基因的转录水平明显增加。
- 黄庆煌叶冰莹黄国强郭晋隆陈由强陈如凯
- 关键词：马尾松RNA原位杂交石蜡切片
- 花生白藜芦醇合酶基因转化单子叶植物表达载体的构建
- 2007年
- 构建了花生白藜芦醇合酶基因(RS)转化单子叶植物的表达载体,该表达载体含有ub i启动子和内含子,能启动该基因在单子叶植物中高效地表达.通过PCR反应扩增出目的片段,连接到克隆载体Pub i35s上,切下含ub i和RS约3 000 bp的片段连接到植物表达载体pCAM B IA-1 380上.经PCR和酶切检测,结果与预期相同,经测序确定插入片段读码框正确.该表达载体可用于单子叶植物高效的表达.
- 许玉芬叶冰莹陈由强王冰梅黄庆煌林志楷陈如凯
- 关键词：花生白藜芦醇合酶基因UBI单子叶植物
- pVT102U/α-bgln重组真核表达质粒的构建和鉴定被引量：1
- 2007年
- 构建重组真核表达质粒pVT102U/α-bgln使之可以在酿酒酵母中表达以获得β-葡糖苷酶,用于提高从植物中提取白藜芦醇的得率.以含有从黑曲霉中获得的编码β-葡萄糖苷酶(bgln)成熟肽的cDNA的克隆质粒pMD19T-bgln为模板,用PCR的方法扩增β-葡糖苷酶基因片段(bgln),利用真核表达载体pVT102U/α构建pVT102U/α-bgln重组质粒,PCR结果显示扩增片段约2.6 kb,与预期相同.用酶切电泳验证重组结果的正确性,重组质粒酶切后显示其大小约10 kb,大小及酶切图谱与预期相同.测序检测质粒重组后序列情况,经测序发现插入片段两端序列无改变,且读码框正确.pVT102U/α-bgln质粒构建成功.
- 林志楷叶冰莹潘海芳陈由强陈如凯
- 关键词：Β-葡萄糖苷酶真核表达
- 马尾松银松素合酶基因启动子区的克隆及特征分析被引量：2
- 2008年
- 银松素合酶(pinosylvin synthase,PS)是合成银松素类植物抗毒素的关键酶。本文根据前期工作所获得的PS基因序列,设计基因特异引物,利用连接介导的染色体步行技术,从马尾松总基因组中扩增PS基因上游的启动子区;通过PLAN-CARE等分析软件对5′侧翼区近700 bp进行启动子特征分析,预测启动子区调控元件。结果表明,在翻译起始密码子上游167 nt处可能存在TATA-box。此外还发现3个GATA-box(-260 nt、-295 nt、-386 nt和-295 nt)和若干个TGAC-like序列。
- 王冰梅郭晋隆叶冰莹许莉萍陈由强
- 关键词：基因克隆染色体步行启动子分析
- MPLC测定虎杖中白藜芦醇含量被引量：8
- 2006年
- 建立测定虎杖中白藜芦醇含量的反相中压高效液相色谱分析方法。实验采用SOURCE 5RPC ST4．6／150预装拄，以乙腈：水（体积比30：70V／V）溶液为流动相、流速1mL/min、检测波长308nm。结果表明白藜芦醇对照品浓度在0．6～1．6mg／mL时，浓度与峰面积呈良好的线形关系（R=0．9919）；加样回收率为103．0～90．4％，RSD=7．21％。采用中压高效液相色谱法测定虎杖中自藜芦醇含量，操作方便，准确性和实用性好。
- 张凌燕叶冰莹黄骐陈由强陈如凯
- 关键词：虎杖白藜芦醇
- 马尾松银松素合酶基因转化双子叶植物表达载体的构建及鉴定
- 2008年
- 以马尾松为材料,在获得马尾松银松素合酶基因的基础上,构建了该基因转化双子叶植物的表达载体,该表达载体含有35S启动子和NOS终止子,能启动基因在双子叶植物中高效地表达.设计并合成分别含有Bgl和BstE酶切位点的上下游引物,通过PCR反应扩增出含有该酶切位点的银松素合酶基因cDNA全序列,酶切后连接到pCAMBIA1301植物表达载体上.经PCR鉴定、酶切分析及DNA测序证实cDNA片段大小、序列以及读码框的正确性.最后通过电击将表达载体转化农杆菌LBA4404,为进一步研究银松素合酶基因的功能奠定基础.
- 王冰梅张积森黄庆煌叶冰莹陈如凯陈由强
- 关键词：双子叶植物
- 长叶榧(Torreya jackii Chun)遗传多样性分析被引量：11
- 2004年
- 利用RAPD技术分析了长叶榧(TorreyajackiiChun)的遗传结构,用18个引物对来自福建省泰宁县的3个不同居群的66个长叶榧样本进行分析。结果显示,长叶榧群体水平的多态位点百分率达87%,居群水平的多态位点百分率分别为83%、68%和80%。群体水平上的Nei基因多样性指数为0 2479,居群水平上分别为0 2182、0 1684和0 1881。群体水平上的平均杂合度达到0 2447,居群水平上分别为0 2215、0 1729和0 1950。30 35%的遗传变异存在于居群间,69 65%的遗传变异存在于居群内。长叶榧居群的基因流量为1.6899,显示长叶榧仍具有通过群体间的基因交流来防止遗传漂变造成的群体分化的能力。
- 叶冰莹庄振宏陈由强黄丰陈如凯
- 关键词：RAPD资源保护
- 花生白藜芦醇合酶基因的DNA克隆及序列分析被引量：15
- 2005年
- 白藜芦醇合酶(resveratrol synthase,RS)是合成白藜芦醇的关键酶.通过PCR方法从花生基因组DNA中分离出白藜芦醇合酶基因,将其克隆到pMD18-T和pBluescript Ⅱ KS(+)载体并测序,获得全长1 537 bp的片段.序列分析表明,此序列含有2个外显子和1个内含子,编码区由389个氨基酸组成,其相对分子质量为42 800.该白藜芦醇合酶氨基酸368～378位点上存在芪合酶家族的特征位点GVLFGFGPGLT.
- 王冰梅潘海芳叶冰莹黄骐朱锦懋陈如凯陈由强
- 关键词：花生白藜芦醇合酶基因克隆
- 银松素合酶基因地高辛标记RNA探针的合成被引量：1
- 2006年
- 目的:体外转录合成银松素合酶(PS)基因地高辛标记反义RNA探针。方法:通过双酶切把PScDNA全长序列接到pBlueskriptⅡKS(+)的多克隆位点上;同时,经由NCBI比对确定PScDNA的特异序列,设计含有SalⅠ和XbaⅠ这2个酶切位点的上、下游引物,用PCR法扩增含有该位点的目的片段,并连接到pBlueskriptⅡKS(+)的多克隆位点上;最后利用pBlueskriptⅡKS(+)上的启动子T7,用T7RNA聚合酶在体外转录合成地高辛标记PS全长及特异序列的反义RNA探针。结果:通过对构建探针的单、双酶切,PCR及电泳鉴定,表明成功合成了PS基因地高辛标记的全长及特异序列的反义RNA探针。结论:RNA探针的合成为后续马尾松PS基因表达的RNA原位杂交研究打下了基础。
- 郭晋隆叶冰莹黄庆煌黄国强许玉芬林志楷陈由强陈如凯
- 关键词：探针马尾松
