国家自然科学基金(81070425)
- 作品数：12 被引量：41H指数：5
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- DS/Cu对急性髓系白血病干细胞增殖与凋亡影响及其机制的探讨被引量：7
- 2013年
- 目的:探讨双硫仑(disulfiram,DS)单药及DS联合Cu(DS/Cu)在体外对白血病干细胞的影响及其分子机制。方法:应用流式细胞仪分选KG1a细胞中具有LSCs特性的CD34+CD38-亚群;MTT检测DS和DS/Cu对CD34+CD38-KG1a细胞的抑制增殖作用;Annexin-Ⅴ/PI法检测DS及DS/Cu对CD34+CD38-KG1a细胞的诱导凋亡作用;蛋白质印迹法检测药物处理后NF-кb通路和JNK通路蛋白表达的变化。结果:CD34+CD38-亚群占KG1a细胞的(59.4±6.2)%,流式细胞分选后的CD34+CD38-细胞可达(93.16±2.7)%,其中(65.3±6.4)%处于G0/G1期。DS和DS/Cu能抑制CD34+CD38-KG1a细胞增殖能力,24h的IC50分别为(0.54±0.18)μmol/L和(0.21±0.03)μmol/L,DS/Cu的作用显著强于DS,P=0.036。DS和DS/Cu对CD34+CD38-KG1a细胞均有诱导凋亡的作用,0.05、0.5和5μmol/L的DS和DS/Cu作用细胞24h后凋亡率分别为〔(7.69±3.44)%、(15.06±4.58)%、(32.67±6.06)%〕和〔(28.83±6.34)%、(42.33±3.21)%、(58.93±1.53)%〕,DS/Cu诱导CD34+CD38-KG1a细胞凋亡的比例显著高于DS单药,P<0.01;DS及DS/Cu均能抑制p65蛋白及下游蛋白c-myc、Survivin的表达、并上调磷酸化JNK及下游转录因子p-c-jun的表达,DS/Cu的作用更加显著。结论:DS在体外能抑制LSCs增殖及诱导其凋亡,Cu可以显著增强这种作用,其作用机制与抑制NF-κb通路及激活JNK通路相关。
- 王诗韵查洁董慧娟余乐李蓉蔚张妍琰史鹏程徐兵
- 关键词：白血病干细胞双硫仑CD34+JNK
- 低浓度雷公藤甲素增强去甲氧柔红霉素杀伤急性髓细胞白血病干细胞的能力被引量：2
- 2014年
- 目的探讨低浓度雷公藤甲素(triptolide,TPL)能否增强去甲氧柔红霉素(idarubicin,IDA)杀伤急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)干细胞的能力及与Nrf2通路的关系。方法流式细胞仪从KG1a细胞株中分选CD34+CD38-亚群,将其作为AML干细胞模型;MTT检测TPL单药组、IDA单药组、TPL+IDA组处理AML干细胞72 h后细胞抑制率和CI指数;Western blot检测IC20浓度的TPL(5 nmol/L)、IC50浓度的IDA(27 nmol/L)单药及上述浓度的TPL联合IDA作用AML干细胞后Nrf2蛋白表达水平的变化;实时荧光定量PCR检测各组处理后Nrf2及其下游基因NQO1、GSR、HO-1的mRNA表达水平的变化。结果 MTT结果显示TPL和IDA单药对AML干细胞具有一定的增殖抑制作用,72 h的IC50值分别为(20.48±1.60)nmol/L和(285.20±13.74)nmol/L;而小剂量TPL(IC20值,5 nmol/L)与不同浓度IDA联合作用于AML干细胞后的增殖抑制作用显著高于IDA单药,IC50值也从IDA单药的(285.20±13.74)nmol/L下降到双药联合(27.01±0.73)nmol/L,差异有统计学意义(P<0.01)。联合作用指数CI值提示两药合用具有强协同作用。Western blot检测结果显示TPL联合IDA处理AML干细胞后Nrf2蛋白表达水平降低。定量PCR检测结果显示,TPL联合IDA处理AML干细胞后Nrf2及其下游基因NQO1、GSR及HO-1的mRNA表达水平均显著下降(P<0.01)。结论低浓度TPL能显著增强IDA对AML干细胞的杀伤作用,其机制可能与下调Nrf2通路相关。
- 何涵柳约坚陈菲莉查洁周勇周淑芸徐兵
- 关键词：雷公藤甲素
- 双硫仑联合Cu抑制伯基特淋巴瘤Raji细胞移植瘤生长的动物实验被引量：3
- 2016年
- 目的 探讨双硫仑（DS）联合铜（Cu）对人伯基特淋巴瘤Raji细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及分子机制.方法 每只裸鼠给予全身2GyX线照射2 min,于背部近腋下处皮下接种对数生长期Raji细胞1×10^7个,建立Raji细胞裸鼠移植瘤模型;18只造模成功的裸鼠按数字表法随机分为三组：对照组、DS组、DS/Cu组;观察不同用药组裸鼠移植瘤生长的情况,计算肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,比较三组移植瘤体积和质量.免疫印迹法检测不同用药组处理后移植瘤组织中p-JNK、c-jun蛋白表达.结果 DS组、DS/Cu组和对照组裸鼠移植瘤的体积分别为（67.71±2.15） mm3、（33.35±7.74） mm3、（246.40±42.88） mm3,肿瘤质量分别为（43.35±4.22）mg、（18.05±2.88）mg、（91.30±27.27）mg,三组间差异具有统计学意义（F=27.579,P=0.000;F=16.369,P=0.000）.多重比较结果显示,DS组、DS/Cu组裸鼠移植瘤的体积和质量与对照组比较差异均具有统计学意义（均P＜ 0.05）;DS/Cu组移植瘤体积和质量均低于DS组（均P＜ 0.05）.DS组和DS/Cu组抑瘤率分别为63.48％和80.24％.DS和DS/Cu处理后移植瘤细胞出现了凋亡的改变,DS/Cu组更加明显.DS和DS/Cu处理后p-JNK、c-jun蛋白表达均上调,其中DS/Cu组上调更加明显.结论 DS/Cu可抑制伯基特淋巴瘤Raji细胞裸鼠移植瘤生长,其机制可能与活化JNK通路有关.
- 查洁周勇邓漫漫骆宜茗谢泗停徐兵
- 关键词：双硫仑伯基特淋巴瘤JNK信号通路
- 双硫仑联合葡萄糖酸铜治疗急性髓系白血病的动物实验研究被引量：2
- 2014年
- 近年来随着化疗方案的改善和干细胞移植的应用,急性髓系白血病（AML）的疗效已经得到了极大改善,完全缓解（CR）率可达70％～80％,但患者耐药和化疗药物的不良反应仍然是影响其疗效进一步提高的主要原因,研发新药物往往面临着花费昂贵、临床试验周期长等问题,因此从价廉且不良反应小的传统药物中开发具有抗白血病作用的“新用途”引起了广泛的关注.
- 董慧娟李蓉蔚郑忠信何涵周勇邓漫漫李银王相朦周淑芸徐兵
- 关键词：急性髓系白血病双硫仑动物抗白血病作用
- 雷公腾内酯与多柔比星诱导耐药白血病细胞凋亡协同作用及其机制的探讨被引量：7
- 2014年
- 目的:以耐多柔比星(adriamycin,ADM)的人急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)耐药细胞株HL60/ADM为研究对象,探讨IC20浓度雷公腾内酯(triptolide,TPL)能否提高ADM诱导耐药白血病细胞凋亡及其与Nrf2通路的关系。方法:流式细胞仪检测空白对照组、IC20浓度TPL单药组、ADM单药组和TPL联合ADM组处理HL-60/ADM后细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测各个处理组作用后,Nrf2及其下游基因醌氧化还原酶(quinone oxidoreductase,NQO1)、谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GSR)及血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)的表达水平变化;蛋白质印迹法检测各处理组作用后Nrf2蛋白表达变化。结果:TPL单药组细胞凋亡率为(5.28±0.80)%,与空白对照组的(7.09±0.46)%比较差异无统计学意义,P=0.226;但该浓度TPL可使ADM组细胞凋亡率由(19.55±1.70)%提高到(72.62±4.83)%,是ADM单药组的3.71倍,P<0.001。空白对照组、TPL单药组、ADM单药组及双药联合组Nrf2mRNA表达水平分别为1、0.742±0.052、0.619±0.042和0.241±0.010,NQO1分别为1、0.363±0.075、0.228±0.053和0.050±0.034;GSR分别为1、0.268±0.042、0.231±0.106和0.038±0.017;HO-1分别为1、0.495±0.023、0.282±0.099和0.048±0.036;各用药组Nrf2及其下游基因NQO1、GSR及HO-1的mRNA表达水平较对照组均出现显著下调,P<0.001;其中双药联合组下调程度最大。蛋白质印迹法结果显示,用药组及联合组Nrf2表达水平较对照组均有不同程度下调,其中联合组下调最为明显。结论:IC20浓度雷公腾内酯可显著提高ADM诱导耐药白血病细胞凋亡,其分子机制与下调Nrf2通路有关。
- 陈菲莉柳约坚李蓉蔚王诗韵董慧娟周淑芸徐兵
- 关键词：HL-60ADM凋亡
- 双硫仑/铜通过MAPK通路诱导凋亡逆转白血病细胞多柔比星耐药的研究被引量：6
- 2012年
- 目的:探讨丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)通路诱导凋亡在双硫仑/铜逆转耐多柔比星的人急性白血病细胞株(HL60/ADM)耐药分子机制中的作用。方法:流式细胞仪检测加入MAPK通路抑制剂SP600125后多柔比星单药组、双硫仑/铜单药组及双硫仑/铜联合多柔比星组HL-60/ADM凋亡细胞比例的改变;倒置显微镜下观察上述各个处理组作用后HL60/ADM细胞24h后形态学变化;蛋白质印迹法检测上述各组作用HL60/ADM细胞后JNK、磷酸化JNK(p-JNK)、c-Jun、磷酸化c-Jun(p-c-Jun)和Bcl-2蛋白表达变化。结果:SP600125将双硫仑/铜联合多柔比星组凋亡细胞比例从(73.24±10.58)%降至(40.70±6.03)%,差异有统计学意义,t=6.218,P=0.025。形态学观察显示,多柔比星和双硫仑/铜单药组HL60/ADM细胞凋亡特征不明显,双硫仑/铜联合多柔比星组出现明显的细胞凋亡现象,且SP600125能减轻双硫仑/铜联合多柔比星组细胞的凋亡程度。蛋白质印迹法显示,双硫仑/铜联合多柔比星处理HL60/ADM细胞后MAPK通路中磷酸化-JNK及其下游分子c-Jun和磷酸化c-Jun表达较其他组显著增加并能被SP600125显著抑制;此外,双硫仑/铜联合多柔比星还能下调抗凋亡Bcl-2蛋白的表达。结论:双硫仑/铜可通过MAPK通路诱导凋亡逆转HL60/ADM对多柔比星耐药。
- 史鹏程张妍琰查洁刘秉珊黄芬徐兵
- 关键词：双硫仑铜HL-60/ADM逆转耐药MAPK通路
- 初治急性髓系白血病患者Bcl11a基因表达水平及其与预后的关系被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨急性髓系白血病（AML）患者Bcl11a基因表达水平及其临床意义.方法 通过实时荧光定量PCR方法检测80例初治AML患者及16例对照组Bcl11a基因的表达水平,分析其表达水平与疾病特征及临床疗效之间的关系.结果 初治AML患者Bcl11a表达水平高于对照组[0.039（0～ 0.504）比0.014（0.002 ～ 0.086）,P=0.004].以80例初治AML患者Bcl11a基因表达量的中位数作为分界点,将患者分为Bcl11a高表达组和低表达组各40例.Bcl11a低表达组AML患者中位年龄低于高表达组患者（29.5岁比41.0岁）,而初治AML患者在不同分层的性别、FAB分型、外周血象、骨髓原始细胞比例、遗传学危险度分层、免疫分型CD34表达间Bcl11a基因表达水平差异均无统计学意义（均P＞0.05）.Bcl11a基因低表达组患者完全缓解率高于高表达组[90％（36/40）比53％（21/40）,P=0.000],中位生存时间延长（268.0d比101.5 d,P=0.042）.结论 Bcl11a基因表达水平和AML患者年龄、疗效和预后存在一定的关系,Bcl11a基因高表达的AML患者预后较差.
- 董慧娟郑忠信何涵周勇邓漫漫李银王相朦郭绪涛刘澎涛徐兵
- 关键词：逆转录聚合酶链反应
- 双硫仑联合Cu对淋巴瘤Raji细胞增殖与凋亡影响及其机制的探讨被引量：3
- 2012年
- 目的:研究双硫仑(Disulfiram,DS)联合Cu离子对Burkitt’s淋巴瘤细胞株(Raji细胞)增殖和凋亡的影响及其与JNK和NF-κB通路的关系。方法:不同浓度DS和DS/CuMTT法检测对Raji细胞的增殖抑制作用;AnnexinⅤ-FITC/PI流式细胞术检测不同浓度DS和DS/Cu作用Raji细胞后凋亡细胞比例;蛋白质印迹法检测Cu、DS及DS/Cu处理细胞后p65、p-JNK及c-jun蛋白表达的变化。结果:DS和DS/Cu对Raji细胞均具有抑制增殖作用,作用72h两组IC50值分别为(0.793±0.08)和(0.085±0.015)μmol/mL,DS/Cu对Raji细胞增殖抑制作用显著强于DS单药,P=0.000。DS单药及DS/Cu对Raji细胞均有诱导凋亡作用,但DS/Cu诱导Raji细胞凋亡比例显著高于DS单药,P=0.001。蛋白质印迹法显示DS及DS/Cu作用Raji细胞后p-JNK及c-jun蛋白表达水平均显著增加、p65蛋白表达水平显著下调。结论:DS/Cu及DS对Raji细胞均有抑制增殖及诱导凋亡作用,其中DS/Cu的作用显著强于DS单药,其机制与同时抑制NF-κB和活化JNK通路有关。
- 查洁张妍琰王诗韵史鹏程郭绪涛周淑芸徐兵
- 关键词：血液肿瘤淋巴瘤双硫仑
- Disulfiram联合Cu通过上调TNF-α表达及蓄积ROS诱导白血病干细胞凋亡被引量：4
- 2015年
- 目的探讨Disulfiram联合Cu(DS/Cu)诱导急性髓系白血病(acute myeloblastic leukemia,AML)细胞凋亡及其相关分子机制。方法磁珠筛选CD34+CD38-的KG1α细胞作为AML干细胞,流式细胞术检测空白对照组、DS单药组(5μmol/L)、DS/Cu组(5μmol/L/0.5μmol/L)、DS/Cu+NAC组(5μmol/L/0.5μmol/L/10 mmol/L)的AML干细胞24 h后凋亡比率及ROS水平;qRT-PCR检测上述各组TNF-α、CD40、TNFRSF11B、TNFRSF1B、HRK凋亡相关基因mRNA表达水平;Western blot检测各组处理后TNF-α的蛋白表达水平;予以中和抗体TNF-αm Ab(2μg/m L)和对照抗体Ig G(2μg/m L)预处理2 h后,流式细胞术检测空白对照组、DS/Cu组、TNF-αm Ab组、TNF-αm Ab+DS/Cu组、Ig G组及Ig G+DS/Cu组的AML干细胞24 h后的ROS水平。结果予以DS或DS/Cu处理CD34+CD38-KG1α细胞后,细胞凋亡率由空白对照组的(6.65±0.64)%分别上升至(11.87±1.30)%、(27.43±1.65)%,差异均具有显著性统计学意义(P=0.01和P<0.01);CD34+CD38-KG1α细胞ROS也分别上升了(1.39±0.12)倍和(2.81±0.11)倍,差异也具有统计学意义(P<0.03和P<0.01),并且DS/Cu组比DS组更明显(P=0.00);应用NAC抑制DS/Cu诱导ROS蓄积后,细胞凋亡率由(27.43±1.65)%下降到(12.37±0.85)%(P<0.01)。qRT-PCR结果显示DS及DS/Cu均上调TNF-α、CD40、TNFRSF1B、TNFRSF11B、HRK凋亡相关基因的mRNA水平(P<0.05),且DS/Cu组较DS组上调的更明显(P<0.05),但是予以NAC预处理2 h后,仅TNF-α基因水平依然高表达(P=0.73),而CD40、TNFRSF11B、TNFRSF1B、HRK基因水平均明显下调(P<0.05)。为进一步证实TNF-α作用,分别予以TNF-αm Ab(2μg/m L)或Ig G(2μg/m L)预处理2 h后,TNF-αm Ab+DS/Cu组相比DS/Cu组的ROS相对变化率由(2.78±0.25)倍下降到(1.28±0.17)倍(P=0.00),而Ig G+DS/Cu组相比DS/Cu组的ROS相对变化率无显著性差异(P=0.23),TNF-αm Ab及Ig G组相比空白对照组的ROS水平无显著性差异(P=0.09和P=0.50)。结论 DS/Cu可通过上调TNF-α表达及蓄积ROS诱导AML干细胞凋亡。
- 周勇钟文彬陈凯董慧娟闫道广周淑云徐兵
- 关键词：CUROS
- 急性髓系白血病干细胞NOD/SCID小鼠白血病模型的建立被引量：5
- 2013年
- 目的探讨用非肥胖型糖尿病/严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠和经流式细胞仪分选出的KG1a中CD34+CD38-的干细胞亚群建立白血病干细胞(LSCs)动物模型,为靶向治疗LSCs的药物筛选奠定体内实验基础。方法 18只雌性NOD/SCID小鼠,体质量18～20 g,鼠龄6～8周龄。实验组12只,应用流式细胞仪分选KG1a细胞中具有LSCs特性的CD34+CD38-亚群,以2×106个/只尾静脉注射经全身X射线照射2Gy的NOD/SCID小鼠;正常对照组6只,只注射磷酸盐缓冲溶液。观察两组小鼠的一般情况和白血病发生情况,应用形态学、组织病理检查、流式细胞术、骨髓染色体检查等检测实验组小鼠的外周血、骨髓、肝脏、脾脏的白血病细胞标志。结果接种2周后实验组小鼠外周血可见白血病细胞,接种30 d实验组小鼠的白血病发病率为100%,无自发缓解;外周血、骨髓、肝、脾中均可发现大量的白血病细胞浸润;实验组小鼠骨髓细胞中CD13抗原阳性率15.47%～23.66%,并可见KG1a细胞的核型特征。结论尾静脉接种流式细胞仪分选后的CD34+CD38-KG1a细胞于全身亚致死量X射线照射后的NOD/SCID小鼠,能成功建成全身播散的白血病模型,为进一步研究LSCs的靶向治疗药物奠定实验基础。
- 李蓉蔚王诗韵董慧娟陈菲莉史鹏程郭绪涛徐兵
- 关键词：白血病干细胞急性髓系白血病小鼠
