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最小弧菌热不稳定型溶血素表达载体的构建和高效表达被引量：4: 2007年; 根据已发表的最小弧菌热不稳定型溶血素(Vibrio mimicusheat-labile hemolysinVmhA)核苷酸序列,设计和合成一对特异性引物,以最小弧菌96-6-3的基因组DNA为模板,PCR扩增得到热不稳定型溶血素基因片段,克隆于表达载体PQE-2/VmhA中,转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导,表达出预期大小50.2KD的融合蛋白.Westernblot检测显示,该蛋白与抗最小弧菌热不稳定型溶血素兔血清呈阳性反应,表明该蛋白具有溶血素的免疫原性,可作为基因工程疫苗的候选抗原.; 李涛吴后波; 关键词：最小弧菌溶血素基因表达

MPN-PCR法快速定量检测海产品中致病性副溶血弧菌被引量：11: 2006年; 副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是在海洋环境及江湖河口广泛分布的一种条件性致病菌，是可引起人食物中毒的病原菌。患者以沿海地区居多，是食品检验的必检项目，常规检验多不能定量检测，常规PCR、多重PCR、荧光定量PCR等检测技术只对反应体系中模板DNA进行定量，无法鉴别污染食品中死活菌体。; 栾晓燕陈吉祥李筠杨慧魏鉴腾杨官品张晓华; 关键词：快速定量检测副溶血弧菌海产品荧光定量PCR 多重PCR

最小弧菌热不稳定型溶血素基因克隆与序列分析被引量：1: 2006年; 根据已发表的最小弧菌热不稳定型溶血素(heat-labile hemolysin)基因核苷酸序列,设计和合成一对特异性引物,以最小弧菌96-6-3的基因组DNA为模板,PCR扩增得到热不稳定型溶血素基因片段,克隆到质粒载体pMD-18T中进行测序和分析.其结果表明扩增的热不稳定型溶血素基因片段与已发表的最小弧菌热不稳定型溶血素的同源性高达98%,扩增片段编码由446个氨基酸组成的多肽,推测分子量为50 200.软件分析表明编码的氨基酸有较高的抗原性,可作为基因工程疫苗的候选基因片段.; 李涛吴后波; 关键词：最小弧菌基因克隆溶血素真鲷

海水养殖真鲷最小弧菌外毒素的免疫学特性初步研究: 2006年; 按常规方法免疫健康家兔进行外毒素抗体的制备。将制备的兔抗血清与等体积的外毒素混合,37℃下作用1h后,观察毒素的溶血性及细胞毒性,取免疫前家兔血清(零号血清)作阴性对照,用毒素作阳性对照。结果表明,兔抗毒素血清能中和毒素,抑制毒素对人血细胞的溶血性及对Vero细胞的细胞毒性,中和毒素的兔抗毒素血清最高稀释度为1∶256,毒素对照显示出溶血性及细胞毒性。毒素与一定浓度的嗜水气单胞菌HEC毒素抗血清、霍乱肠毒素抗血清在37℃下分别作用1 h后,观察其溶血性及细胞毒性。结果表明,这2种抗血清都不能中和毒素,毒素与这2种抗血清作用后,仍然保持其溶血性及细胞毒性。用浓度为0.2%的福尔马林对浓度为5mg/mL的外毒素进行灭活处理,得到的灭活疫苗为毒素苗。一定稀释度的毒素苗,在初次免疫真鲷2周后利用病原菌对免疫组及对照组的实验鱼进行人工攻毒感染,毒素苗的免疫保护率可达80%,强化免疫后,免疫保护率有所提高。注射免疫的免疫保护率比浸泡免疫的高。; 吴后波苏晓波潘金培; 关键词：霍乱肠毒素

分子生物学技术在水产养殖动物病原快速检测中的应用被引量：9: 2007年; 在动植物病原体的检测中，方法学历经了生物培养、显微镜观察、生化检测、免疫学到分子生物学几个阶段的变更，朝着更特异、更快速、更便捷、更安全、集成化、微量化、定量化、费用低廉化的方向发展。传统病原检测主要依据致病病原体在介质或细胞中的培养、分析病原体表型或血清型特征，或采用组织学检测病原体对宿主器官的影响。这类方法耗时、特异性和灵敏度低，远远不能满足日常快速检测工作的需要。免疫学方法可以在一定程度上缩短检验时间，就灵敏度而言，酶联免疫吸附试验（ELISA）要高于免疫荧光、反向免疫凝胶电泳和免疫扩散，是最常用的免疫学检测病原体方法。但是许多病原体之间存在交叉反应，从而使免疫学方法受到很大局限性。近10a来，分子生物技术的快速发展极大提高了水产养殖病害诊断水平。; 贺电吴后波; 关键词：分子生物学技术病原体水产养殖动物免疫学方法酶联免疫吸附试验水产养殖病害

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国家自然科学基金(30371106)