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跨膜型TNF-α介导的反向信号对NK细胞杀伤功能的影响被引量：3: 2007年; 目的观察跨膜型TNF-α介导的反向信号对NK细胞杀伤功能的影响。方法用sTNFRI激活NK92细胞的TM-TNF-α反向信号;MTT比色法检测NK92细胞对靶细胞的杀伤作用;β-己糖氨酶释放实验检测NK92细胞在杀伤靶细胞时的胞吐作用;ELISA实验检测NK92细胞sTNF-α的分泌;流式细胞术检测NK92细胞FasL的表达。结果预先激活TM-TNF-α反向信号,可以促进NK92细胞对靶细胞的杀伤功能;增强NK92细胞的胞吐;促进FasL的表达和sTNF-α的分泌。结论TM-TNF-α反向信号可能通过促进NK92细胞胞吐、sTNF-α分泌及FasL的表达而促进NK92细胞对靶细胞的杀伤。; 方锴张健郑芳李琳芸冯玮姜晓丹李卓娅; 关键词：跨膜型TNF-Α 反向信号胞吐

稳定转染TNFα及其突变体的骨肉瘤细胞生物学功能的研究: 2007年; 目的建立转染2种TNFα基因(野生型TNFα和跨膜型TNFα突变体)的MG63细胞株,研究所转染细胞的TNFα的生物学效应。方法采用逆转录病毒载体,将2种TNFα基因导入人骨肉瘤细胞MG63中,采用流式细胞术、ELISA和生物学活性检测等方法从蛋白表达及其生物学活性2个方面对转染细胞进行检测鉴定。结果野生型TNFα和跨膜型TNFα突变体分别在MG63细胞中得到有效表达,并具有生物学活性。结论获得2种稳定表达TNFα的人骨肉瘤细胞株,为进一步研究TNFα的各种生物学行为和探索骨肿瘤的基因治疗奠定基础。; 庞艳王晶李清芬王妮丹朱建华姜小丹冯玮李卓娅; 关键词：MG63细胞细胞毒效应

TNF-SP-EGFP融合蛋白的构建表达及亚细胞定位被引量：2: 2007年; 目的探讨肿瘤坏死因子信号肽(TNF-SP)在哺乳动物细胞的表达和亚细胞定位。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术,以TNF-SP-pcDNA3.0质粒为模板扩增TNF-SP基因,采用PCR产物的粘端克隆法,将TNF-SP定向克隆入pEGFP-N1的多克隆位点,构建TNF-SP-EGFP重组质粒,酶切,PCR检测,序列分析鉴定,采用脂质体转染法,将TNF-SP-EGFP融合基因转染COS-7细胞进行表达,经碘化丙啶(PI)染色后以激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果PCR检测,酶切鉴定及测序证实目的基因TNF-SP正确连接到pEGFP-N1的多克隆位点。TNF-SP-EGFP重组体转染COS-7后,激光共聚焦显微镜显示TNF-SP-EGFP在细胞质表达。结论成功地构建了TNF-SP-EGFP融合蛋白真核表达质粒,在COS-7细胞中获得表达,并证实其定位于细胞质。; 朱建华王晶梁慧芳秦娜琳庞燕程熠杨薇吴乙璇冯玮姜晓丹李卓娅; 关键词：绿色荧光蛋白融合蛋白

跨膜型肿瘤坏死因子-α胞内段基序稳定表达细胞株的建立及功能研究: 2007年; 目的建立高表达跨膜型肿瘤坏死因子-α胞内段(TNF-intracellular domain,TNF-ICD)基序的人乳腺癌MCF-7细胞株,为研究TM-TNF-α的反向信号提供工具。方法采用脂质体介入法将含人TNF-ICD的pIRES2-EGFP病毒载体导入MCF-7中,经鉴定、筛选获得能稳定表达TNF-ICD细胞株。采用MTT法检测转染细胞对TNF-α的敏感度,比色法检测NO含量,ELISA方法检测NF-κB的活性。结果TNF-ICD基因转染入MCF-7细胞后表达在细胞膜上,并能提高该细胞NF-κB活性,抵抗TNF-α的杀伤,增加其NO产生;应用NF-κB抑制剂PDTC处理后能恢复该细胞对TNF的敏感性。结论获得稳定表达TNF-ICD的MCF-7细胞株,TNF-ICD可能作为TM-TNF-α细胞内的一段活化基序参与TM-TNF-α的反向信号,并通过活化NF-κB,抵抗可溶性TNF-α介导的细胞毒作用,增加NO的产生。; 秦娜琳尹丙姣王妮丹朱建华庞艳姜小丹冯玮李卓娅; 关键词：反向信号 MCF-7细胞

TRAF1-DsRed真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的定位被引量：5: 2007年; 目的构建融合蛋白TRAF1-DsRed的真核表达载体及观察TRAF1在COS-7细胞中的表达及定位。方法采用RT-PCR技术从外周血单个核细胞中扩增TRAF1cDNA,定向克隆至真核表达载体pDsRedC1,经脂质体转染COS-7细胞并以间接免疫荧光检测其在COS-7中表达。运用罗丹明123染色和激光共聚焦技术观察TRAF-1在COS-7细胞中的定位。结果转染重组子pTRAF1-DsRed的COS-7细胞可见红色荧光蛋白的表达,TRAF1在COS-7细胞中定位于线粒体。结论成功构建pTRAF1-DsRed融合基因并进行真核表达,确定TRAF-1在COS-7细胞中的定位,为进一步研究有关TRAF1的信号传导通路奠定了基础。; 王妮丹王晶潘玉玲秦娜林庞艳朱建华刘涛张述李卓娅; 关键词：TRAF1 细胞定位线粒体

葵花籽壳纳米纤维素制备工艺优化及其表征被引量：24: 2015年; 为了充分利用葵花籽的工业生产副产物,该文以葵花籽壳为原料,采用硫酸水解法制备葵花籽壳纳米纤维素。通过单因素试验研究了酸解温度、酸解时间、硫酸质量分数和液料比4个因素对纳米纤维素得率的影响,应用响应面法对工艺参数进行优化,并对制备得到的纳米纤维素进行了透射电镜（transmission electron microscopy,TEM）、红外光谱（Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR）和X-射线衍射（X-ray diffraction,XRD）等分析。结果表明：当酸解温度为42℃、酸解时间为83.71 min、硫酸质量分数为59.97%、液料比为12.33：1时,预测得出纳米纤维素得率为31.67%,验证试验纳米纤维素得率为31.31%。制备的葵花籽壳纳米纤维素呈棒状,直径为10∽30 nm,长度为150∽300 nm,仍然具有纤维素的基本化学结构,结晶度较高,属于典型的纤维素Ⅰ型结晶结构。该文研究结果可以为葵花籽的综合利用提供参考。; 陈珊珊陶宏江王亚静马中苏张丽萍; 关键词：纳米晶体材料纤维素纳米纤维素响应面法

跨膜型TNF-α突变体(Δ-28)的正向和反向信号对U937细胞的作用被引量：1: 2008年; 目的观察跨膜段突变TM-TNF-α(Δ-28mTM-TNF-α)正反向信号诱导U937促炎因子表达的影响。方法Δ-28mTM-TNF-α质粒分别转染COS-7,检测表达的Δ-28mTM-TNF-α诱导U937产生NO的量。同样Δ-28mTM-TNF-α质粒转染U937,sTNFRI激活反向信号后,检测U937促炎因子IL-8以及IL-1β的mRNA转录水平。结果Δ-28mTM-TNF-α不能够诱导U937产生NO,但被激活并传递反向信号促使U937的促炎因子转录和表达。结论跨膜段突变抑制了TM-TNF-α正向信号但不影响反向信号的传递。; 谌启政刘娜王晶姜小丹徐勇冯玮李卓娅; 关键词：跨膜型TNF-Α 反向信号 U937

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国家自然科学基金(30471586)