国家科技重大专项(2013ZX08006-002)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：张斌华再东郑新民许生成李同明更多>>
- 相关机构：青海大学湖北省农业科学院山东农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项山东省农业良种工程项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 2A肽介导猪PID1与CuZnSOD双基因真核共表达载体的构建与细胞表达
- 2014年
- 构建PID1基因与CuZnSOD基因的真核共表达载体,在PK15细胞中鉴定基因的表达。PCR扩增的PID1与CuZnSOD两基因分别经双酶切后定向插入pIRES2-AcGFP1空载体,构建pIRES2-CuZnSOD-PID1真核双表达载体并进行测序与酶切鉴定。采用脂质体转染法将重组质粒转染至PK15细胞,细胞内荧光显微镜下观察其荧光的表达,RT-PCR、Westernblot技术分别检测PID1基因与CuZnSOD基因mRNA和蛋白表达情况。重组克隆载体插入目的片段序列与PID1基因与CuZnSOD基因序列完全一致。PIRES2-CuZnSOD-PID1真核双表达载体测序、酶切鉴定结果与预期结果一致。荧光显微镜下观察转染后的PK15细胞出现绿色荧光。RT-PCR检测结果显示,转染细胞中PID1基因与CuZnSOD基因表达量明显高于对照组(P<0.05)。Westernblot检测结果表明pIRES2-CuZnSODPID1真核双表达载体稳定有效表达。成功构建pIRES2-CuZnSOD-PID1真核共表达载体,且双基因在真核细胞独立稳定表达,为转基因猪等育种新材料的制备奠定基础。
- 张哲李同明曾勇庆陈伟徐正刚杨云房国锋王守栋楚青惠
- 关键词：CUZNSODPK15细胞
- 猪去核无透明带卵母细胞电融合参数的探讨被引量：1
- 2014年
- 试验通过采用不同场强、电场时程和脉冲次数对去核的猪体外成熟卵母细胞电融合参数进行比较研究,观察细胞融合情况。结果表明,在电场时程30μs、1次直流脉冲(DC)的情况下,电场强度0.8kV/cm时卵母细胞的融合率为94.7%,显著高于其他各组(P<0.05);当电场强度为0.8kV/cm、1次直流脉冲的情况下,电场时程60和90μs时,卵母细胞融合率为86.5%和83.8%,差异不显著(P>0.05),但显著低于30μs时的电融合效率(P<0.05);在电场强度为0.8kV/cm,电场时程为30μs的情况下,1次电脉冲激活卵母细胞的融合率(94.7%)和2次电脉冲的融合率(95.6%)无显著差异(P>0.05),但两者显著高于3次电脉冲的融合率(81.7%)(P<0.05)。通过对各组进行比较,在电场强度为0.8kV/cm、电场时程为30μs、1次直流脉冲的电刺激可以对体外成熟的猪卵母细胞取得较好的融合效果。
- 张斌华再东郑新民许生成
