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国家自然科学基金(30471530)

作品数:15 被引量:20H指数:4
相关作者:李梅石立莹李晓眠袁立军王卿更多>>
相关机构:天津医科大学南开大学牡丹江医学院更多>>
发文基金:国家自然科学基金天津市高等学校科技发展基金计划项目更多>>
相关领域:医药卫生生物学农业科学更多>>

文献类型

  • 15篇中文期刊文章

领域

  • 9篇医药卫生
  • 4篇生物学
  • 2篇农业科学

主题

  • 9篇仙台病毒
  • 6篇病毒
  • 5篇TIANJI...
  • 4篇粘病毒
  • 4篇副粘病毒
  • 3篇蛋白
  • 3篇同源性
  • 3篇进化分析
  • 3篇NP蛋白
  • 2篇真核
  • 2篇真核表达
  • 2篇核表达
  • 2篇副黏病毒
  • 2篇NP基因
  • 2篇F基因
  • 2篇STRAIN
  • 2篇PARAMY...
  • 1篇单克隆
  • 1篇蛋白类
  • 1篇蛋白质

机构

  • 13篇天津医科大学
  • 1篇南开大学
  • 1篇牡丹江医学院

作者

  • 13篇李梅
  • 10篇石立莹
  • 9篇李晓眠
  • 8篇袁立军
  • 6篇王卿
  • 5篇王文秀
  • 4篇何健民
  • 3篇张国际
  • 2篇李霞
  • 1篇石建党
  • 1篇李晓绵
  • 1篇侯凯
  • 1篇李昕
  • 1篇钟启平
  • 1篇秦宇

传媒

  • 3篇天津医药
  • 2篇中华微生物学...
  • 2篇病毒学报
  • 2篇中国病原生物...
  • 2篇Virolo...
  • 1篇中国生物制品...
  • 1篇微生物学通报
  • 1篇天津师范大学...
  • 1篇热带医学杂志

年份

  • 1篇2013
  • 2篇2009
  • 8篇2008
  • 4篇2007
15 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
副粘病毒Tianjin株NP、P、M及L蛋白的生物信息学分析
2008年
为了进一步明确副粘病毒Tianjin株的来源和种系进化地位,探讨其高致病性的机制。对Tianjin株NP、P、M及L蛋白进行了生物信息学分析。进化树显示:Tianjin株属于副粘病毒亚科呼吸道病毒属,且很可能为仙台病毒新的基因型。相似性比较表明,P蛋白变异最大,相似性仅为78.7%~91.9%;L蛋白相似性最高,为96.0%~98.0%。序列比对显示:NP蛋白氨基酸序列中存在15个独特的变异位点,P蛋白存在29个,M蛋白存在6个,L蛋白存在29个。这些独特变异位点的存在很可能是导致Tianjin株在宿主来源和致病特点等方面与已知仙台病毒株具有较大差异的原因。
石立莹李梅李晓眠何健民袁立军
关键词:副粘病毒仙台病毒狨猴生物信息学
副粘病毒Tianjin株F基因克隆及序列分析被引量:6
2007年
目的探索副粘病毒Tianjin株的来源和种系进化地位。方法以副粘病毒Tianjin株基因组RNA为模板,通过RT-PCR方法获得包括F基因全长的两个质粒克隆,分别进行序列测定。将拼接得到的F基因核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank中公布的15株仙台病毒相应序列进行同源性比较,并构建系统进化树。结果副粘病毒Tianjin株与15株仙台病毒F基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别在85.3%~94.5%和90.4%~95.4%之间。进化树分析表明,Tianjin株与仙台病毒BB1株亲缘关系较近,但仍有一定差距,与其他仙台病毒株关系较远。结论副粘病毒Tianjin株很可能不属于仙台病毒现有的Ohita株、Z株及BB1株所代表的3个进化分支,而是独立于这3个分支之外。
石立莹李晓眠李梅何健民袁立军
关键词:副粘病毒仙台病毒F基因系统进化树
副黏病毒Tianjin株重组血凝素-神经氨酸酶单克隆抗体的制备及在临床检测中的初步应用被引量:4
2008年
目的:建立双抗体夹心ELISA法,调查副黏病毒Tianjin株引起婴幼儿下呼吸道感染情况。方法:用纯化的重组HN片段免疫BALB/c小鼠,按常规方法制备单克隆抗体。以兔抗Tianjin株多克隆抗体为捕获抗体,单抗G7G7E7为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,检测104例下呼吸道感染患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)标本。结果:获得3株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株G7H4D3、G7D9G3和G7G7E7。3株单克隆抗体与副黏病毒Tianjin株有较高结合活性,与甲、乙型流感病毒,新城疫病毒(NDV),人副流感病毒(hPIV)1型、3型、肺炎支原体均无交叉反应性。ELISA相加试验和阻断试验表明,3株单抗识别相同或相近表位区域,识别的表位在抗病毒免疫应答中处于免疫优势地位。双抗体夹心ELISA法检测阳性率为1.92%(2/104)。结论:与RT-PCR和间接ELISA法比较,双抗体夹心ELISA法,具有敏感性高、特异性强的优点,适于临床检测使用。副黏病毒Tianjin株是婴幼儿下呼吸道感染的重要致病因子之一。
李霞李晓眠石立莹袁立军王卿王文秀李梅侯凯
关键词:单克隆血凝素类神经氨酸酶重组蛋白质类
仙台病毒Tianjin株噬菌体Fab抗体库的构建及初步筛选
2013年
目的构建仙台病毒Tianjin株噬菌体Fab抗体库,并进行初步筛选。方法用仙台病毒Tianjin株免疫小鼠,制备脾细胞悬液,提取小鼠脾细胞总RNA,RT-PCR扩增鼠抗体轻链(κ链)和重链Fd基因,将轻链基因和噬菌粒p3MH经SacⅠ和XbaⅠ双酶切后纯化回收,经T4 DNA连接酶连接,电转化E.coli XL1-Blue,构建轻链库;将重链Fd段基因和轻链库p3MH-κ经SpeⅠ和XhoⅠ双酶切后,纯化回收并连接,电转化E.coli XL1-Blue,获得噬菌体抗体库,计算重组率和抗体库滴度。以仙台病毒Tianjin株重组蛋白HN2为抗原进行初步筛选,制备噬菌体抗体,并进行测序。结果构建的免疫噬菌体抗体库库容为1.18×107,重组率为90%,制备的噬菌体抗体滴度为1011pfu/ml;经初步筛选,噬菌体富集了约63.6倍,获得2株与重组蛋白HN2有结合活性的阳性克隆,经NCBI BLAST进行同源性分析,显示为鼠源性抗体,经IMGT分析,显示轻链基因与Vk9亚群基因的同源性为94.87%,重链基因与VH7亚群基因的同源性为97.85%。结论成功构建了仙台病毒Tianjin株噬菌体Fab抗体库,为该病毒株的诊断、疾病治疗及致病机制等研究奠定了基础。
李霞李晓绵石立莹李梅
关键词:仙台病毒FAB噬菌体抗体库
一株致普通棉耳狨猴严重下呼吸道感染的副粘病毒种系进化分析被引量:11
2007年
目的探讨副粘病毒Tianjin株的种系进化地位。方法将副粘病毒Tianjin株HN核苷酸、氨基酸序列与GenBank发布的副粘病毒相应序列进行比较,构建种系进化树,阐明副粘病毒Tianjin株在副粘病毒科中的分类地位。结果基于HN核苷酸序列的种系进化分析表明,副粘病毒Tianjin株属于副粘病毒科、副粘病毒亚科、呼吸道病毒属,与仙台病毒亲缘关系最近。Tianjin株与仙台病毒BB1株HN核苷酸、氨基酸序列同源性分别为94.8%、95.1%,与其他仙台病毒,在84.8%~88.7%和89.6%~91.7%之间。Tianjin株与BB1株HN核苷酸序列的差异明显大于同一进化分支内的仙台病毒之间的差异。Tianjin株HN蛋白存在18个独特的氨基酸残基变异。结论结合种系进化分析结果、病毒的宿主来源和致病特点,提示副粘病毒Tianjin株不属于仙台病毒现有的3个进化分支而自成独立的一支。
李梅石建党石立莹李晓眠张国际秦宇袁立军
关键词:副粘病毒仙台病毒
仙台病毒HN基因真核表达质粒对幼鼠免疫效果的评价被引量:1
2007年
目的:评价仙台病毒HN基因真核表达质粒pcDNA3.HN对幼鼠的免疫效果。方法:使用去内毒素的构建质粒肌内注射免疫幼鼠,设立阳性对照和阴性对照组,观察靶器官的变化和免疫应答效果。结果:仙台病毒HN基因可以很好地诱导实验小鼠的细胞免疫和体液免疫,能够很大程度地保护肺组织免受随后仙台病毒的攻击。结论:仙台病毒HN基因真核表达质粒良好的免疫效果为今后开发基因疫苗提供了理论和实践依据。
张国际李晓眠李昕李梅
关键词:仙台病毒质粒
副粘病毒Tianjin株F基因真核表达载体的构建及初步鉴定
2007年
为研究仙台病毒主要表面抗原f蛋白对小鼠的免疫效果,应用RT-PCR从副粘病毒Tianjin株基因组中扩增出F基因,将其插入pcDNA3的Pcmv下游,构建了F基因真核表达载体,同时使用PCR、限制性酶切和测序等方法对其进行了鉴定,鉴定结果证实构建成功.构建好的F基因真核表达载体可为下一步的体外表达和动物免疫实验奠定基础.
张国际李晓眠钟启平李梅
关键词:F基因真核表达载体
副粘病毒Tianjin株基因组3′和5′末端序列测定及分析被引量:1
2008年
目的测定副粘病毒Tianjin株基因组3′和5′末端序列,分析其前导区一级及二级结构与功能的关系。方法从感染病毒的鸡胚尿囊液中提取总RNA,利用cDNA末端快速扩增(RACE)法分别扩增基因组3′和5′端cDNA片段,并克隆至pGM-T载体中,然后分别测定插入片段的核苷酸序列,用DNAStar软件将测得的3′和5′端前导区序列与GenBank中选取的6株仙台病毒代表株相应序列进行相似性比较及序列比对,用RNAdraw软件预测基因组3′和5′端前导区二级结构并进行比较分析。结果副粘病毒Tianjin株基因组3′和5′末端非编码区长度分别为119和142个核苷酸,前导区核苷酸序列与6株仙台病毒基因组的相似性分别在89.1%~96.4%和93.0%~96.5%,二级结构与选取的已知仙台病毒株高度相似而且稳定。结论副粘病毒Tianjin株基因组3′和5′端前导区序列相对保守,可能与病毒复制、转录调控及致病性有关。
石立莹李梅李晓眠何健民袁立军王卿
关键词:副粘病毒仙台病毒
Bioinformatic Analysis of Structural Proteins of Paramyxovirus Tianjin Strain
2008年
The amino acid sequences of the NP, P, M, F, HN and L proteins of the paramyxovirus Tianjin strain were analyzed by using the bioinformatics methods. Phylogenetic analysis based on 6 structural proteins among the Tianjin strain and 25 paramyxoviruses showed that the Tianjin strain belonged to the genus Respirovirus, in the subfamily Paramyxovirinae, and was most closely related to Sendai virus (SeV). Phylogenetic analysis with 14 known SeVs showed that Tianjin strain represented a new evolutionary lineage. Similarities comparisons indicated that Tianjin strain P protein was poorly conserved, sharing only 78.7% - 91.9% amino acid identity with the known SeVs, while the L protein was the most conserved, having 96.0% - 98.0% amino acid identity with the known SeVs. Alignments of amino acid sequences of 6 structural proteins clearly showed that Tianjin strain possessed many unique amino acid substitutions in their protein sequences, 15 in NP, 29 in P, 6 in M, 13 in F, 18 in HN, and 29 in L. These results revealed that Tianjin strain was most likely a new genotype of SeV. The presence of unique amino acid substitutions suggests that Tianjin strain maybe has a significant difference in biological, pathological, immunological, or epidemiological characteristics from the known SeVs.
Li-ying SHI Mei LI Xiao-mian LI Li-jun YUAN Qing WANG
副粘病毒Tianjin株NP蛋白的表达及分析被引量:2
2008年
目的分析副粘病毒Tianjin株NP蛋白与其他SeV的同源性及种系进化关系,探讨其变异及抗原性。方法克隆NP基因,对其核苷酸和氨基酸序列进行同源性及进化分析。在原核系统中分3段表达NP蛋白。结果经Western blot分析,重组蛋白NP1、NP2和NP3能与副粘病毒Tianjin株抗血清特异反应,具有天然抗原性。Tianjin株与仙台病毒BB1株NP的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为94.5%和96.2%,与其他仙台病毒的同源性,在85.1%~88.7%和92.4%~94.7%之间。Tianjin株NP蛋白共有15个独特的氨基酸变异位点和11个与BB1株共有的变异位点。Tianjin株与BB1株NP核苷酸序列的差异大于同一进化分支内的仙台病毒之间的差异。结论副粘病毒Tian-jin株属于仙台病毒新的进化分支。重组NP蛋白具有抗原性。
王卿李梅石立莹袁立军王文秀
关键词:NP基因原核表达
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