国家自然科学基金(30471508)
- 作品数：4 被引量：27H指数：3
- 相关作者：刘克义张佃波宰德富卞传秀高红刚更多>>
- 相关机构：山东省寄生虫病防治研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 微小隐孢子虫表面抗原CP23基因的克隆及表达被引量：6
- 2006年
- 目的构建微小隐孢子虫表面抗原CP23基因表达载体并获得重组表达蛋白。方法用微小隐孢子虫卵囊感染免疫抑制BALB/c小鼠,用不连续蔗糖密度梯度离心法纯化微小隐孢子虫卵囊,用酚-氯仿抽提法提取微小隐孢子虫基因组DNA,PCR扩增CP23基因片段,然后克隆至TA载体;通过酶切、测序鉴定后,将CP23基因片段用限制性内切酶切下克隆至pET-30a(+)载体,构建pET-30a-23质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达蛋白用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定。结果扩增出约340bp的微小隐孢子虫CP23基因片段并成功构建pET-30a-23质粒,表达出分子质量单位为27ku的融合蛋白,Western blot显示该蛋白能被抗微小隐孢子虫血清识别。结论成功构建pET-30a-23质粒,表达产物具有免疫反应性,为微小隐孢子虫的免疫学诊断及疫苗研制打下了基础。
- 宰德富张佃波魏庆宽韩广东李瑾刘克义
- 关键词：微小隐孢子虫克隆WESTERNBLOT
- 隐孢子虫分类研究进展被引量：6
- 2006年
- 隐孢子虫为体积微小的球虫类寄生虫,广泛寄生于多种脊椎动物体内,可引起一种以腹泻为主要临床表现的人兽共惠性原虫病。近年皋,隐孢子虫病的检出率逐年增高,已被列为世界最常见的6种腹泻病之一。在国外,隐孢子虫已被列为艾滋病患者的常规检查项目。本文主要介绍近年来隐孢子虫在形态学、分子生物学等方面分类学研究的进展。
- 赵立江张佃波刘克义
- 关键词：隐孢子虫分类学基因
- 分子生物学技术在隐孢子虫病研究中的应用进展被引量：3
- 2005年
- 隐孢子虫是一种属于顶端复合物门的寄生性原虫,感染此虫引起的隐孢子虫病是一种全球性的人畜共患寄生虫病。免疫力低下、功能缺陷或免疫抑制的患者感染此虫后,可引起严重胃肠炎并伴有水样腹泻,导致大量体液丢失而危及生命。艾滋病患者中感染率高达48%左右,长期的严重腹泻是艾滋病病人的重要致死因素之一。该病对人类公共卫生造成很大威胁,国外暴发流行时有报告。国内外一些学者相继利用核酸限制性片段长度多态性分析、基因克隆、分子杂交和聚合酶链式反应等分子生物学技术,对隐孢子虫核酸分子进行了大量的研究并取得了一些重要进展,并在隐孢子虫卵囊检测、隐孢子虫病的诊断、流行病学调查及虫种鉴定和虫株分型中得到广泛应用。
- 宰德富张佃波刘克义
- 关键词：隐孢子虫
- 弓形虫重组耻垢分枝杆菌M.S-P30-ROP2载体活疫苗构建及鉴定被引量：12
- 2007年
- 目的构建和鉴定弓形虫P30-ROP2复合基因重组耻垢分枝杆菌M.S载体活疫苗。方法用亚克隆技术把P30-ROP2复合基因克隆入大肠杆菌/分枝杆菌穿梭质粒pSTM3,构建重组质粒pSTM3-P30-ROP2,电穿孔法导入耻垢分枝杆菌中,潮霉素筛选、PCR法鉴定阳性转化子,温度诱导表达鉴定。结果获得pSTM3-P30-ROP2重组穿梭表达载体,SDS-PAGE结果显示P30-ROP2复合基因表达蛋白产物分子量约为66kDa。结论成功构建弓形虫复合抗原基因P30-ROP2重组耻垢分枝杆菌疫苗,为弓形虫病的防治提供了一种新方法。
- 高红刚张佃波卞传秀刘克义
- 关键词：弓形虫穿梭表达载体
