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教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-06-0167)
作品数:
2
被引量:1
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闫荣
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2009
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抗血小板膜糖蛋白Ibα胞内段多肽多克隆抗体的制备及初步应用
2009年
目的制备兔抗人血小板膜糖蛋白(GP)IbαC端557~561氨基酸序列多肽的多克隆抗体,并初步用于人血小板GPIbαC端559位丝氨酸磷酸化状态的检测。方法应用化学方法合成C—R—G-S—L-P(559位丝氨酸非磷酸化,Ser559)和C—R—G—S(P)-L-P(559位丝氨酸磷酸化,pSer559)多肽。将2种多肽分别与钥孔蜮血蓝蛋白交联后,以皮下注射法分别免疫新西兰大白兔,分离获得2种抗血清(抗Ser559多抗和抗pSer559多抗)。应用斑点印迹和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对抗血清进行鉴定并检测效价。从人血小板裂解液中分离纯化血小板GPIbα,利用抗Ser559多抗和抗pSer559多抗、采用ELISA方法检测人血小板GPIbαC端559位丝氨酸磷酸化状况。结果所制备的2种多抗分别特异性识别各自抗原,效价分别为1:32000和1:64000。2种多抗均可与纯化的人血小板GPIbα特异结合,表明人血小板GPIbα559位点丝氨酸存在磷酸化与非磷酸化两种状态。结论应用人工合成多肽成功制备出2种可特异性识别丝氨酸磷酸化状态的兔抗人血小板GPIbα胞内段多肽多抗,并证明人血小板GPIbcαC端559位丝氨酸存在磷酸化状态。
元艳宏
康佳蕊
闫荣
程虹
庄逢源
王月丹
戴克胜
关键词:
血小板
抗体
蛋白激酶A抑制剂对血小板膜糖蛋白Ⅰbα表达及血小板功能的影响
被引量:1
2009年
目的探讨蛋白激酶A(proteinkinaseA,PKA)对血小板膜糖蛋白(Glycoprotein,GP)Ⅰbα表达的调控作用。方法用健康人洗涤血小板与PKA抑制剂H89温育。用Westernblot检测血小板悬液中GPⅠbα的酶切片段糖萼蛋白(glycocalicin,GC),并用流式细胞术检测GPⅠbα的膜表达量。用Western blot检测血小板骨架蛋白的酶切程度来确定钙依赖蛋白酶(calpain)活性,并用流式细胞术检测血小板表面calpain的表达。用血小板聚集仪检测PKA抑制剂H89对瑞斯托霉素诱导的血小板聚集功能的影响。结果洗涤血小板经H89处理后,血小板表面GPIbd被酶切并释放于血小板悬液中,使血小板表面GPⅠbα的表达水平显著降低(P〈0.05)。多种calpain抑制剂与血小板预温育均可减少GPⅠbα的酶切程度,表明PKA抑制剂所致的酶切是calpain依赖性的。肌动蛋白结合蛋白(actin—binding protein,ABP)和踝蛋白(talin)的酶切表明calpain可被PKA抑制剂激活,流式细胞术结果表明calpain在血小板表面有所表达。血小板经PKA抑制剂处理后,瑞斯托霉素诱导的聚集功能受到抑制。结论抑制血小板PKA活性,可导致calpain依赖性的GPⅠbα酶切,使GPⅠbα膜表达量减低,并导致GPIbd依赖的血小板聚集功能减低。
闫荣
戴克胜
关键词:
血小板
蛋白激酶A
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