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国家杰出青年科学基金(30225024)

作品数：11 被引量：23H指数：3
相关作者：李和张亦农汪薇曦廖敏韩金红更多>>
相关机构：华中科技大学新乡医学院温州医学院更多>>
发文基金：国家杰出青年科学基金国家自然科学基金浙江省教育厅科研计划更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 11篇期刊文章
  • 2篇会议论文

领域

  • 13篇医药卫生

主题

  • 11篇亨廷顿蛋白
  • 8篇亨廷顿蛋白相...
  • 7篇免疫
  • 5篇细胞
  • 4篇蛋白
  • 4篇组织化学
  • 4篇免疫组织
  • 4篇免疫组织化学
  • 3篇印迹
  • 3篇突变
  • 3篇免疫印迹
  • 2篇毒性
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  • 2篇异构体
  • 2篇细胞毒
  • 2篇细胞毒性
  • 2篇下丘
  • 2篇下丘脑
  • 2篇脊髓
  • 2篇亨廷顿病

机构

  • 13篇华中科技大学
  • 3篇新乡医学院
  • 2篇温州医学院
  • 2篇新乡医学院第...

作者

  • 9篇张亦农
  • 9篇李和
  • 6篇汪薇曦
  • 4篇李和
  • 3篇韩金红
  • 3篇黄珊珊
  • 3篇贺军
  • 3篇廖敏
  • 2篇韩金芬
  • 2篇叶翠芳
  • 2篇许晓源
  • 1篇陈小伟
  • 1篇包巍
  • 1篇范文艳
  • 1篇唐源远
  • 1篇刘晶晶
  • 1篇郭剑锋
  • 1篇王国栋
  • 1篇陈樱花
  • 1篇程珊

传媒

  • 4篇中国组织化学...
  • 3篇解剖学报
  • 2篇新乡医学院学...
  • 1篇解剖学杂志
  • 1篇中国病理生理...
  • 1篇湖北省神经科...
  • 1篇2007中国...

年份

  • 2篇2011
  • 1篇2010
  • 4篇2009
  • 2篇2007
  • 1篇2006
  • 3篇2004
共 11 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
动态检测活细胞内泛素-蛋白酶体系统活性方法的建立
2009年
目的建立一种动态检测活细胞内泛素-蛋白酶体系统活性的方法。方法将表达绿色荧光蛋白(GFP)或红色荧光蛋白(DsRed_2)的质粒分别改建为表达带有内泛素-蛋白酶体系统降解信号CL1的GFP或DsRed_2的pGFP^u或pDsRed_2~u质粒,然后转染HEK293细胞,通过G418筛选得到稳定表达GFP^u或DsRed_2~u的细胞系。在蛋白酶体抑制剂N-Acetyl-Leu-Leu-Norleu-al(ALLN)处理GFP^u或DsRed_2~u细胞后,应用免疫印记技术检测细胞内GFP或DsRed_2含量的变化,应用荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜技术观察GFP或DsRed_2荧光强度的变化。结果ALLN处理能使GFP^u和DsRed_2~u细胞内GFP和DsRed_2含量明显增加,荧光强度显著增强,并呈现明显的剂量/时间-效应关系。结论本文成功地建立了检测内泛素-蛋白酶体系统活性的方法,该方法能有效地对活细胞的内泛素-蛋白酶体系统活性进行实时动态检测。
章宏峰张亦农汪薇曦贺军李和
关键词：绿色荧光蛋白红色荧光蛋白蛋白酶体抑制剂
胞浆内非聚集型突变亨廷顿蛋白影响神经细胞的分化被引量：1
2004年
目的 :探讨胞浆内非聚集型突变亨廷顿蛋白 (huntingtin ,Htt)对神经细胞分化的影响。 方法 :利用磷酸钙沉淀法在培养的小鼠成神经瘤细胞 (N2a细胞 )瞬时或稳定转染编码正常或突变Htt的氨基末端片段的cDNA ,观察突变Htt对视黄酸 (retinoicacid ,RA)和无血清培养刺激N2a细胞突起生长的影响。结果 :在瞬时转染的N2a细胞中 ,2 0Q的正常Htt氨基末端片段弥散分布在胞浆内 ,1 5 0Q的突变Htt氨基末端片段在多数细胞胞浆内形成聚集物。在稳定表达 1 5 0Q的N2a细胞部分克隆中 ,1 5 0Q弥散分布在胞浆内。无论是含突变Htt聚集物的瞬时转染细胞还是仅在胞浆中表达非聚集型突变Htt的稳定转染细胞 ,其突起生长能力均较表达正常Htt的瞬时转染细胞和稳定转染细胞差。结论 :胞浆内非聚集型突变Htt也能影响神经细胞的分化。
叶翠芳李和汪薇曦张亦农
关键词：胞浆亨廷顿蛋白神经细胞HTTN2A细胞
大鼠视网膜中HAP1的免疫组织化学定位及不同光照条件对HAP1表达的影响被引量：8
2004年
目的　探讨亨廷顿蛋白相关蛋白 1(huntingtinassociatedprotein 1,HAP1)是否存在于视网膜内及是否与视觉有关。方法　对正常大鼠眼球壁用ABC法进行免疫组织化学染色 ,观察HAP1在视网膜中的定位 ;用半定量免疫印迹方法(Westernblotting)检测不同光照条件对大鼠视网膜中HAP1表达的影响。结果　HAP1较广泛地分布在大鼠视网膜各层 ,但以内核层及外核层中免疫反应较强 ,阳性反应产物主要定位在节细胞层和内核层 /外核层中部分细胞胞体内 ;其余各层中 ,HAP1免疫反应较弱 ,阳性产物呈弥散分布 ,未见明显的阳性胞体。在连续处于黑暗环境中 72小时大鼠视网膜中 ,HAP1表达较常规光照动物明显减少 ,而连续光照 72h大鼠视网膜内HAP1表达无明显变化。结论　HAP1在视网膜中的存在及不同光照条件对视网膜HAP1表达的影响表明 ,HAP1可能与视觉活动有关。
黄珊珊李和汪薇曦张亦农
关键词：视网膜HAP1免疫组织化学光照亨廷顿蛋白相关蛋白1
抗亨廷顿蛋白相关蛋白1氨基末端和羧基末端多肽抗体的制备被引量：1
2011年
目的探讨抗亨廷顿蛋白相关蛋白1(HAP1)异构体——HAP1A和HAP1B的氨基末端和羧基末端多肽抗体的制备。方法对大鼠脑总RNA进行逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)获取HAP1氨基末端多肽(HAP1N)基因片段,并插入载体构建HAP1N原核表达质粒。提取原核表达的谷胱甘肽转硫酶(GST)-HAP1N末端、GST-HAP1AC末端和GST-HAP1BC末端的融合蛋白,免疫豚鼠和兔分别制备抗HAP1N、HAP1A和HAP1B抗体,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹法和免疫组织化学技术对其特异性和效价进行鉴定和检测。结果构建的HAP1N原核表达质粒经酶切和DNA测序鉴定显示,目的基因插入部位正确,长度符合设计要求,为大鼠HAP1氨基末端片段基因。电泳结果显示,提取的3种融合蛋白相对分子质量大小与设计表达的目的蛋白相吻合。获得了豚鼠或兔分别抗3种融合蛋白的抗体,能与提取的融合蛋白特异性结合。豚鼠/兔抗HAP1N(TJ1NGP/TJ1NRB)可同时识别下丘脑提取组织的HAP1A和HAP1B,其特异性与国外的豚鼠/兔抗HAP1中间段序列抗体EM78相同,豚鼠抗HAP1AC(TJ1AcGP)特异性识别HAP1A,豚鼠/兔抗HAP1BC(TJ1BcGP或TJ1BcRB)特异性识别HAP1B;TJ1NRB、TJ1BcRB、TJ1NGP、TJ1AcGP和TJ1BcGP 5种抗体均能有效标记大鼠脑组织的HAP1,TJ1NRB、TJ1BcRB、TJ1NGP和TJ1BcGP免疫反应阳性物的分布与EM78完全一致,TJ1AcGP免疫反应阳性物主要以颗粒状形式定位在Stigmoid小体上,弥散分布产物极少;3种检测结果显示5种抗体的效价均达1 10 000以上。结论针对HAP1A和/或HAP1B氨基末端和羧基末端多肽抗体特异性识别HAP1A和/或HAP1B,可用于HAP1的研究;针对HAP1A/HAP1B氨基末端多肽抗体和HAP1B羧基末端多肽抗体可替代针对HAP1中间段多肽抗体。
韩金红韩金芬王国栋包巍范文艳李和
关键词：亨廷顿蛋白相关蛋白1氨基末端羧基末端抗体制备免疫印迹
大鼠下丘脑亨廷顿蛋白相关蛋白1异构体HAP1A和HAP1B的表达
2011年
目的观察2种亨廷顿蛋白相关蛋白1(huntingtin-associated protein 1,HAP1)异构体HAP1A和HAP1B在大鼠下丘脑的分布特点。方法取Wistar雄性大鼠的脑,经恒冷箱冰冻切片,片厚30μm,进行HAP1A和HAP1B的免疫组织化学ABC法和免疫荧光双标法染色。结果免疫组织化学ABC法结果显示,HAP1A与HAP1B在成年大鼠下丘脑免疫反应阳性产物分布区域无明显差异,免疫阳性物质呈棕褐色,以视前内侧区、前区、视上核、室旁核、弓状核、结节核、腹内侧核等部位表达水平较高,其他核团呈较低水平表达。HAP1A免疫反应阳性产物主要以颗粒状形式定位在Stigmoid小体上,在神经元胞体和近端突起的胞质内弥散分布产物极少,阳性强度极弱,神经元胞体轮廓不明显;而HAP1B免疫反应阳性产物则主要以弥散形式定位于神经元胞质内,神经元胞体轮廓十分清楚;HAP1B免疫反应阳性产物还弥散、均匀分布在神经毡内,或定位于Stigmoid小体上,但HAP1B阳性Stigmoid小体数量明显少于HAP1A阳性者。免疫荧光双标记法结果显示,约有80%的Stigmoid小体既含有HAP1A也含有HAP1B,其余的Stig-moid小体仅含HAP1A。结论 HAP1A和HAP1B在大鼠下丘脑内具有相同的区域分布模式,但在神经元内的定位具有明显区别,提示二者可能具有不同的功能;HAP1A或其羧基末端片段更适合于作为Stigmoid小体的标志物。
韩金红唐源远韩金芬程珊李和
关键词：亨廷顿蛋白相关蛋白1下丘脑免疫组织化学
链脲佐菌素敏感的胰岛细胞表达亨廷顿蛋白相关蛋白1被引量：7
2006年
目的探讨亨廷顿蛋白相关蛋白1(HAP1)在大鼠胰岛中的定位。方法应用一次性大剂量腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin)的方法选择性破坏大鼠胰岛B细胞复制糖尿病模型,免疫组织化学ABC法显示胰岛内HAP1和胰岛素免疫反应性。结果在正常大鼠胰腺内,HAP1选择性表达于胰岛内,HAP1免疫反应阳性细胞呈短条索状或团状分布在每个胰岛内,主要位于胰岛的中央部,与胰岛B细胞的分布十分相似。注射链脲佐菌素的大鼠,胰岛中含HAP1的细胞数量在注射链脲佐菌素3d后已明显减少,并随着注射后动物存活时间的延长而进一步进行性减少;在注射后4周的大鼠,胰岛中仅有少数散在分布的HAP1免疫反应弱阳性细胞。链脲佐菌素对胰岛中表达HAP1细胞的影响与对表达胰岛素细胞的影响一致。结论HAP1也存在于胰岛内,并主要定位于链脲佐菌素敏感的B细胞内。
刘晶晶陈樱花陈小伟郭剑锋陈星星廖敏张亦农李和
关键词：亨廷顿蛋白相关蛋白1胰岛素链脲佐菌素胰岛免疫组织化学
寒冷应激对大鼠肾上腺髓质亨廷顿蛋白相关蛋白1表达的影响被引量：1
2009年
目的探讨亨廷顿蛋白相关蛋白1（HAP1）在大鼠肾上腺髓质的超微结构定位,以及寒冷应激对大鼠肾上腺髓质HAP1表达的影响。方法成年雄性Wistar大鼠14只,2只用于免疫电镜研究,12只用于寒冷实验研究。寒冷实验中,将动物随机分为对照组和寒冷组,每组6只,寒冷组动物放置4℃环境下,12h后用免疫组织化学和Western blotting方法检测大鼠肾上腺髓质HAP1表达的变化。结果免疫电镜结果显示,HAP1免疫反应产物分布在肾上腺髓质细胞分泌颗粒外膜及分泌颗粒间的膜性细胞器上。寒冷组大鼠肾上腺髓质HAP1的表达明显减少,和对照组比较有显著性差异（P＆lt;0.01）。结论HAP1可能与肾上腺髓质细胞内分泌颗粒及位于分泌颗粒内的肾上腺素/去甲肾上腺素的运输和释放有关。
廖敏张亦农李和
关键词：亨廷顿蛋白相关蛋白1寒冷肾上腺髓质免疫电镜免疫印迹法
mGluR5在突变亨廷顿蛋白选择性细胞毒性中的作用及其机制探讨
亨廷顿病(Huntington’s Disease,HD)是一种由 HD 基因突变导致的常染色体显性遗传的神经退行性疾病,病理学上以纹状体投射神经元选择性退变、死亡为特征。HD 基因编码的亨廷顿蛋白(huntingtin...
黄珊珊贺军张亦农汪薇曦李和
关键词：亨廷顿病亨廷顿蛋白MGLUR5细胞毒性
文献传递
亨廷顿蛋白相关蛋白1在成年大鼠脊髓中的分布被引量：11
2004年
目的　观察亨廷顿蛋白相关蛋白 1(huntingtin associatedprotein 1,HAP1)在成年大鼠脊髓中的分布特点。方法　采用免疫组织化学ABC法和免疫印迹 (Westernblotting)方法。结果　免疫组织化学结果显示 ,在成年大鼠脊髓中 ,以背角灰质浅层 (RexedⅠ ,Ⅱ层 )的HAP1免疫反应性最强 ,阳性细胞最密集 ,免疫反应产物除分布在胞体外 ,还大量弥散分布于胞体间的神经毡内 ;背角深层有部分HAP1免疫反应阳性细胞呈散在分布 ,中央管周围灰质 (RexedX)内阳性胞体密度和免疫反应性强度仅次于后角浅层 ,而在脊髓腹角 ,偶见HAP1免疫反应阳性神经元。此外 ,Westernblotting分析显示 ,脊髓背角内HAP1表达水平明显高于脊髓前角。结论　HAP1主要分布于大鼠脊髓背角灰质浅层和中央管周围灰质神经元内 ,提示其可能与痛觉信息一级传入和 /或调控有关。
许晓源李和张亦农
关键词：亨廷顿蛋白相关蛋白1疼痛脊髓
R6/2型亨廷顿病转基因小鼠胰岛β细胞功能损伤被引量：2
2009年
目的:研究R6/2型亨廷顿病(HD)转基因小鼠胰岛β细胞的功能,揭示HD转基因小鼠继发糖尿病的机制。方法:利用R6/2型HD转基因小鼠模型,检测正常和HD小鼠空腹血糖以及血清胰岛素水平;并应用HE染色和免疫荧光技术分析正常和HD小鼠胰岛形态学差异。结果:与正常小鼠相比,R6/2型HD小鼠空腹血糖显著增高,血清胰岛素水平明显降低,胰岛萎缩,β细胞数量减少,细胞功能指数降低,而胰岛素抵抗指数正常。结论:胰岛β细胞功能损伤是引起R6/2HD转基因小鼠继发糖尿病发生的主要因素。
叶翠芳李和
关键词：亨廷顿病糖尿病胰腺Β细胞
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