国家重点基础研究发展计划(2011CB111600)
- 作品数：3 被引量：13H指数：3
- 相关作者：吴灶和简纪常蔡双虎黄郁葱王蓓更多>>
- 相关机构：广东海洋大学仲恺农业工程学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 罗非鱼无乳链球菌DNA疫苗的构建及免疫效果研究被引量：5
- 2013年
- 为研究罗非鱼源无乳链球菌重组DNA疫苗对鱼体的免疫保护作用,将Sip基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)构建重组质粒pcDNA-Sip,并以肌肉注射方式免疫吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)。免疫后第7、28天取样,采用PCR及RT-PCR方法检测pcDNA-Sip在各个组织(包括肌肉、脾脏、头肾、鳃及肝脏)中的表达情况;分别于免疫后第7、14、21、28天采集血清,使用ELISA方法检测抗体效价;免疫28d后进行攻毒实验,计算疫苗的免疫保护率。结果表明,重组质粒pcDNA-Sip可以在上述各组织中被检测到;免疫21d后抗体效价出现峰值达1∶5 120;免疫保护率为90%。由此证实,pcDNA-Sip重组质粒可以转染到罗非鱼组织细胞,并可在鱼体中持续表达,同时有较高的免疫保护率。
- 王蓓简纪常蔡双虎黄郁葱汤菊芬吴灶和
- 关键词：无乳链球菌免疫罗非鱼
- 溶藻弧菌免疫胶体金快速检测试纸条的制备被引量：5
- 2013年
- 采用溶藻弧菌ATCC17749菌体作为抗原免疫新西兰大白兔,制备兔抗溶藻弧菌多克隆抗体;利用柠檬酸钠还原氯金酸法制备胶体金及胶体金-抗体结合物,并将其喷涂在玻璃纤维膜上冷冻干燥;在硝酸纤维素膜上包被兔抗溶藻弧菌多克隆抗体和羊抗兔IgG分别作为检测线和控制线;将处理后的玻璃纤维素膜、硝酸纤维膜、样品垫及吸水纸组装成双抗夹心试纸条,并对试纸条灵敏度、特异性、稳定性进行评价。结果表明,制备的兔抗溶藻弧菌多克隆抗体的效价可达1∶512 000;胶体金溶胶的最佳制备条件为:加入1.8 mL 10 mg/mL的柠檬酸三钠,500 W微波炉中火加热10 min;试纸条检测线和质控线的抗体最佳包被量分别为8.0 mg/mL和1.0 mg/mL;试纸条检测灵敏度为1×106cfu/mL,特异性试验显示,试纸条与哈氏弧菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌、拟态弧菌、美人鱼弧菌、弗氏弧菌、河流弧菌、创伤弧菌等8株菌无交叉反应;稳定性试验表明,试纸在4℃干燥条件下能稳定保存5个月以上。制备的溶藻弧菌多克隆检测试纸条可灵敏、较特异地检测源自病鱼的溶藻弧菌,整个检测过程可在10 min内完成,适用于溶藻弧菌的快速检测。
- 王蓓梁军简纪常鲁义善蔡双虎黄郁葱汤菊芬蔡佳吴灶和
- 关键词：溶藻弧菌胶体金免疫层析试纸条
- 罗非鱼源无乳链球菌ZQ0910转录调控因子rovS基因的克隆及表达研究被引量：4
- 2013年
- 为了对罗非鱼源无乳链球菌ZQ0910株毒力相关转录调控因子rovS进行克隆及表达研究,实验根据GenBank上登录的相关基因设计引物,采用PCR方法扩增该株细菌的rovS基因,然后将该基因定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行IPTG诱导表达。结果显示,该基因有849个碱基,编码282个氨基酸;同源基因序列比对显示,无乳链球菌ZQ0910株与无乳链球菌2 603 V与ATCC13813的rovS基因的同源性最高;经IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为34 ku;用亲和层析后的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,经ELISA检测效价达到1∶512 000。研究结果表明,实验成功克隆与表达了rovS基因,为深入探讨RovS调节因子在调节细菌的代谢、生长和毒力等多种生命活动中的作用提供了理论依据。
- 王蓓简纪常鲁义善蔡双虎黄郁葱汤菊芬李桂欢吴灶和
- 关键词：克隆原核表达
