国家科技重大专项(2010ZX09401-306-1-1)
- 作品数：27 被引量：149H指数：6
- 相关作者：董志于超郭延垒余瑜李文娟更多>>
- 相关机构：重庆医科大学重庆医科大学附属第一医院重庆医科大学附属永川医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程理学生物学更多>>
- 麝香酮联合灯盏花素对TBI大鼠脑血流量及caspase-3蛋白表达的影响被引量：6
- 2014年
- 目的探讨麝香酮联合灯盏花素治疗创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠的治疗效果,并与单用灯盏花素进行比较。方法选择SD大鼠50只,随机分为假手术组、TBI模型组、麝香酮组(1 mg·kg-1)、灯盏花素(200 mg·kg-1)组和联用组,均n=10。采用液压打击法制造大鼠左侧TBI模型,假手术组只开骨窗。分别于制模前6 h、30 min,制模后30 min、6 h给予相应剂量的灯盏花素或麝香酮灌胃给药。激光多普勒血流仪检测各组制模前30 min及制模后30 min、6 h、12 h和24 h的额叶大脑皮质血流量(CBF)变化。制模后24 h,检测大鼠学习记忆能力、脑含水量及caspase-3蛋白表达的情况。结果与模型组比较,麝香酮组各指标无显著差异(P>0.05),灯盏花素组在制模后12 h、24 h CBF显著提高(P<0.05),联用组在各时间点CBF均显著高于模型组(P<0.01)。联用组较模型组和灯盏花素组学习记忆能力均显著提高(P<0.05或P<0.01),脑含水量显著降低(P<0.01),且caspase-3阳性细胞的表达显著降低(P<0.01)。结论麝香酮联合灯盏花素治疗急性重型TBI比单用灯盏花素具有更好的治疗作用。
- 徐露苏祖禄
- 关键词：灯盏花素大脑皮质
- 以右美沙芬为探针测定大鼠肝微粒体中CYP2D6酶活性及动力学分析被引量：2
- 2013年
- 目的建立大鼠肝微粒体中细胞色素P450(CYP)2D6酶活性的检测方法,以右美沙芬为探针底物进行体外酶动力学分析,为相关药物代谢研究提供参考依据。方法采用高效液相色谱-荧光检测(HPLC-FLD)方法提高检测灵敏度。通过优化大鼠肝微粒体孵育体系的反应条件,建立稳定的动力学评价方法。以Graphpad prism 5.01软件绘制米曼动力学曲线并计算V_(max)与K_m值。结果右美沙芬与其代谢产物右啡烷分离良好且无其他内源性物质干扰。右啡烷检测限为5 nmol·L^(-1)(S/N>3),定量下限为0.015μmol·L^(-1),线性范围为0.015~7.5μmol·L^(-1)。测定方法重现性好且稳定。经优化条件后测定,不同浓度的右美沙芬在0.2 mg·mL^(-1)蛋白浓度下,孵育10 min,测得动力学参数V_(max)为(1.075±0.060)nmol·min^(-1)·mg^(-1)pro,K_m为(7.470±0.983)μmol·L^(-1)。结论高效液相色谱结合荧光检测法可以有效提高灵敏度,此大鼠微粒体孵育体系的建立可应用于体外CYP2D6酶活性的测定及酶动力学研究。
- 惠俊敏郭延垒杨竹李文娟王应雄于超
- 关键词：右美沙芬细胞色素P450CYP2D6
- 三重四级杆复合线性离子阱质谱对丹皮酚经大鼠肝微粒体体外代谢产物的分析被引量：5
- 2013年
- 目的:以丹皮酚为研究对象,系统分析丹皮酚在体外经大鼠肝微粒体代谢的Ι相以及Ⅱ相代谢产物。方法:借助HPLC-DAD与三重四级杆复合线性离子阱高分辨质谱,采用Light Sight软件辅助建立丹皮酚及2,4-二羟基苯乙酮经肝微粒体代谢产物的pMRM-IDA分析方法,分析了丹皮酚在体外经大鼠肝微粒体代谢的Ι相以及Ⅱ相代谢产物。结果:丹皮酚在大鼠肝微粒体中经Ι相代谢后主要产物为4位去甲基的2,4-二羟基苯乙酮和4种氧化代谢物,而2,4-二羟基苯乙酮Ⅱ相代谢主要产物为4位葡萄糖醛酸化的糖苷化代谢物。结论:建立了丹皮酚Ι相以及Ⅱ相代谢产物的分析方法,为丹皮酚进一步的代谢研究以及临床合理化用药提供新的方向。
- 郭延垒吴明军赵德璋胡婕慧于超
- 关键词：丹皮酚肝微粒体
- 芹菜素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后TLR4/NF-κB表达的影响及神经保护作用被引量：5
- 2015年
- 目的探究芹菜素对局灶性缺血再灌注后脑组织Toll样受体4(TLR4)、核转录因子κB(NF-κB)的表达和神经细胞凋亡的影响及神经保护作用。方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血(90 min)再灌注(24 h)模型。将70只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组和芹菜素(10、25 mg·kg-1)组。观察芹菜素对神经功能缺损评分及梗死体积的影响,HE染色检测脑组织形态学改变,采用免疫组化法检测缺血核心区皮质和海马CA1区TLR4、NF-κBp65的表达,透射电镜观察缺血核心区皮质和海马CA1区神经元超微结构改变,ELISA法检测血清中TNF-α、IL-6浓度,TUNEL染色检测细胞凋亡。结果与模型组比较,芹菜素组能明显改善大鼠神经缺损症状,缩小梗死体积,减轻鼠脑病理形态学改变,减少TLR4、NF-κBp65阳性细胞表达,减少血清中TNF-α、IL-6的释放及细胞凋亡数(P<0.05,P<0.01)。结论芹菜素对局灶性缺血大脑能产生神经保护作用,降低神经细胞凋亡,其机制可能与抑制脑组织内TLR4、NF-κB表达有关。
- 封莎董志肖成燕李然然曹光秀
- 关键词：芹菜素脑缺血再灌注
- HPLC-UV法测定大鼠脑组织中5-羟色胺含量被引量：9
- 2012年
- 目的建立大鼠脑组织中5-羟色胺(5-HT)含量的HPLC-UV测定方法。方法采用SHIMADZU VP-ODS C18反相柱(250×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-0.01mol/L的醋酸钾缓冲液(10:90,V/V,用0.2mol/L柠檬酸调pH至4.00);流速:1.0ml/min;柱温:25℃;检测波长:275nm。结果 5-羟色胺在0.1～20μg/ml范围内,回归方程为A=46008.89C+1886.58,相关系数r=0.9999,最低检测限为40ng/ml,最低定量限为100ng/ml。加样回收率为89.62%～101.60%,日内、日间精密度均小于3%。结论该方法准确可靠,简单易行,可重复性强,适用于多样本5-HT的快速测定。
- 张远冬张有金郭延垒刘学庆于超
- 关键词：5-羟色胺脑组织
- 小鼠早期营养过剩诱导子代肥胖动物模型的建立被引量：1
- 2013年
- 目的：观察小鼠早期营养过剩对子代肥胖的影响，为研究儿童肥胖机制提供实验基础。方法：通过减少哺乳期间幼鼠只数建立早期营养过剩动物模型即母代模型，实验组在子代出生第3天调整为3只，窝，对照组调整为10只／窝。母乳喂养21d后给予小鼠标准饲料喂养至第8周，与同龄正常雄性ICR小鼠交配，得早期营养过剩子代和正常小鼠子代，在小鼠出生第3天，均调整为10只／窝。每周测定子代体质量，母乳喂养21d后给予小鼠标准饲料喂养，并测定第23-29天进食量。在第30天处死小鼠．HE染色观察性腺周围白色脂肪组织形态。结果：第8周合笼时，早期营养过剩母代平均体质量为（40．75±0．89）g，正常母代平均体质量为（33．01±1．71）g（t=4．021，P=-0．007）。与正常小鼠子代相比，早期营养过剩小鼠的子代体质量增加[1（F=465．387，P=-0．000），进食量增加（t＝3．709，P=0．006），脂肪细胞体积增大（t＝4．487，P=0．001）。结论：小鼠早期营养过剩增加了子代肥胖的危险。
- 纪金金董志
- 关键词：子代肥胖
- HPLC-RF测定小鼠肝微粒体中CYP2A5的酶活性
- 2013年
- 目的以香豆素为探针底物建立测定小鼠肝微粒体中CYP2A5酶活性的方法。方法用Waters Symmetry C18柱;流动相为0.1%醋酸-乙腈=70∶30;流速为1.0 mL·min-1,柱温30℃,E x=340 nm,E m=458 nm。香豆素与小鼠肝微粒体在37℃孵育20 min,加入含内标的冰乙腈终止,4℃、12000 r·min-1离心15 min,取上清液,用HPLC测定其代谢产物7-羟基香豆素的含量,以GraphPad Prism 5.0作图计算酶动力学参数。结果 7-羟基香豆素与内标两者分离良好。7-羟基香豆素的检测限为2 nmol·L-1(S/N≥3),线性范围为8～800nmol·L-1。日内日间精密度RSD小于5%,回收率为91.3%～101.4%。香豆素羟化反应的K m为2.15μmol·L-1;V max为9.74 pmol·(min·mg protein)-1。结论该方法稳定可靠,灵敏度高,适于体外CYP2A5酶活性的测定。
- 王二豪郭延垒张有金石亮张远冬王应雄杨竹于超
- 关键词：高效液相色谱-荧光检测法香豆素
- 快速微创建立弥漫型兔VX2肺癌模型及其生物学行为研究被引量：6
- 2011年
- 目的:探索一种快速、微创且能大批量制作弥漫型兔VX2肺癌模型的方法,为展开具有肺靶向抗肺癌药物及其制剂的研究奠定基础。方法:采用微创胸腔穿刺接种肿瘤的方法,将兔VX2肿瘤组织块移植于兔的右肺。采用螺旋CT技术检测VX2肿瘤在兔肺部的生长情况,并结合大体解剖及组织病理学检查评价模型的成功率以及观察肿瘤生长、转移等生物学行为。结果:该模型成功率为100%。VX2肿瘤在兔右肺的成瘤时间为5～10 d;其右胸腔内播散转移时间为20～25 d,左肺、肝及肾等转移时间为30～34 d,荷瘤兔中位生存期为32 d。结论:该方法具有简便快速、易于大批量制作、术后不良反应轻微以及模型成功率高等优点,利用本方法所制得的兔VX2肺癌模型与人类原发性肺癌有着相似的生物学行为,这可满足肺靶向抗肺癌药物及其制剂药效学研究之需。
- 刘宇兰作平张福军李伟程训官王杰何亚余瑜
- 关键词：微创VX2肿瘤
- 以CDNB为探针测定大鼠肝微粒体中GST活性并优化反应体系被引量：2
- 2013年
- 目的以1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)为探针,优化大鼠肝微粒体中谷胱甘肽硫转移酶(GST)催化反应的条件,为准确测定GST活性提供依据。方法采用Welch Materials Ultimate TM XB C18反相柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(7∶3),流速0.8 mL.min-1,检测波长238 nm。首先于0.05 mg.mL-1蛋白浓度下,孵育10 min,检测CDNB能否被GST催化发生反应,然后分别在CDNB及CDNB+GSH两种反应条件下,比较不同浓度蛋白、孵育时间、底物浓度的反应差异,选出合理反应条件。结果 CDNB在选定色谱条件下实现了快速分离,且无内源性干扰。CDNB在GST催化下发生了反应;在不同浓度蛋白、孵育时间、底物浓度下,两种反应条件下CDNB反应存在明显差异(P<0.05):CDNB及GSH作为起始条件时反应较少,此外,CDNB反应量与蛋白浓度、孵育时间分别呈线性关系,是优化反应条件的重要依据。结论采用CDNB测定GST活性时,选择合适的CDNB及GSH反应条件能准确地测定GST活性,可用于GST活性测定及相关动力学分析。
- 张有金郭延垒张艳辉李文娟于超
- 关键词：高效液相色谱法大鼠肝微粒体谷胱甘肽硫转移酶
- β-石竹烯对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障的保护作用被引量：5
- 2016年
- 目的观察β-石竹烯在局灶性脑缺血再灌注损伤模型中对大鼠血脑屏障的影响。方法采用中动脉栓塞法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,分别设假手术组、模型组、β-石竹烯组(34、102、306 mg·kg^(-1))和尼莫地平(4 mg·kg^(-1))组。2,3,7-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法测定大鼠的脑梗死体积,伊文思蓝法观察大鼠血脑屏障通透性的改变。免疫组化法观察缺血核心区皮质水通道蛋白-4(AQP-4)的阳性表达。Western blot法检测缺血核心区claudin-5水平变化和occluding的表达。结果再灌24 h后,β-石竹烯组较模型组可不同程度地改善神经缺损症状,降低神经行为学评分,减小脑梗死体积,减少缺血侧EB含量,减少AQP-4的表达,增加claudin-5和occluding的表达(P<0.05,P<0.01)。结论β-石竹烯可通过减少AQP-4的表达,上调claudin-5和occluding的表达来减轻脑缺血再灌注所导致的脑水肿,降低血脑屏障损伤。
- 李然然董志曹光秀刘洁
- 关键词：脑缺血再灌注血脑屏障
