河北省自然科学基金(C2004000631)
- 作品数：8 被引量：50H指数：5
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- 相关机构：河北医科大学邢台医学高等专科学校更多>>
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- 烫伤法克隆小鼠巨噬细胞来源的趋化因子基因被引量：1
- 2005年
- 王晓凌王永祥金玉怀吴淑慧
- 关键词：CDNA克隆巨噬细胞细胞来源小鼠烫伤TH2细胞
- IL-2、15、22基因对CVB3 VP1 DNA疫苗免疫效果的影响被引量：1
- 2005年
- 目的观察白细胞介素2(Interleukin2,IL2)、白细胞介素15(Interleukin15,IL15)和白细胞介素22(Interleukin22,IL22)基因对柯萨奇病毒(CoxasckievirusB3,CVB3)VP1DNA疫苗诱导小鼠免疫应答及保护作用的影响。方法取雄性BALBc小鼠,随机分为6组,每组20只,分别肌内注射盐水、pcDNA3、pcDNA3VP1、pcDNA3IL2+pcDNA3VP1、pcDNA3IL15+pcDNA3VP1和pcDNA3IL22+pcDNA3VP1,每周1次,共3次,每次免疫后6d取血清用微量中和试验检测CVB3中和抗体,3次免疫后用800TCID50CVB3感染小鼠,观察小鼠的生存时间和生存率。结果pcDNA3VP1、pcDNA3IL2+pcDNA3VP1和pcDNA3IL15+pcDNA3VP1组均能诱导小鼠产生中和抗体,抗体滴度随免疫次数增加而提高。病毒攻击后,各组的生存率差异无显著意义,pcDNA3IL2+pcDNA3VP1和pcDNA3IL15+pcDNA3VP1组较其他4组生存时间明显延长。pcDNA3IL22+pcDNA3VP1组虽也能诱导小鼠产生中和抗体,但抗体滴度和生存情况无明显变化。结论IL2、IL15基因对CVB3VP1DNA疫苗诱导小鼠产生免疫应答和免疫保护有一定的增强作用,而IL22基因无明显作用。
- 房文亮牛庆茂金玉怀揣侠王永祥
- 关键词：DNA疫苗IL-2VP1基因免疫效果免疫次数
- 融合基因DNA疫苗pcDNA3/MDC-VP1对柯萨奇病毒B组3型的免疫效果被引量：14
- 2006年
- 目的：观察巨噬细胞源趋化因子（MDC）基因与柯萨奇病毒B组3型（CVB3）VP1基因融合基因DNA疫苗pcDNA3／MDC-VP1的免疫效果，为CVB3疫苗的研制提供理论和实验依据。方法：6～8周雄性BALB／c纯系小鼠156只随机均分为6组，分别肌内注射0．9％氯化钠溶液（A组）、pcDNA3（B组）、pcDNA3／MDC（C组）、pcDNA3／VP1（D组）、pcDNA3／MDC加pcDNA3／VP1（E组）、pcDNA3／MDC-VP1（F组），3周注射1次，共3次。每次接种后20d断尾取血，测血清中和抗体效价。第3次免疫后3周，每组20只小鼠腹腔注射含10倍半数致死量LD50的CVB3的病毒液各0．2ml，观察各组小鼠的存活情况；每组剩余的6只小鼠腹腔注射含3倍LD50的病毒液各0．2ml，第7天取血后处死，用于检测血中病毒滴度。称量心脏质量计算心脏体重比。结果：A、B、C、D、E和F组的生存率分别为15％、10％、20％、25％、35％和50％，用Kaplan-Meier进行生存分析表明，F组（pcDNA3／MDC-VP1组）的生存状况好于其他各组；F组的血清中和抗体滴度明显提高、血中病毒滴度显著降低，心肌充血肿胀程度较轻。结论：融合基因DNA疫苗pcDNA3／MDC-VP1能诱导小鼠对CVB3 VP1产生更强的免疫应答，提高小鼠生存率。
- 王晓凌高志云耿媛金玉怀王永祥
- 关键词：柯萨奇病毒融合基因
- 白细胞介素2和15基因对柯萨奇病毒VP1 DNA疫苗诱导免疫应答的影响被引量：8
- 2005年
- 目的:观察白细胞介素2(IL 2)、白细胞介素15(IL 15)基因对柯萨奇病毒(CVB3)VP1DNA疫苗诱导 免疫应答的影响,以及该疫苗在小鼠受到致死量CVB3攻击时的保护作用。方法:采用雄性4～6周龄Balb/c小 鼠100只,随机分为5组,并分别肌内注射0.9%氯化钠溶液、pcDNA3、pcDNA3 VP1、pcDNA3 VP1加pcDNA3 IL 2和pcDNA3 VP1加pcDNA3 IL 15,每周注射1次,共3次,每次免疫后第6天取血清,用微量中和试验检测 CVB3中和抗体,3次免疫后用800TCID50CVB3感染小鼠,观察小鼠的生存时间和生存率。结果:pcDNA3 VP1、pcDNA3 VP1加pcDNA3 IL 2、pcDNA3 VP1加pcDNA3 IL 15组均诱导小鼠产生了中和抗体,抗体滴度 随免疫次数增加而提高。病毒攻击后,各组的生存率差异无统计学意义,pcDNA3 VP1加pcDNA3 IL 2、pcD NA3 VP1加pcDNA3 IL 15组较其他3组生存时间明显延长。结论:IL 2、IL 15基因对CVB3VP1DNA疫苗诱 导小鼠产生免疫应答和免疫保护有一定的增强作用。
- 房文亮李泽民揣侠王永祥金玉怀
- 关键词：白细胞介素柯萨奇病毒B组
- MDC、STxB与CVB3 VP1融合DNA疫苗的免疫效果比较被引量：1
- 2008年
- 目的比较小鼠巨噬细胞源趋化因子(macrophage-derived chemokine,MDC)和志贺毒素B亚单位(Shiga tox-in B subunit,STxB)与柯萨奇病毒B组3型(coxsackievirus B3,CVB3)VP1融合DNA疫苗的免疫效果。方法将120只雄性BALB/c小鼠分为6组,每组20只,分别肌内注射pcDNA3、pcDNA3/MDC、pcDNA3/STxB、pcDNA3/VP1、pcDNA3/MDC-VP1和pcDNA3/STxB-VP1,每3周1次,共3次,每次免疫后20d取血清,用微量中和试验检测CVB3中和抗体,第3次免疫后3周,每组取3只小鼠,取脾脏制备脾细胞,用CCK-8法检测特异性CTL杀伤活性,其余小鼠用10LD50的CVB3攻击,观察小鼠的生存情况。结果pcDNA3/VP1、pcDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1组均能诱导小鼠产生中和抗体;除pcDNA3/STxB-VP1组外,另两组抗体滴度随免疫次数增加而提高;第3次免疫后,pcDNA3/MDC-VP1组平均抗体滴度和脾淋巴细胞特异性CTL杀伤活性高于pcDNA3/VP1(P<0.05)。病毒攻击后,pcDNA3/MDC-VP1组21d生存率高于其他各组(P<0.05)。pcDNA3/STxB-VP1组抗体滴度和生存情况与pcDNA3/VP1组无明显差异。结论融合基因疫苗pcDNA3/MDC-VP1能诱导小鼠产生较强的体液和细胞免疫,提高了小鼠生存率,免疫效果优于pcDNA3/STxB-VP1。
- 高志云揣侠蓝佳明王晓凌张永红王刚王永祥
- 关键词：柯萨奇病毒B组3型
- 靶向基因疫苗pcDNA3/MDC-VP1的构建及免疫效果被引量：5
- 2006年
- 用RT-PCR扩增小鼠巨噬细胞源趋化因子(macrophage-derived chemokine,MDC)基因,与柯萨奇病毒B组3型(CVB3)VP1基因通过一个编码10个氨基酸残基的接头序列(Gly4Ser)2相连,形成融合基因MDC-VP1,构建真核表达质粒pcDNA3/MDC-VP1,作为疫苗免疫BALB/c小鼠.3次免疫后,pcDNA3/MDC-VP1组小鼠血清中和抗体滴度明显高于pcDNA3/VP1组;而病毒滴度低于pcDNA3/VP1组.用10 LD50CVB3攻击,pcDNA3/MDC-VP1组小鼠生存率为50%,用Kaplan-Meier法进行生存分析,生存率高于其他各组.
- 王晓凌吴淑慧高志云王永祥
- 关键词：柯萨奇病毒B组3型中和抗体
- 人IL-2信号肽基因增强柯萨奇病毒B3型VP1 DNA疫苗诱导的中和抗体应答被引量：14
- 2004年
- 目的 将人白细胞介素 2 (hIL 2 )信号肽基因与柯萨奇病毒B组 3型 (CVB3)的VP1基因融合 ,构建分泌型VP1真核表达质粒pcDNA3/sVP1;免疫小鼠后 ,通过测定血清特异性中和抗体效价及对致死量CVB3攻击的保护作用 ,评价疫苗的免疫效果。方法 采用重叠区基因扩增法 ,将hIL 2信号肽基因连同其下游 11个氨基酸残基的基因与CVB3VP1基因拼接 ,获得分泌型VP1(sVP1)的基因 ;将sVP1基因克隆至真核表达载体pcDNA3,构建分泌型VP1真核表达质粒pcDNA3/sVP1;肌注免疫小鼠 ,测定血清中CVB3特异性中和抗体的效价 ;第 3次免疫后 2周 ,腹腔内注射 10 0 0TCID50 的CVB3,观察小鼠生存情况。结果 成功构建了分泌型VP1真核表达质粒pcDNA3/sVP1,插入的sVP1基因中含有hIL 2信号肽及其下游 11个氨基酸残基的基因以及VP1基因 ;pcDNA3/sVP1可比对照质粒pcDNA3/VP1诱导小鼠产生更高水平的中和抗体。结论 hIL 2信号肽基因增强了柯萨奇病毒B3型VP1DNA疫苗诱导的中和抗体应答 。
- 方艳辉金玉怀王永祥于丹军金士香谢立新
- 关键词：DNA疫苗柯萨奇病毒信号肽
- C3d对分泌型柯萨奇病毒B组3型VP1 DNA疫苗的免疫增强作用被引量：12
- 2007年
- 目的构建分泌型柯萨奇病毒 B 组3型(CVB3)衣壳蛋白1(sVP1)与三拷贝补体3片段(C3d3)融合基因疫苗,并观察其免疫效果。方法将 C3d3 cDNA 与带有白细胞介素2(IL-2)信号肽的 CVB3 VP1基因拼接,构建真核表达质粒 pcDNA3/sVP1-C3d3。BALB/c 小鼠随机分为3组,分别肌肉注射 pcDNA3/sVP1-C3d3、pcDNA3/sVP1和 pcDNA3质粒,于不同时间检测小鼠血清中和抗体滴度、特异性细胞毒性 T 淋巴细胞(CTL)杀伤活性、血中病毒滴度,并观察疫苗的免疫保护作用。结果小鼠的中和抗体滴度随免疫次数增加而提高,第3次免疫后 pcDNA3/sVP1-C3d3组中和抗体滴度(33.6±1.7)和特异性 CTL 杀伤率(66.1%±2.9%)均明显高于 pcDNA3/sVP1组(28.3±1.7,52.8%±3.3%,均 P<0.05);以致死量 CVB3感染小鼠后,经融合基因免疫的小鼠血中病毒滴度显著降低,生存率达50%,而 pcDNA3/sVP1组仅为25%,pcDNA3组无存活。结论 C3d 可以显著增强sVP1基因免疫诱导的特异性免疫应答。
- 赵娜韩小艳王晓凌李剑李伟谢立新李琳王永祥
- 关键词：柯萨奇病毒B组
