上海市自然科学基金(09ZR1430800)
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
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- 临床分离MRSA中氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6)′-APH(2″)的克隆表达与活性测定
- 2011年
- 双功能酶AAC(6′)-APH(2″)是一种重要的氨基糖苷类抗生素钝化酶,从临床分离出的6株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的总DNA中克隆得到AAC(6′)-APH(2″)基因,将该基因插入质粒pET-28a中构建表达载体,然后将该重组质粒转入大肠杆菌BL21进行异源表达,在IPTG的诱导下产生大量可溶性目标重组蛋白,该重组蛋白经亲和层析分离纯化,SDS-PAGE鉴定纯度大于90%;建立了此双功能酶的体外测活方法,为建立氨基糖苷类抗生素双功能酶抑制剂筛选模型奠定基础.
- 王春霞陈俊升邵雷陈代杰李继安
- 关键词：氨基糖苷类抗生素耐甲氧西林金葡菌双功能酶
- 流加补料技术在林可霉素发酵中的应用被引量：6
- 2012年
- 前期摇瓶预试验表明林可霉素(1)发酵过程中存在葡萄糖效应,整个发酵代谢过程特别是发酵前期耗氧量较高,于是在200 L发酵罐中针对上述两点进行了工艺优化。发酵中后期通过流加葡萄糖和硫酸铵解除葡萄糖效应,同时稳定1产生菌的发酵代谢环境,使整个发酵过程的菌丝形态呈现良好的新老接替,解决了1产生菌产抗后劲不足的问题。同时在流加补料工艺中延长了发酵周期,使1发酵放罐效价较分批补料工艺提高了50.3%,比目前国内1放罐的平均效价(7 500 g/ml)提高了91.1%。
- 李继安林惠敏牛金刚张宏周陈代杰
- 关键词：林可霉素分批补料发酵
- 临床分离MRSA中氨基糖苷类抗生素磷酸化酶的克隆表达与活性测定被引量：1
- 2010年
- 目的:从临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中克隆氨基糖苷类抗生素磷酸化酶基因并异源表达,建立其磷酸化反应的体外测活方法。方法:考察临床分离MRSA对氨基糖苷类抗生素的敏感性,从中克隆磷酸化酶基因,并连入pET28a构建表达载体和菌株,将表达的重组蛋白以亲和色谱分离纯化;使用ESI-MS以及抗菌活性实验测定其磷酸化酶活性。结果:药敏实验表明临床分离的6株MRSA均对氨基糖苷类抗生素不敏感,重组表达克隆到的磷酸化酶,表达产物纯化后的纯度大于90%,体外催化试验表明,重组磷酸化酶2h内可以催化反应体系内的卡那霉素B完全磷酸化。结论:异源表达的氨基糖苷类抗生素磷酸化酶具有很好的活性,体外测活方法可靠快捷,为建立氨基糖苷类抗生素磷酸化酶抑制剂筛选模型打下基础。
- 陈俊升苏敏陈代杰李继安阚士东邵雷
- 关键词：氨基糖苷类抗生素耐甲氧西林金葡菌磷酸化酶
