国家自然科学基金(30471644)
- 作品数：12 被引量：10H指数：2
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- 双色ES探针检测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因的应用研究被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨使用bcr/abl双色ES探针的荧光原位杂交(fluorescence in-situ hybrid ization,FISH)应用于慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因检测的意义。方法:使用荧光原位杂交方法对2005年1月至2006年2月本院收治的12例慢性粒细胞白血病患者之骨髓细胞进行检测分析。结果:12例CML均检出bcr/abl基因的存在,其中2例伴ASS基因缺失。结论:使用bcr/abl双色ES探针进行荧光原位杂交能为bcr/abl融合基因的检测提供准确直观的依据。
- 杜庆华林秀梅应逸毛平
- 关键词：慢性粒细胞白血病荧光原位杂交BCR/ABL融合基因
- 急性髓性白血病细胞体外培养及其生物学特性的研究被引量：2
- 2009年
- 目的:研究急性白血病细胞体外培养的方法及其在体外培养过程中生物学特性的变化。方法:分别收集10例急性髓性白血病细胞,用含细胞因子无血清液体培养基进行培养2～4周,并对培养前后细胞进行细胞计数,流式细胞仪检测CD33、CD13、CD34及CD14表面抗原鉴定细胞分化,半固体培养法对培养前后的白血病细胞进行集落形成能力检测。结果:含细胞因子无血清液体培养基能有效支持AML细胞进行体外短期培养及增殖,14d时细胞得到明显增殖,达(25.1±11.7)倍,优于培养前,P<0.05;培养28d时细胞数较前明显减少,P<0.05。集落形成单位培养14d后与培养前比较差异无统计学意义,P>0.05;但培养28d后显著低于培养前,P<0.05。在体外悬浮培养14d时,CD33、CD13、CD34及CD14的表达率与培养前差异无统计学意义(P>0.05),但至28d时,CD33、CD13及CD14的表达率高于培养前,而CD34表达率比培养前降低,P<0.05。结论:含细胞因子无血清液体培养基能有效支持急性髓性白血病细胞短期体外培养并维持其生物学特性。
- 王彩霞毛平张玉平许艳丽莫文健杜庆华
- 关键词：生物学特性免疫表型集落
- 急性髓系白血病患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖分析
- 2009年
- 本研究探讨AML患者在初发、治疗缓解后、复发等不同疾病状态下外周血T细胞TCRVβ亚家族表达及T细胞克隆性增殖的情况,分析不同白血病细胞负荷对患者外周血T淋巴细胞数量及功能,尤其是对抗白血病功能的影响。应用RT-PCR扩增11例AML白血病患者不同疾病状态下及3名正常供者外周血的TCRBV24个家族的基因序列,通过基因扫描(genescan)的方法判断TCRBV家族的克隆表达、CDR3克隆性质,比较不同疾病状态下白血病患者外周血T细胞的Vβ亚家族的应用、克隆性增殖、T细胞的复杂性以及T细胞免疫表型的变化。结果表明:11例AML白血病患者初诊时外周血T细胞均表达部分TCRVβ亚家族,经体外诱导后TCRVβ亚家族表达增加;完全缓解期患者外周血T细胞TCRVβ亚家族数量明显增多,但未达到完全正常;4例患者在复发时TCRVβ亚家族表达数量明显下降;11例患者中有9例在初诊时外周血有1至2个TCRVβ亚家族T细胞克隆性增殖,缓解期克隆性增殖的Vβ亚家族T细胞有增加趋势,在多数病例观察到部分Vβ亚家族T细胞在初发、缓解、体外诱导扩增以及复发时仍维持克隆性增殖状态;AML白血病患者初发及复发时T细胞CDR3复杂性明显降低,呈偏态分布,而疾病缓解时T细胞复杂性有所改善。结论:AML白血病患者外周血T细胞TCRVβ亚家族呈限制性表达;在大多数病例中无论是疾病初发抑或缓解及体外诱导、甚至在疾病复发时均可观察到克隆性T细胞的存在;在部分病例中某些Vβ亚家族在上述不同疾病状态下始终维持克隆性增殖状态,部分Vβ亚家族的克隆性增殖同白血病细胞的存在相关;在疾病状态下,AML白血病患者外周血T细胞的复杂性有所降低,而疾病缓解后可部分恢复。
- 毛平罗畅如张玉平王彩霞许艳丽应逸杜庆华谢健晋
- 关键词：VΒ亚家族克隆性增殖
- 脐血间充质干细胞支持下脐血单个核细胞扩增的研究
- 2009年
- 目的探讨脐血源间充质十细胞联合外源性细胞因子对脐血单个核细胞体外扩增的支持作用。方法从脐血中分离、培养出间充质干细胞并检测其细胞表面抗原；以此间充质干细胞作为细胞滋养层。将脐血单个核细胞接种于无血清培养体系中培养18天，在第0、7、10、14及18天检测有核细胞总数、CD34＋、CD133＋细胞数、集落形成单位数和（G2＋M＋S）期细胞含量变化。结果①从脐血中分离、培养出的间充质干细胞能稳定表达CD29、CD105和CD44，但不表达CD34和CD133；②外源性细胞因子及脐血源间充质干细胞均支持脐血间充质干细胞扩增，但以细胞因子联合脐血源间充质干细胞组效果最好，在第10天上述检测指标达到峰值，分别为第0天的（6．91±1．91）、（7．75±1.24）、（6．49±1．33）、（15．62±1．29）和（28．26±6．58）倍，且维持造血至少18天。结论①从脐血中能成功分离、培养血间充质干细胞，并完成细胞表型的初步鉴定；②外源性细胞网子联合脐血源间充质干细胞可有效扩增脐血单个核细胞。
- 邓婷芬毛平王彩霞
- 关键词：脐血细胞因子间充质干细胞细胞培养
- AML-M5患者树突细胞诱导活化自体外周血T细胞增殖及克隆性分析
- 2009年
- AML—M5是急性髓系白血病各型中预后较差的一种，该病好发于老年人，患者常不能耐受高强度化疗，一般治疗预后较差。由于免疫细胞具有自动识别异己抗原（包括恶性转化的突变克隆肿瘤细胞）的特点，可以敏感地追踪、识别并杀伤少量残留的肿瘤细胞，在清除微量残留白血病（MRD）等方面具有天然的优势。在传统化疗等治疗的基础上联合应用过继性细胞免疫治疗，有可能提高白血病的预后。我们利用白血病树突细胞（DC）结合CD3、
- 毛平张玉平王彩霞许艳丽应逸杜庆华谢健晋王顺清
- 关键词：克隆性分析树突细胞T细胞增殖自体外周血诱导活化微量残留白血病
- 脐血造血细胞体外集落培养最佳收获时机的探讨被引量：2
- 2006年
- 目的探讨脐血(CB)多系造血集落培养在不同培养条件下脐血造血细胞体外扩增的最佳收获时机。方法将从新鲜CB标本中分离出的单个核细胞(MNC)分别接种于已建立的无血清培养基,该培养基分别含单用人骨髓基质细胞、单用细胞因子及细胞因子联合入骨髓基质细胞(HBMSC)支持培养体系。在0、6、10及14d各时间点分别取细胞进行巨细胞集落形成单位(CFU-MK)、红系爆式集落形成单位(BFU-E)及粒单细胞集落形成单位(CFU-GM)培养。结果在体外培养过程中,第10d时各组CFU-MK、BFU-E及CFU-GM数均高于组内其它时间点(P<0.05);在含HBMSC支持培养的组集落生成数优于其它组(P<0.05)。结论脐血MNC体外培养过程中,第10d可能是收获的最佳时机。FIBMSC能更好地维持造血干/祖细胞的活性,使其集落形成能数得到有效扩增。
- 王彩霞毛平莫文健林秀杜庆华
- 关键词：基质细胞脐血集落
- 急性白血病错配修复基因表达及启动子甲基化被引量：1
- 2011年
- 目的探讨急性白血病患者DNA修复基因(hMSH2和hMLH1基因)mRNA、蛋白表达情况及其启动子甲基化状态。方法选取56例急性白血病患者和30名健康志愿者,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(western blot)检测其单个核细胞错配修复基因hMSH2和hMLH1的mRNA及蛋白表达,用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测hMSH2和hMLH1启动子区甲基化状态。结果与健康志愿者组比较,急性白血病患者的错配修复基因hMSH2和hMLH1均明显低表达,差异有统计学意义(P<0.05);急性白血病患者hMSH2和hMLH1甲基化阳性率为66.1%(37/56)和55.4%(31/56),明显高于健康志愿者的10.0%(3/30)和6.7%(2/30),差异有统计学意义(P<0.05);急性白血病患者hMSH2和hMLH1表达与其甲基化状态呈负相关性(rhMSH2=-0.624,P=0.000;rhMLH1=-0.589,P=0.002)。结论急性白血病患者的hMSH2和hMLH1基因呈低表达,其启动子呈高甲基化水平,急性白血病患者hMSH2和hMLH1基因表达低下与其启动子甲基化状态有关。
- 王彩霞毛平杜庆华张玉平周志衡
- 关键词：DNA甲基化急性白血病错配修复基因
- 急性白血病组蛋白乙酰化修饰及其对错配修复基因表达的调控作用被引量：2
- 2011年
- 目的探讨急性白血病患者组蛋白乙酰化修饰规律，并探索组蛋白乙酰化对错配修复基因hMSH2和hMLH1差异表达的调控作用。方法用反转录-聚合酶链反应（RT．PCR）方法检测56例急性白血病患者和30名健康志愿者单个核细胞（MNC）的错配修复基因hMSH2和hMLH1mRNA的表达，用Western blot法检测组蛋白H3、H4、去乙酰化酶（HDAC1）、hMSH2和hMLH1基因的蛋白表达情况。用组蛋白去乙酰转移酶抑制剂（TSA）诱导30例白血病患者MNC乙酰化，并检测处理后MNC的组蛋白H3、H4、HDAC1、hMSH2和hMLH1的表达状态变化。结果急性白血病组的hMSH2和hMLH1、组蛋白H3、H4的蛋白表达量分别为0．4610±0．1211、0．4013±0．1143、0．4103±0．1241和0．4251±0．1081，均明显低于健康志愿者组的蛋白表达量（0．9461±0．1841、0．9960±0．2021、0．8971±0．1194、0．9513±0．1953），差异均有统计学意义（t值分别为3．341、3．935、2．843、3．575，P〈0．05）；而急性白血病患者组的HDAC1表达（0．8841±0．2018）高于健康志愿者组的表达量（0．5142±0．1340），差异有统计学意义（t=2．634，P〈0．05）；TSA作用于白血病单个核细胞后，组蛋白H3、H4、hMSH2和hMLH1的表达上调，分别比阴性对照组表达上调2．9倍、3．4倍、1．5倍和1．6倍，而HDAC1的蛋白表达出现明显的抑制，表达下调为阴性对照组的40％。结论急性白血病患者的组蛋白乙酰化呈低表达现象，组蛋白乙酰化在急性白血病患者中对错配修复基因差异表达具有调控作用。
- 王彩霞毛平杜庆华王顺清李庆山张玉平应逸莫文健周志衡
- 关键词：白血病急性组蛋白乙酰化错配修复基因
- 人骨髓基质细胞支持脐血造血细胞扩增后脐血归巢相关特性变化的研究被引量：1
- 2008年
- 目的探讨人骨髓基质细胞（HBMSC）联合细胞因子对脐血（CB）单个核细胞（MNC）体外培养后造血细胞归巢相关特性的变化以评价HBMSC及细胞因子支持的体外扩增对脐血归巢相关功能的影响。方法将从新鲜CB标本中分离出的MNC分别接种于已建立的无血清培养体系：A组：对照组；B组：单用HBMSC支持；C组：单用细胞因子支持；D组：细胞因子和HBMSC联合支持。分别在0d（d0）、10d（d10）及14d（d14）用流式细胞仪检测CD34^＋CXCR4细胞、CD34^＋VLA-4^＋细胞的变化情况。结果①在体外培养过程中，各时间点D组CD34^＋CXCR4^＋细胞扩增倍数均高于A、B、C组（P〈0.05）；②B、C和D组与A组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论HBMSC联合外源性细胞因子对脐血MNC进行体外培养，能有效扩增具归巢能力的造血干祖细胞数目。
- 王彩霞毛平张玉平林秀梅杜庆华
- 关键词：基质细胞脐血归巢
- 脐血单个核细胞体外扩增的实验研究
- 2009年
- 目的探讨含有细胞因子的无血清培养基对脐血单个核细胞（MNC）体外培养后的扩增情况和用于移植的安全性。方法从新鲜脐血中分离出的MNC，在含细胞因子的无血清培养体系中培养。分别将培养前和培养第10天时的造血细胞进行细胞计数、细胞活力分析、集落分析、流式细胞仪检测表面标记、彗星试验分析DNA的损伤情况、无菌性分析及移植至NOD／SCID小鼠体内等项研究。结果经过体外短期培养，脐血中MNC、CD34^＋、CD133^＋、CD34^＋CXCR4^＋及CD34^＋VLA-4^＋细胞扩增倍数均比培养前增高（P〈0．05）；半固体培养基可支持多系集落的生长；培养前和培养第10天时脐血细胞DNA损伤率均低于5％；无菌性分析提示细胞未受污染。将体外扩增后的脐血造血细胞移植入NOD／SCID小鼠体内，与新鲜脐血移植相比，小鼠的存活时间及植入能力的差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论脐血造血细胞体外扩增是解决脐血造血细胞数量不足的有效方法。脐血造血细胞经短期培养能为造血干细胞移植提供安全而具植入能力的造血细胞。
- 王彩霞毛平张玉平邓婷芬许艳丽杜庆华谢健晋
- 关键词：脐带血集落彗星试验NOD/SCID小鼠
