国家自然科学基金(30973064)
- 作品数：10 被引量：28H指数：3
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- 组织工程骨膜的构建及重组人骨形态发生蛋白-2对其体外成骨能力的影响
- 2014年
- 目的探讨重组人骨形态发生蛋白-2对组织工程骨膜体外成骨能力的影响,以期构建性能更加优良的产品用于临床。方法兔骨髓间充质干细胞经成骨诱导培养,接种于猪小肠黏膜下层构建组织工程骨膜,后分别对其使用含有100 ng/ml、50 ng/ml、10 ng/ml及不含有重组人骨形态发生蛋白-2的成骨诱导培养基进行培养,7天后行电镜扫描,并对各组在多个时间点采用MTT法绘制生长曲线、测定碱性磷酸酶和骨钙素含量,分析重组人骨形态发生蛋白-2对组织工程骨膜成骨能力的影响。结果加入重组人骨形态发生蛋白-2培养的组织工程骨膜在细胞增殖速度、碱性磷酸酶和骨钙素素表达量均高于未加入重组人骨形态发生蛋白-2组,且与浓度成正相关。结论重组人骨形态发生蛋白-2可提高组织工程骨膜体外成骨能力。
- 任广铁张苍宇拓振合庾佳佳孙瑞汪静赵琳
- 关键词：骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白-2
- 组织工程骨膜及脱蛋白骨辅助支架修复兔桡骨大段骨缺损被引量：4
- 2014年
- 目的评价组织工程骨膜体内成骨修复兔大段骨缺损及同种异体脱蛋白骨(deproteinized bone,DPB)作为组织工程骨膜辅助支架材料的效果。方法分离培养1月龄新西兰大白兔BMSCs,以成骨诱导培养液诱导成骨分化后,与猪小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)复合构建组织工程骨膜,扫描电镜观察细胞与SIS复合情况。取新鲜同种异体骨段细密打孔后进行脱蛋白处理,制成DPB支架材料。将组织工程骨膜呈"外套状"包被DPB,并用可吸收缝线捆扎制备组织工程骨膜/DPB复合体。取4月龄清洁级新西兰大白兔48只,随机分成A、B、C、D 4组(n=12),切除左侧桡骨干3.5 cm长骨段制作大段骨缺损动物模型。A、B、C组分别于骨缺损处植入组织工程骨膜、DPB和组织工程骨膜/DPB复合体,D组骨缺损旷置。术后4、8、12周各组随机取4只动物行X线片观察及评分;术后8周各组随机处死4只动物,取骨缺损区标本行HE及Masson染色观察。结果扫描电镜观察构建的组织工程骨膜示SIS上黏附大量细胞。X线片检查示术后各时间点A、C组新生骨组织量明显多于B、D组。术后各时间点A、C组X线片评分显著高于B、D组,A组高于C组,B组高于D组,差异均有统计学意义(P<0.05)。组织学观察示A组骨缺损处为大量新生骨组织,新生骨组织中可见不规则髓腔样结构及丰富的血管腔;B组骨缺损处见植入的DPB,DPB降解不明显;C组骨缺损处见较多新生骨组织,新生骨组织中可见呈岛状分布的DPB,DPB降解明显;D组骨缺损处仅见少量胶原纤维。结论以SIS和BMSCs构建的组织工程骨膜可修复兔桡骨大段骨缺损;DPB不能对组织工程骨膜成骨起到理想的支架作用,组织工程骨膜辅助支架材料有待进一步探索。
- 拓振合赵琳王栓科鲁永婷任广铁张苍宇庾佳佳孙瑞汪静
- 关键词：骨组织工程小肠黏膜下层BMSCS脱蛋白骨
- 关节突关节方向在退变性腰椎滑脱中的作用研究进展被引量：3
- 2014年
- 目的综述关节突关节方向(facet joint orientation,FJO)在退变性腰椎滑脱中的作用研究进展。方法查阅国内外有关退变性腰椎滑脱患者FJO的研究文献,从基本概念、测量方法、病因争议及临床意义4个方面进行总结分析。结果螺旋CT的多层面重建技术有望成为研究FJO的一种新方法;矢状化FJO与退变性腰椎滑脱的因果关系尚存在争议,需要进一步的前瞻性研究证实;矢状化FJO对退变性腰椎滑脱的预防及手术方案的选择有着重要意义。结论 FJO与退变性腰椎滑脱的病因关系仍待进一步研究。
- 杨家赵方诗元
- 关键词：退变性腰椎滑脱
- 组织工程骨膜同种异体体内修复兔肩胛骨大段骨缺损的实验研究被引量：1
- 2016年
- [目的]对比观察组织工程骨膜(tissue-engineered periosteum,TEP)及脱蛋白骨对兔肩胛骨大段骨缺损的修复效果,探讨组织工程骨膜通过膜内化骨修复大段不规则骨缺损的可行性。[方法]将体外分离培养的兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)传代扩增及成骨诱导后,与自制的猪小肠黏膜下基质(small intestinal submucosa,SIS)复合培养构建组织工程化骨膜。选取2个月龄新西兰大白兔60只,行肩胛骨次全切除术,制作大段不规则骨缺损模型。随机分为5组,每组12只:A组在骨缺损区置入TEP;B组在骨缺损区置入脱蛋白骨(deproteinization bone,DPB);C组在骨缺损区置入TEP+DPB复合体;D组、E组则分别为造模后不处理空白组和切除骨保留自身骨膜组。术后4、8、12周时,各组每次分别处死4只动物收集标本,进行X线片及组织学检测,对比分析各组肩胛骨大段骨缺损的修复效果。[结果]X线表现:不同时间段,A、C组均有相当数量的新生骨形成,密度接近正常骨。其中C组外观形态与正常肩胛骨相似,塑形好,与E组密度较接近。B组DPB逐渐被吸收,无骨缺损修复征象。D组缺损区始终无高密度影出现。组织学表现:A、C、E组4周时以多点方式形成新骨,8周时出现岛状生长的骨组织,12周时新生骨趋成熟,呈编织状排列,可见血管腔。B、D组仅为胶原瘢痕组织,无新骨生成。[结论]组织工程骨膜可修复兔肩胛骨大段骨缺损,其通过膜内化骨修复大段不规则骨缺损是可行的。
- 庾佳佳赵琳
- 兔骨髓间充质干细胞的分离培养及成骨诱导被引量：10
- 2013年
- 背景:骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能,且可大量体外扩增培养,是重要的组织工程种子细胞。但尚无统一的体外培养及定向诱导方法。目的:探讨体外定向诱导兔骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的可行性。方法:应用密度梯度离心法从兔四肢骨中分离纯化间充质干细胞,应用密度为1.073g/mL的Percoll分离液,3000r/min×30min离心,区别于相关报道的Ficoll分离液,2000-2500r/min×(20-30)min离心以及全骨髓培养法体外扩增至第3代,分别在普通培养基(对照组)和成骨诱导培养基(实验组)中培养。结果与结论:成功获得大量高纯度骨髓间充质干细胞。经成骨诱导后,实验组骨钙素含量明显高于对照组(P<0.05)。实验组碱性磷酸酶和钙结节染色阳性,对照组均阴性。结果表明使用密度梯度离心法可成功建立兔骨髓间充质干细胞的分离培养体系,骨髓间充质干细胞可定向诱导为成骨细胞。
- 庾佳佳汪新柱赵琳孙瑞闫雪萍张苍宇任广铁拓振合
- 关键词：干细胞骨髓干细胞骨髓间充质干细胞密度梯度离心法成骨诱导骨组织工程
- 组织工程化骨膜的构建及其在体外的成骨活性检测被引量：3
- 2014年
- [目的]利用兔骨髓间充质干细胞与猪小肠粘膜下层复合构建组织工程骨膜,体外观察其生物学特性并检测成骨活性,为将来体内移植提供实验依据。[方法]以猪小肠粘膜下层基质作为支架材料,与新西兰大白兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)或体外成骨诱导培养后的BMSCs,采用沉淀法复合构建两种组织工程化骨膜(M2及M1),用MTT法检测种子细胞在支架材料上的生长情况;扫描电镜(SEM)观察种子细胞在支架材料上的生长、粘附状态;通过ELISA检测碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌水平。[结果]种子细胞在SIS上生长良好,M2及M1在含有成骨诱导剂的培养基中培养可分泌一定量骨钙素(11 d达峰值),并表达碱性磷酸酶活性(7 d达峰值)。而且,Ml所分泌骨钙素的量与碱性磷酸酶活性高于M2,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]利用兔骨髓间充质干细胞与猪小肠粘膜下层复合构建组织工程化骨膜能够保持较稳定的生物活性,种子细胞能良好地在支架上附着、生长增殖,并稳定地分泌一定量的骨钙素和碱性磷酸酶,在体外表达较强的成骨活性。
- 张苍宇汪新柱任广铁拓振合庾佳佳孙瑞汪静赵琳
- 关键词：骨钙素碱性磷酸酶
- 组织工程骨膜同种异体体内成骨修复兔肩胛骨缺损的初步研究被引量：5
- 2014年
- 目的 以兔BMSCs和猪小肠黏膜下层（small intestinal submucosa，SIS）复合构建组织工程骨膜，植入同种异体兔体内修复肩胛骨缺损，探讨组织工程骨膜修复大块不规则骨缺损的可行性。 方法取2周～1月龄新西兰大白兔骨髓分离培养BMSCs，取猪近端空肠制备SIS，两者复合构建组织工程骨膜。取6月龄新西兰大白兔18只制备单侧肩胛骨3 cm × 3 cm次全切骨缺损模型，随机分为实验组和对照组（n=9），分别于缺损处植入组织工程骨膜和单纯SIS。术后观察动物大体情况；8周时处死动物后行X线片观察并按Lane-Sandhu X 线片评分标准评分；标本大体观察后，行HE及Masson染色观察。 结果实验动物术后进食、活动均正常，切口无红肿、渗液。X线片观察示实验组骨缺损区有片状新生骨形成，密度与正常骨相同；对照组骨缺损区无骨形成征象，骨缺损区密度与周围软组织影相似。X线片评分实验组为（6.67 ± 0.32）分，对照组为（0.32 ± 0.04）分，比较差异有统计学意义（t=19.871，P=0.001）。标本大体观察示实验组两端桥接部已形成骨性愈合，部分骨缺损区被新生骨填充；对照组无骨组织生成。HE及Masson染色示实验组骨缺损处有新骨生成，骨组织中可见血管腔及髓腔样结构，未见明显巨噬细胞及淋巴细胞浸润；对照组骨缺损区仅为胶原瘢痕组织和纤维样结构，无骨组织生成。 结论以兔BMSCs和猪SIS构建的组织工程骨膜在同种异体兔体内可以成骨，具有修复大块不规则骨缺损的可行性。
- 张苍宇王栓科任广铁拓振合庾佳佳汪静安丽萍马婧琳赵琳
- 关键词：BMSCS小肠黏膜下层骨缺损修复
- 体外构建人工仿生骨膜
- 2013年
- 背景:小肠黏膜下层既具有良好的生物相容性和降解性,又富含多种生长因子,能明显促进细胞的黏附、增殖及分化,在国外已被广泛应用于骨与软骨、血管、皮肤、膀胱、平滑肌及胰岛等组织的修复,且已表现出良好的组织工程化细胞支架性能。目的:探讨兔骨髓间充质干细胞经体外诱导成成骨细胞与猪小肠黏膜下层复合构建组织工程骨膜的可行性。方法:采用贴壁筛选法分离2周龄健康新西兰大白兔骨髓间充质干细胞,并进行体外扩增培养、诱导分化及鉴定。将经成骨诱导分化的骨髓间充质干细胞与猪小肠黏膜下层复合构建组织工程骨膜,观察细胞在生物材料上的附着、生长、增殖情况。结果与结论:接种5 d后,细胞散在附着于小肠黏膜下层材料上,细胞形态呈圆形,细胞之间无连接;10 d后细胞之间形成桥粒连接,成骨细胞伸出突起,与小肠黏膜下层贴附;15 d后细胞增殖,分泌基质,在小肠黏膜下层表面形成多层细胞组成的复层膜样结构。表明将骨髓间充质干细胞诱导成成骨细胞后与猪小肠黏膜下层复合可构建组织工程骨膜,有可能成为理想的组织工程支架材料。
- 孙瑞陈晓飞赵琳赵建宏庾佳佳任广铁拓振合
- 关键词：成骨细胞干细胞
- 组织工程骨膜修复兔大段骨缺损的可行性实验研究被引量：1
- 2014年
- 目的探索组织工程骨膜体内成骨修复兔大段骨缺损的可行性。方法培养新西兰大白兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),以成骨诱导剂诱导成骨分化后,与猪小肠粘膜下层(SIS)复合构建组织工程骨膜。扫描电镜(SEM)观察细胞与材料复合情况。选4月龄新西兰大白兔24只,制备单侧桡骨干4 cm缺损模型。随机选12只植入组织工程骨膜,作为实验组;另12只骨缺损旷置,作为对照组。术后6周后摄x线片观察,切取整段桡骨作为标本行HE及Masson染色观察。结果BMscs诱导14 d后可成骨分化。SEM显示构建的组织工程骨膜上黏附大量种子细胞。x线片观察:实验组骨缺损处有长柱状新生骨形成,并与截骨端骨性融合,密度与正常骨相近;对照组骨缺损处无成骨征象,密度同周围软组织影。组织学观察:实验组骨缺损处有新骨形成,新生骨组织中可见丰富的血管腔及不规则髓腔样结构;对照组骨缺损处仅为纤维结缔组织,无骨组织形成。结论以SIS和BMSCs构建的组织工程骨膜有修复兔大段骨缺损的可行性。组织工程骨膜有进一步深入研究、开发的价值和前景。
- 拓振合陈晓飞赵琳鲁永婷任广铁张苍宇庾佳佳孙瑞
- 关键词：骨髓间充质干细胞小肠黏膜下层大段骨缺损
- 组织工程骨膜及脱蛋白骨修复兔桡骨大段骨缺损的早期观察被引量：3
- 2014年
- [目的]比较组织工程骨膜及脱蛋白骨对兔桡骨大段骨缺损的早期修复效果,研究组织工程骨膜移植修复大段骨缺损的可行性。[方法]分离兔骨髓间充质干细胞体外诱导增殖,制成细胞悬液接种于猪小肠黏膜下层表面,构建组织工程骨膜。3个月龄新西兰大白兔24只,随机分为3组各8只,手术制备单侧桡骨干30 mm骨膜-骨缺损模型,A组缺损区植入组织工程骨膜骨修复,B、C组则分别以猪小肠黏膜下层和脱蛋白骨作为对比。术后4周,行X线检查并杀取标本予以组织学染色及评分。[结果]经放射学和组织学观察,在A组中缺损区可见大量新骨形成并桥连两缺损端;而在B组和C组中无明显新骨产生。[结论]使用组织工程骨膜修复同种异体兔桡骨大段骨缺损是可行的,且明显优于脱蛋白骨。
- 任广铁周海宇张苍宇拓振合庾佳佳孙瑞赵琳
- 关键词：骨髓间充质干细胞大段骨缺损
