辽宁省高校创新团队支持计划(2009T007)
- 作品数：13 被引量：35H指数：3
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程医药卫生农业科学更多>>
- 穿山龙薯蓣皂苷糖苷酶基因的亚克隆及表达被引量：1
- 2011年
- [目的]克隆并表达穿山龙薯蓣皂苷糖苷酶基因。[方法]将穿山龙薯蓣皂苷糖苷酶基因亚克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K,再将构建后的表达载体电转化到毕赤酵母GS115中,并诱导表达该基因。[结果]重组酵母菌在0.5%甲醇中培养144 h后,所提取的酶蛋白具有穿山龙薯蓣皂苷糖苷酶的活性,经SDS-PAGE分析,确定其相对分子质量为58 kD。[结论]穿山龙薯蓣皂苷糖苷酶基因得到了表达。
- 王庆宇金凤燮鱼红闪
- 关键词：巴斯德毕赤酵母基因表达
- 人参皂苷Rg_3与Rg_5的分离及Rg_3异构体的拆分被引量：11
- 2011年
- 主要进行了从红参稀有皂苷20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rg5和Rk1混合物中分离单体皂苷的研究。根据混合物在甲醇中各组分的溶解度不同,先分离出20(R)-Rg3,然后采用硅胶柱层析法分离20(S)-Rg3、Rg5和Rk1。从30 g红参稀有皂苷混合物中得到7.40 g纯度为64.0%的20(R)-Rg3粗品;10.9 g纯度为75.3%的20(S)-Rg3粗品;6.05 g的Rg5与Rk1的混合物。采用重结晶法分别对已分离出的20(S)-Rg3、20(R)-Rg3粗品各3 g进行精制,得到1.98 g纯度为94.6%的20(R)-Rg3和0.850 g纯度为95.1%的20(S)-Rg3。
- 田桐宋建国赵慕鱼红闪金凤燮
- 关键词：人参皂苷硅胶柱层析
- 两种人参皂苷糖苷酶的酶性质比较
- 2010年
- 利用DEAE—Cellulose DE52离子交换柱层析法及电泳法对由菌株Absidia sp．G8r在发酵培养中产生的人参皂苷糖苷酶（Glc8）和Absidia sp．G4r在发酵培养中产生的人参皂苷糖苷酶（Glc4）进行了分离纯化，并采用TLC法和分光光度计法对其酶反应条件和酶反应特性进行了比较。结果显示，两种酶的分子质量均在71～72ku，最适酶反应pH是5．0，最适酶反应温度30℃，金属离子K^＋、Na^＋、Mg^2＋、Zn^2＋、Ca^2＋对酶反应的影响不大，Cu^2＋对人参皂苷糖苷酶有很明显的抑制作用。两种酶均具有专一性水解母环侧链末端的α—Gal、β-Glc键的特异性。实验结果表明，两种菌种产的两种人参皂苷糖苷酶是同一种人参皂苷糖苷酶。
- 陈娇娇孙亚娟金凤燮鱼红闪
- 关键词：人参皂苷糖苷酶酶反应
- 芦丁的酶法转化及其产物异槲皮苷的分离被引量：4
- 2012年
- 利用微生物Absidiasp.R9g产的芦丁-α-鼠李糖苷酶(RhaR)转化芦丁制备异槲皮苷,采用硅胶柱层析法对酶解产物进行分离纯化。结果表明,24.0g芦丁的酶解产物,经分离可得到较纯的异槲皮苷单体13.1g,其得率为49.4%。通过高效液相色谱检测其纯度达到98.3%。
- 吴迪刘廷强王东明金凤燮鱼红闪
- 关键词：酶转化异槲皮苷
- RACE技术对薯蓣皂苷糖苷酶基因cDNA3′末端的快速扩增被引量：1
- 2010年
- 对微生物Absidia sp.G3d产薯蓣皂苷糖苷酶基因cDNA3′末端的序列进行了调取。根据薯蓣皂苷糖苷酶基因的CDS区已知序列设计特异性引物,应用3′RACE(Rapid-Amplification of cDNA 3′Ends)技术,快速扩增得到cDNA 3′端未知序列片段,将PCR产物切胶回收,直接测序得到长度为258 bp的产物序列,经比对其中编码区长度为122 bp,非编码区长度为136 bp,Poly A部分长度为28 bp。这对其他类中草药高活性皂苷糖基水解酶基因cDNA3′末端的序列的调取提供了参考。
- 骆宁金凤燮鱼红闪
- 关键词：PCR
- 薯蓣皂苷糖苷酶基因的克隆及同源性分析
- 2011年
- [目的]从分子生物学水平上研究Absidia sp.G3d产薯蓣皂苷糖苷酶,对该酶基因CDS区的序列进行调取和分析。[方法]根据薯蓣皂苷糖苷酶的N端序列设计简并引物,以总RNA为模板进行RT-PCR调取cDNA,然后采用3'RACE和5'RACE技术,调取CDS区基因全序列。[结果]测序得到序列长度为1 497 bp。该基因的同源性比较分析表明,薯蓣皂苷糖苷酶基因与α-鼠李糖苷酶没有同源性,与α-淀粉酶的基因序列具有很高的同源性,达到93%以上。[结论]蛋白质结构存在差异,酶反应特性不同。
- 吴宁金凤燮鱼红闪
- 关键词：RT-PCR
- 人参皂苷葡萄糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达及包涵体的变复性被引量：3
- 2012年
- 将人参皂苷葡萄糖苷酶的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中。对该基因进行诱导表达,并对包涵体进行变性和复性。结果显示,经终浓度为0.5mmol/L IPTG在30℃下诱导表达4h,进行SDS-PAGE分析,目的蛋白主要以包涵体形式存在并确定其分子质量约为75ku,与理论值基本相符,表明该基因得到了表达。包涵体经过变性和稀释复性后,经TLC活性检测,能够水解底物Rb1,表明具有人参皂苷葡萄糖苷酶的活性。
- 马明飞李树金金凤燮鱼红闪
- 关键词：大肠杆菌
- 绞股蓝皂苷糖苷酶的分离纯化及酶性质的研究被引量：1
- 2012年
- 为得到纯的绞股蓝皂苷糖苷酶,对Absidiasp.GYP4r菌所产的酶进行了分离提纯,并对其酶反应条件进行优化。该酶经75%饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-cellulose DE52阴离子交换柱分离、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳提纯,得到纯酶,分子质量约为68ku。酶学性质研究表明,酶反应的最适温度为40℃,在20～60℃稳定,最适pH为5.0,在pH 2.2～8.0稳定。Cu2+对该酶的活性有一定的抑制作用,Na+、K+、Mg2+、Zn2+、Fe3+、Ca2+对酶的活性没有影响。该酶的米氏常数为14.20mmol/L,最大反应速率为0.46mmol/(L.h)。
- 毛泽仁张景金凤燮鱼红闪
- 关键词：绞股蓝皂苷酶反应
- G8r菌产人参皂苷糖苷酶的酶性质及酶水解作用被引量：6
- 2011年
- 对由Absidiasp.G8r菌产的人参皂苷糖苷酶(Glc8)进行了分离纯化,并对其酶性质和酶水解作用进行了研究。结果表明,该酶的分子质量约为72 ku,酶反应的最适温度和pH分别为30℃和5.0,在20～60℃、pH3.0～7.0条件下稳定性较好。该酶水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷C-K,水解过程是分步进行的,酶先水解Rb1生成Rd;大约8 h,酶水解Rd生成F2;大约18 h,酶水解F2生成C-K。并对此过程的酶反应动力学进行研究,米氏常数分别为5.488、5.176、5.495 mmol/L,最大反应速率分别1.524、0.904、0.447 mmol/(L.h)。
- 陈娇娇孙键金凤燮鱼红闪
- 关键词：人参皂苷人参皂苷糖苷酶酶性质水解作用
- 薯蓣皂苷元制备方法的研究进展被引量：3
- 2011年
- 综述了薯蓣皂苷元的不同制备方法,其中借助超声、微波或酶解等辅助手段的改良方法均没有彻底脱离酸解这一过程,对环境造成一定的污染;而微生物发酵制备薯蓣皂苷元的方法,具有反应条件温和、副产物少、无污染等特点,为薯蓣皂苷元的生产提供了新思路。
- 王庆宇金凤燮鱼红闪
- 关键词：薯蓣皂苷元甾体皂苷
