南京医科大学科技发展基金(2010NJMUZ32)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- CD-1遗传背景小鼠EAE模型:遗传背景对临床表现的影响
- 2013年
- 目的:制作不同基因背景小鼠自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型,比较不同遗传背景小鼠发病、神经功能评分和病理变化的差异。方法:用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗原(MOG35-55)免疫C57BL/6和CD-1基因背景小鼠,用完全弗氏佐剂作为抗原载体,并在不同时间点用精制百日咳毒素增强免疫效果,建立自身免疫性脑脊髓炎模型;记录小鼠发病时间与表现,每天进行神经功能评分,并取其脑和脊髓组织进行病理学检查和以CD4、IL-17为靶标的免疫组化染色。结果:C57BL/6组小鼠发病高峰期出现于初次免疫后17～25 d,表现典型的拖尾、单侧或双侧后肢瘫痪等改变,神经功能评分在3分左右;CD-1组小鼠发病高峰期较C57BL/6组推迟,出现于免疫后35～40 d,可见相似的拖尾及偏瘫表现,神经功能评分在2.8分左右。病理检查可见C57BL/6模型小鼠脑、脊髓出现炎症性细胞浸润,而CD-1小鼠的炎性改变相对较轻、且主要出现于脊髓;罗克沙尔固蓝染色法鉴定显示,模型小鼠脑脊髓组织出现脱髓鞘病变,以C57BL/6小鼠更为严重。免疫组织化学法显示2种模型小鼠发病高峰期均存在不同程度的CD4+及IL-17+炎性细胞的浸润。结论:不同的遗传背景对EAE模型发病、临床表现和病理改变有明显影响;CD-1小鼠亦可运用于制作慢性迁延性EAE模型,更符合人类多发性硬化的特点。
- 王松顾冰洁张璐李冠宇杨晓帆王慧娟胡刚季晓辉
- 关键词：实验性自身免疫性脑脊髓炎C57BL
- pRetro-On/LTβR在Jurkat细胞中表达和诱导细胞凋亡的研究
- 2011年
- 目的:构建pRetro-On/LTβR载体,获得可表达淋巴毒素β受体((lymphotoxin beta receptor,LTβR)的Jurkat细胞,探讨LTβR在T细胞凋亡中的作用。方法:应用PCR技术扩增LTβR cDNA片段,将PCR产物纯化后定向连接入pRetro-On载体;重组质粒转入大肠杆菌,LB-Amp培养基筛选阳性克隆,经质粒抽提、纯化、NotⅠ和BamHⅠ双酶切、测序,验证pRetro-On/LTβR载体的正确构建;通过脂质体转染T细胞传代系Jurkat细胞;强力霉素(doxycycline,DOX)诱导后,Western blot鉴定转染细胞中LTβR蛋白的表达,流式细胞术检测细胞表面LTβR表达;以配体LIGHT刺激表达LTβR的Jurkat细胞后以annexin-V-PI双染色流式细胞法检测细胞的凋亡。结果:双酶切及测序结果证实LTβR cDNA正确插入pRetro-On质粒;Western blot和流式细胞术结果证实了LTβR在Jurkat细胞内经DOX诱导得到了表达;表达LTβR的Jurkat细胞经LIGHT刺激后凋亡增加。结论:成功构建pRetro-On/LTβR质粒,pRetro-On/LTβR在Jurkat细胞中可以表达;表达LTβR的Jurkat细胞可以通过LIGHT-LTβR途径导致细胞凋亡。
- 杨静印澄王慧娟徐安琪季晓辉
- 关键词：JURKAT细胞LIGHT凋亡
