国家自然科学基金(30330640)
- 作品数：17 被引量：48H指数：4
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- 缺氧诱导因子1α及氧自由基在肾缺血再灌注损伤中的表达被引量：19
- 2006年
- 氧自由基参与肾缺血引起的急性肾衰的病理过程。研究发现，缺氧诱导因子1α（HIF-1α）可以增强缺血心肌对缺血缺氧的耐受性。HIF-1α是否参与肾脏缺血再灌注损伤过程及其与氧自由基联系尚未见相关报道。我们通过建立大鼠肾缺血再灌注模型，为临床防治肾缺血再灌注损伤提供依据。
- 王丽梅长林
- 关键词：肾缺血再灌注损伤缺氧诱导因子1Α氧自由基急性肾衰缺血缺氧缺血心肌
- 多囊蛋白1氨基段融合蛋白对肾小球系膜细胞细胞外基质及其降解基因表达的影响被引量：1
- 2007年
- 目的研究多囊蛋白-1氨基段（PC-INF）融合蛋白对大鼠肾小球系膜细胞（RMC）Ⅳ型胶原及其降解调控基因表达的影响。方法用实时荧光定量RT-PCR法检测PC-1NF融合蛋白对RMCIV型胶原和细胞外基质（ECM）降解调控基因基质金属蛋白酶、金属蛋白酶1组织抑制剂（MMP-2、TIMP-1）表达的作用。ELISA方法检测培养的细胞上清液中Ⅳ型胶原含量的变化。免疫细胞化学方法观察融合蛋白对细胞核因子c-jun和c-fos表达的影响。Western印迹检测融合蛋白对蛋白激酶C（PKC）-α信号转导通路的影响。结果4mg／LPC-1NF融合蛋白作用48h后，RMCⅣ型胶原mRNA从（103±16）降至（82±11）拷贝，106GAPDH，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），培养上清液中的IV型胶原含量也明显降低；MMP2mRNA从（1150±90）升至（2770±）拷贝，106GAPDH，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01），而TIMP-1mRNA从（5530±480）降至（3040±370）拷贝，106GAPDH，与对照组差异有统计学意义（P〈0．01）。DAB染色显示，融合蛋白作用后，RMC的c-jun和c-fos表达受到明显抑制。RMC经不同浓度PC-1NF融合蛋白作用48h后，随着融合蛋白浓度升高。PKC-α的表达逐渐减弱。结论PC-1NF融合蛋白可通过上调促进ECM降解的MMP-2和抑制ECM降解的TIMP-1之间的比值而促进Ⅳ型胶原降解；还可能通过PKC-α信号转导通路，抑制c-ju．和c-fos表达，从而抑制RMC的增殖和ECM的合成。
- 关天俊梅长林王文靖付莉莉赵海丹蔡厚安
- 关键词：常染色体显性多囊肾病细胞外基质系膜细胞
- 塞来昔布延缓Han：SPRD大鼠肾衰竭进展的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的通过观察塞来昔布（CXB）对常染色体显性多囊肾病（ADPKD）动物模型Han：SPRD大鼠的作用，从而研究CXB延缓肾衰竭进展的机制。方法选取3周龄杂合（cy／＋）Han：SPRD大鼠共57只，随机分成3组（每组19只）进行实验。按照CXB在饲料中的含量分为对照组（0mg·kg^-1·d^-1）、小剂量组（3mg·kg^-1·d^-1）和大剂量组（10mg·kg^-1·d^-1）。在大鼠4、6、8、10、12和16周龄时测定血清BUN、Scr。ELISA法检测16周龄大鼠血浆6-酮前列腺素F1α（6-keto—PGF-1α）和血栓烷B2（TXB2）的含量。实时荧光定量PCR法检测大鼠肾组织肿瘤坏死因子α（TNF—α）的mRNA水平。免疫荧光共聚焦显微镜检测TNF—α和环氧化酶2（COX-2）的蛋白表达。Western印迹检测16周龄大鼠TNF—α的蛋白表达量。结果对照组BUN、Scr持续升高，分别于6、8周龄时即大于正常范围；至16周龄时，BUN为（26．56±9．19）mmol／L，Scr为（95．08±67．54）μmol／L；CXB小剂量组和大剂量组均能减缓BUN、Scr上升速度，减小其上升幅度。16周龄大鼠CXB小剂量组血浆中6-keto—PGF-α和TXB2[（1831．68±233．31）ng／L和（156．62±9．29）ng／L1和大剂量组两者的含量[（1148．57±105.80）ng／L和（157．87±10．16）ng／L]均显著低于对照组[（2792．26±830．48）ng／L和（248．88±93．72）ng／L]（均P〈0．05）。实时荧光定量PCR结果示，16周龄大鼠肾组织小剂量组和大剂量组TNF—α mRNA水平均显著低于对照组（均P〈0．05）。免疫荧光共聚焦显微镜显示，对照组TNF-α和COX-2在小管间质区高表达，小剂量组和大剂量组荧光强度显著减弱。与对照组比较，CXB小剂量组和大剂量组大鼠肾组织蛋白表达量显著减少，差异有统计学意义（均P〈0．05）。结论CXB可能通过抑制COX-2的活性，阻止膜磷脂释放花生四烯酸代谢产物6-keto—PGF-1α和TXB2，减少炎性因子TNF-α的含量，正�
- 许涛王素霞叶朝阳梅长林
- 关键词：多囊肾常染色体显性6-酮前列腺素F1Α血栓烷B2塞来昔布
- 塞来昔布通过抑制COX-2活性抑制Han：SPRD大鼠肾囊肿生长被引量：2
- 2009年
- 目的:观察塞来昔布(celecoxib,CXB)对常染色体显性遗传性多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD)模型Han:SPRD大鼠肾囊肿生长的作用,探讨其可能的作用机制。方法:3周龄杂合(cy/+)Han:SPRD大鼠随机分成3组(n=19):小剂量(3mg·kg-1.d-1)、大剂量(10mg·kg-1.d-1)CXB作用组及空白对照组。大鼠饲养至16周龄,称取体质量(TBW)及双肾质量(2K),计算2K/TBW;取肾组织行H-E染色及特殊染色,观察肾间质炎细胞浸润程度,测定囊肿指数、纤维化指数;采用免疫荧光共聚焦扫描法检测肾组织环氧化酶(COX)-2、增殖细胞核抗原(PCNA)共染的荧光斑表达丰度,采用Western印迹法检测肾组织COX-2、PCNA蛋白表达量。结果:小剂量CXB作用组大鼠2K/TBW低于空白对照组,差异有统计学意义[(1.10±0.009)%vs(1.33±0.02)%,P<0.05]。与空白对照组相比,小剂量、大剂量CXB作用组大鼠肾间质炎细胞浸润程度评分减轻[(2.6±0.26)、(2.8±0.31)vs(3.7±0.33),P<0.05],肾囊肿指数[(42.9±6.56)、(47.1±7.28)vs(64.8±6.71)]、纤维化指数[(11.2±2.63)、(10.1±3.30)vs(16.3±4.16)]明显降低(P<0.05)。小剂量CXB作用组大鼠肾组织COX-2、PCNA共染的荧光斑强度较空白对照组明显减弱,差异具有统计学意义(P<0.05);与空白对照组相比,小剂量、大剂量CXB作用组大鼠肾组织COX-2[(0.326±0.011)、(0.409±0.008)vs(0.814±0.012),P<0.05]、PCNA表达量明显降低[(0.763±0.051)、(0.925±0.042)vs(0.988±0.031),P<0.05]。结论:3、10mg·kg-1.d-1塞来昔布可能通过抑制COX-2活性,减轻炎细胞浸润而发挥抑制Han:SPRD大鼠肾囊肿生长的作用。
- 许涛王素霞叶朝阳梅长林
- 关键词：塞来昔布环氧化酶2常染色体显性多囊肾囊肿
- 富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白对囊肿衬里上皮细胞细胞周期及其调控基因表达的影响被引量：3
- 2005年
- 目的研究富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白(SPARC)对人常染色体显性多囊肾病(ADPKD)囊肿衬里上皮细胞(CLECs)细胞周期及其调控基因表达的影响,初步探讨SPARC对CLECs的作用。方法体外条件下用不同浓度SPARC处理CLECs,5鄄鄄2脱溴氧尿苷酶联免疫吸附测定法(BrdUELISA)测定CLECs增殖;流式细胞术检测细胞周期;实时荧光定量RT鄄PCR方法检测CLECs细胞周期调控基因ClnD1、P21Waf1表达水平的变化。结果μg水平的SPARC能有效抑制ADPKDCLECs增殖(P<0.01),使细胞周期停滞于G0/G1期。10μg/mlSPARC刺激后,ClnD1mRNA水平(3.56±0.54)×104拷贝/百万GAPDH较对照组(7.50±0.99)×104显著减弱,P21WmRNAaf1水平(7.72±0.85)×103较对照组(4.25±1.38)×103显著增强。结论SPARC能够有效抑制CLECs细胞周期的进展。其机制可能通过抑制ClnD1、促进P21Waf1的表达,抑制细胞通过G1鄄S期限制点,从而对其增殖产生显著的抑制作用。
- 王文靖梅长林孙田美汤兵李占园徐成钢
- 关键词：常染色体显性多囊肾细胞周期半胱氨酸SPARC
- 表皮生长因子及其受体在多囊肾病大鼠体液及肾组织中的表达及意义被引量：2
- 2009年
- 目的:观察常染色体显性多囊肾病大鼠体液及肾脏组织中表皮生长因子(EGF)及其受体(EGFR)的表达,探讨二者在多囊肾病发病过程中的作用。方法:采用ELISA方法检测多囊肾病Han:SPRD大鼠血液、尿液中EGF含量,蛋白质印迹法、原位杂交及免疫组织化学方法观察EGF/EGFR在大鼠肾组织的表达。结果:大鼠尿液中EGF含量远高于血液,3周龄大鼠体液EGF含量高于3个月龄,杂合患病大鼠尿液中EGF浓度(pg/ml)显著低于正常大鼠(263.45±48.53vs321.09±74.57,P<0.05)。患病大鼠肾组织EGF表达位置不变,但表达量显著低于正常;EGFR异位表达在囊肿细胞基底膜面和腔膜面,且表达强于正常大鼠;EGFR与磷酸化EGFR表达量从高至低依次为cy/cy大鼠、cy/+大鼠和+/+大鼠。结论:多囊肾病大鼠发病过程中存在EGF/EGFR信号转导通路的异常激活。
- 李林华振浩戴兵汤兵梅长林
- 关键词：常染色体显性多囊肾病表皮生长因子体液
- ZNF262在常染色体显性多囊肾病患者肾组织中的表达及意义
- 2006年
- 目的:检测锌指蛋白262(ZNF262)在正常肾组织及不同发病阶段多囊肾组织中的表达,并以增殖细胞核抗原(PCNA)为对照,初步探讨ZNF262在常染色体显性多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD)中的作用。方法:根据肾小球滤过率(GFR)大小对ADPKD(n=8)进行分期,观察其影像学、常规病理检查结果,采用半定量RT-PCR方法检测人正常肾组织(n=8)、早期多囊肾组织(n=4)、晚期多囊肾组织(n=4)中ZNF262和PCNA的表达,并对上述组织中ZNF262和PCNA的表达进行相关性分析。结果:与正常肾组织相比,ZNF262和PCNA在早期、晚期多囊肾组织中的表达均显著增多(P<0.01),且晚期多囊肾组织表达高于早期多囊肾组织(P<0.05)。ZNF262和PCNA在早期、晚期多囊肾及正常肾组织中的表达存在显著的相关性(r1=0.842 6,r2=0.902 1,r3=0.883 5,均P<0.05)。结论:与正常组织相比,ZNF262不仅在ADPKD高表达,并且随着病程进展表达逐步增高,这与PCNA的表达具有显著的相关性。提示ZNF262可以作为检测ADPKD的指标,并有助于临床进展分期的判别。
- 王素霞王丽刘亚伟付莉莉许涛梅长林
- 关键词：增殖细胞核抗原
- 塞来昔布通过阻断丝裂原活化蛋白激酶信号途径抑制多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖被引量：4
- 2006年
- 目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布(CXB)能否通过阻断丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导途径抑制多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖。方法:原代培养多囊肾囊肿衬里上皮细胞,以不同浓度CXB(0、2.5×10-6、5×10-6、1×10-5、2×10-5、3×10-5、4×10-5、5×10-5mol/L)处理细胞,采用BrdU法检测细胞增殖状态。ELISA法检测各组血管内皮生长因子(VEGF)的含量。荧光定量PCR技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)、磷酸化MAPK的mRNA含量,Western印迹法检测PCNA、MAPK和磷酸化MAPK的表达。结果:CXB对囊肿衬里上皮细胞的增殖具有明显抑制作用,呈时间和剂量依赖性,其中2×10-5mol/L CXB作用24 h的抑制作用最强,抑制率为(63.9±1.2)%;CXB可减少囊肿衬里上皮细胞VEGF的分泌,而且抑制作用具有时间、浓度依赖性。CXB剂量依赖性减低PCNA和磷酸化MAPK的mRNA和蛋白表达。结论:CXB明显抑制囊肿衬里上皮细胞增殖,抑制细胞产生VEGF;其作用与干扰MAPK磷酸化,部分阻断MAPK信号转导通路有关。
- 许涛曲巍梅长林叶朝阳王素霞付莉莉
- 关键词：塞来昔布丝裂原活化蛋白激酶囊肿衬里上皮细胞
- 缺氧诱导因子在大鼠肾缺血再灌注损伤中的表达和意义被引量：12
- 2007年
- 目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和氧自由基在肾脏缺血再灌注损伤中的表达情况。方法:SD大鼠随机分为假手术组、缺血组、缺血再灌注组、RNAi阴性对照缺血组及HIF-1αRNAi预处理后的缺血组和预处理后缺血再灌注组,利用RT-PCR和westernblot技术检测各组大鼠肾脏中HIF-1α和bcl-2的表达情况。检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量,间接反应氧自由基的生成量。测定各组大鼠肾功能。取各组大鼠肾组织切片并做HE染色。结果:缺血组HIF-1α的表达在5组中最高(P<0.05)。与缺血组对比,缺血再灌注后HIF-1α和bcl-2的表达降低,同时氧自由基的生成增加(P<0.05),肾功能明显降低,但经HIF-1αRNAi预处理后上述指标与假手术组相比改变甚微,肾功能得到明显改善。HE染色可见缺血及再灌注组排列紊乱,胞浆萎缩,纹状缘消失,细胞间质增宽,经HIF-1αsiRNA预处理后,接近假手术组水平。结论:HIF-1α的过度表达可能导致氧自由基生成增加,肾功能受损,从而加重缺血再灌注肾脏的损伤,而HIF-1αRNAi可以减轻并改善这一状况,其机制可能与上调凋亡抑制基因有关。
- 王丽梅长林
- 塞来昔布对Han：SPRD大鼠肾细胞外基质重塑的影响
- 2010年
- 目的研究塞来昔布（CXB）对Han：SPRD大鼠肾细胞外基质（ECM）重塑的影响，探讨其抑制多囊肾肾间质纤维化的作用机制。方法选取杂合（cy／＋）交配后第4代雄性、3周龄、体质量（68．54-16．6）g的Han：SPRD大鼠共57只，随机分成对照组（CXB：0mg·kg^-1·d^-1）、CXB小剂量组（CBX：3mg·kg^-1·d^-1）、CXB大剂量组（CBX：10mg·kg^-1·d^-1），每组19只。另选19只SD大鼠作为正常对照。饲料中加入CXB喂食13周后，处死动物。倒置显微镜下分析肾组织纤维化指数；实时荧光定量PCR检测肾组织胶原Ⅳ（COLⅣ）、基质金属蛋白酶（MMP）2、金属蛋白酶2组织抑制剂（TIMP）和转化生长因子（TGF）B1mRNA的表达；免疫荧光共聚焦扫描法检测COLIV、MMP-2、TIMP-2、TGF-β1与PCNA共染的蛋白丰度；蛋白免疫印迹法检测TGF-81的表达。结果与对照组相比，小剂量组和大剂量组均能显著减少肾囊肿指数（42．90±6．56和47．10±7．28比64．80±62．71，均P〈0．05）、纤维化指数（11．20±2．63和10．10±3．30比16．30＋4．16，均P〈0．05）和间质炎性细胞的浸润（2．60±0．26和2．80±0．31比3．70±0．33，均P〈0．05）。小剂量组和大剂量组COLⅣ、TIMP-2和TGF．B1mRNA的表达量显著低于对照组（均P〈O．05），而MMP-2mRNA的表达量显著高于对照组（均P〈0．05）。小剂量组和大剂量组COLlV荧光强度较对照组显著减弱，差异有统计学意义（20．30±5．11比61．40±4．51，P〈0．01；27．50±6．73比61．40±4．51，P〈0．05）。小剂量组和大剂量组MMP．2／TIMP-2比值较对照组增高，差异有统计学意义（4．88＋1．52和3．63±1．67比0．35±0．13，均P〈0．05）。小剂量组和大剂量组TGF—β1蛋白表达比对照组均显著减少。结论塞来昔布可能通过下调TGF-β1、增加MMP-2／TIMP-2比值、促进胶原Ⅳ的降解来抑制肾小管间质的纤维化。
- 许涛王素霞叶朝阳梅长林
- 关键词：多囊肾常染色体显性细胞外基质塞来昔布
