国家自然科学基金(81160192) 作品数:13 被引量:36 H指数:4 相关作者: 张万江 章乐 吴芳 吴江东 邬博 更多>> 相关机构: 石河子大学 石河子市人民医院 新疆医科大学第五附属医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 新疆生产建设兵团医药专项基金 高层次人才科研启动基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
不同毒力的结核分枝杆菌感染巨噬细胞TfR与Lf的表达 2013年 为探讨结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株和卡介苗菌株(BCG)分别感染巨噬细胞,检测细胞内转铁蛋白受体和乳铁蛋白表达量并分析其时相性变化及意义。分别采用结核分枝杆菌H37Rv株和BCG菌株感染巨噬细胞RAW264.7细胞株,于感染后1、6、12、18、24h,应用ELISA技术检测巨噬细胞上清液中TfR和Lf的表达量;应用Western blot技术于上述时间点检测巨噬细胞内TfR的表达量。结果显示,ELISA和Western blot技术均证实感染模型组检测的TfR表达量均高于正常对照组,ELISA结果显示上清液中TfR表达量在感染12和18h差异最明显,具有统计学意义(P<0.05)。Western blot显示:于模型建成后1、6、18h、差异有统计学意义(P<0.05)。另外,ELISA证明感染可诱导巨噬细胞分泌较高水平的Lf,于感染后6、12、18、24h均高于正常对照组,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。由此可知,结核分枝杆菌感染导致巨噬细胞内的TfR和Lf表达更高。 李微 董伟杰 刘云霞 庹清章 刘丹霞 张万江关键词:结核分枝杆菌 巨噬细胞 转铁蛋白受体 乳铁蛋白 微量铁元素在结核病发病机制中作用的研究进展 被引量:4 2012年 巨噬细胞的铁代谢与结核分枝杆菌的生长繁殖有密切的关系。结核分枝杆菌感染宿主后,主要在宿主巨噬细胞内生长繁殖,巨噬细胞为其生长提供所需要的铁元素,而未被机体免疫系统清除的结核分枝杆菌必须依靠巨噬细胞提供铁元素才能维持其活性和生存。巨噬细胞内转铁蛋白受体1(TfR1)不仅维持巨噬细胞内铁元素的动态平衡,影响胞内结核分枝杆菌生存,而且诱导巨噬细胞自身凋亡,最终杀伤结核分枝杆菌。近年来,有研究表明铁元素与结核分枝杆菌耐药相关。研究铁元素在结核病的发生、发展机制以及结核病耐药机制中的作用,对进一步明确结核病的发病机制,开创治疗结核病的新方法有重要意义。 李微 张万江关键词:铁代谢 巨噬细胞 结核分枝杆菌 耐药 结核杆菌Pup-蛋白酶体系统与结核杆菌持留性的相关性研究 被引量:1 2015年 目的:本研究通过诱导结核杆菌在低氧环境中进入持留状态,比较分析不同时间点、不同环境下结核杆菌Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的表达水平差异,探讨研究Pup-蛋白酶体系统对结核杆菌持留性的调控作用。方法:本实验以结核杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株(以下简称为H37Rv菌株)为研究对象,在低氧、有氧环境下进行培养,分别提取不同时间点每组样本菌株的总RNA,并进行纯度鉴定。运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的方法,分别检测各组结核杆菌菌株的Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的表达;比较分析不同时间点、不同环境下的各结核杆菌菌株Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的表达水平差异。结果:在不同时间点对低氧环境下菌株Pup、Dop、Paf A和Mpa的表达水平进行检测,Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的相对表达水平:低氧环境下,与0 d比较,Pup基因在4 d、7 d、10 d分别上调1.66、2.43、2.76倍,Dop基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.38、1.91、2.54、3.28倍,Paf A基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.22、1.75、2.37、2.67倍,Mpa基因在4 d、7 d、10 d分别上调1.66、2.21、2.63倍(P<0.05);以有氧环境组做对照,低氧环境下,相同时间点,Pup基因在4 d、7 d、10 d分别上调1.85、2.81、2.93倍,Dop基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.20、1.76、2.01、3.01倍,Paf A基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.22、1.57、2.29、2.29倍,Mpa基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.16、1.58、2.16、2.69倍(P<0.05)。结论:低氧环境下,不同时间点,Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的相对表达量存在差异;以有氧环境组作对照,相同时间点,低氧环境下与有氧环境下Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的相对表达量也存在差异。Pup-蛋白酶体系统对结核杆菌持留性具有一定的调控作用。 朱彬 雷英 吴芳 张辉 张春军 章乐 吴江东 曹旭东 邬博 何丽 张玉清 李瑞山 王钊 张万江关键词:结核杆菌 结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3基因缺失突变菌株对感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率的影响及其时相性变化 被引量:3 2013年 探讨结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3基因缺失突变菌株对感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率的影响及其时相性变化。用激光共聚焦显微镜技术检测及鉴定结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞,流式细胞术检测不同时期感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率,比较结核分枝杆菌Hsp16.3基因缺失突变株与正常株感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率的时相性变化。激光共聚焦显微镜检测结果显示:结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株、结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株Hsp16.3基因缺失突变株(△H37Rv)、卡介苗菌株(BCG)以及卡介苗株Hsp16.3基因缺失突变株(△BCG)均被小鼠肺泡巨噬细胞大量吞噬。流式细胞技术检测结果显示:小鼠感染△H37Rv菌株后,巨噬细胞的凋亡率逐渐上升,至感染7d时达到高峰,随后逐渐降低,1~7d内,各时间段△H37Rv感染组巨噬细胞凋亡率均显著高于H37Rv感染组,9~11d内,△H37Rv感染组巨噬细胞凋亡率反而低于H37Rv菌株组,但13~15d内,△H37Rv感染组巨噬细胞凋亡率又呈现出比H37Rv感染组高的现象,差异均有统计学意义(P<0.05)。△BCG组凋亡率1~7d内呈现明显下降趋势,7d后巨噬细胞凋亡率变化趋于平稳,且1~5d内,△BCG组凋亡率显著高于BCG组(P<0.05),7~15d内,△BCG组与BCG组巨噬细胞凋亡率无明显差异。结果表明:与结核分枝杆菌H37Rv株野生株相比,结核分枝杆菌H37Rv株Hsp16.3基因缺失突变株在感染的早期和晚期对小鼠肺泡巨噬细胞有更强的致凋亡作用,而这种致凋亡作用与结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3基因的缺失相关,说明在结核分枝杆菌感染的早期和晚期,结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3的表达能够抑制宿主巨噬细胞的凋亡。 赵小杰 黄晓艳 庹清章 董江涛 田玺择 刘云霞 董伟杰 刘丹霞 李微 吴芳 章乐 张万江关键词:结核分枝杆菌 缺失突变 凋亡 结核分枝杆菌PhoPR双组分系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性的相关性研究 被引量:3 2014年 目的:通过比较分析卡介苗株(BCG)、结核分枝杆菌国际标准无毒株(H37Ra)、结核分枝杆菌国际标准强毒株(H37Rv)、新疆地区流行的优势强毒株结核分枝杆菌临床分离株(XJ-MTB)的PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异,探讨研究结核分枝杆菌PhoPR双组分系统与不同毒力结核分枝杆菌的致病性是否具有相关性。方法:首先提取上述四种不同毒力结核分枝杆菌菌株的总RNA,并进行完整性鉴定;再运用SYBR Green I实时荧光定量PCR技术检测各组菌株中PhoP基因和PhoR基因的表达水平;最后比较不同毒力结核分枝杆菌PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异。结果:四种不同毒力菌株PhoP基因的相对表达量,由高到低依次为XJ-MTB(9.05)、H37Rv(1.00)、H37Ra(0.25)、BCG(0.08),且四种菌株中PhoP基因的表达有显著的统计学差异(P<0.05);同时四种不同毒力菌株PhoR基因的相对表达量,由高到低依次为XJ-MTB(5.72)、H37Rv(1.00)、H37Ra(0.18)、BCG(0.07),且四种菌株中PhoR基因的表达有显著的统计学差异(P<0.05)。其中XJ-MTB菌株PhoP基因和PhoR基因的表达水平与BCG、H37Rv、H37Ra相比存在显著的统计学差异(P<0.05);H37Rv菌株PhoP基因和PhoR基因的表达与BCG、H37Ra相比存在显著的统计学差异(P<0.05);而BCG菌株PhoP基因和PhoR基因的表达与H37Ra相比统计学差异不显著(P>0.05)。结论:结核分枝杆菌PhoPR双组分系统中PhoP基因和PhoR基因在不同毒力结核分枝杆菌中的表达存在差异,并且该系统与不同毒力结核分枝杆菌的致病性存在相关性。 邬博 吴芳 章乐 吴江东 张辉 张春军 曹旭东 朱彬 李瑞山 何丽 王钊 张玉清 庄睿 李文娟 梁晨 樊超 张万江关键词:结核分枝杆菌 不同毒力结核分枝杆菌对感染宿主巨噬细胞应激的调控作用研究 被引量:7 2013年 目的探讨不同毒力结核分枝杆菌对感染宿主巨噬细胞应激的调控作用。方法以结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株(简称H37Rv菌株)和卡介苗菌株(简称BCG)分别感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,在感染1、6、12、24h后,分别采用化学比色法检测感染巨噬细胞超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮合酶(NOS)的活性变化,并测定感染巨噬细胞的丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量变化。结果 RAW264.7感染BCG后细胞内SOD、NOS活性和NO含量逐渐升高,感染24h分别为(32.82±0.54)U/ml、(12.16±0.29)U/ml和(116.42±3.23)μmol/L,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);MDA含量逐渐下降,感染24h时为(0.59±0.08)nmol/ml,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);RAW264.7感染H37Rv菌株后细胞内SOD、NOS和NO含量逐渐下降,感染24h分别为(15.90±0.20)U/ml、(2.32±0.11U/ml)和(13.74±1.01μmol/L),与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05):MDA含量逐渐增加,感染24h时为(5.21±0.39)nmol/ml,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论低毒力和高毒力结核分枝杆菌分别对感染宿主巨噬细胞的应激发挥诱导和抑制等不同作用。 刘丹霞 董伟杰 庹清章 刘云霞 李微 章乐 吴芳 张万江关键词:结核分枝杆菌 巨噬细胞 应激 结核杆菌PhoPR双组分系统与广泛流行的耐药结核杆菌耐药性的相关性研究 2013年 目的:通过比较分析不同耐药的结核杆菌临床分离株PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异,探讨研究结核杆菌PhoPR双组分系统与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌耐药性是否具有相关性。方法以新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株为研究对象,分别提取结核分枝杆菌临床分离药物敏感菌株、单纯耐异烟肼的结核杆菌临床分离株( INH-MTB)、单纯耐利福平的结核杆菌临床分离株( RFP-MTB)、单纯耐链霉素的结核杆菌临床分离株( SM-MTB)、单纯耐乙胺丁醇的结核杆菌临床分离株( EB-MTB)、耐多药结核杆菌临床分离株( MDR)总RNA,并进行纯度鉴定,运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的方法,分别检测各组结核杆菌菌株的PhoP基因和PhoR基因的表达,比较分析不同耐药的结核杆菌临床分离株PhoP基因和PhoR基因的表达水平的差异。结果与结核分枝杆菌临床分离药物敏感菌株相比,PhoP基因在RFP-MTB中的表达上调1.48倍,在MDR中的表达上调2.74倍,差异有统计学意义(P<0.05);与MDR相比,PhoP基因在INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB和EB-MTB中的表达下调0.70、0.50、0.25和0.21倍,差异有统计学意义(P<0.05)。与结核分枝杆菌临床分离药物敏感菌株相比,PhoR基因在INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB和EB-MTB中的表达分别上调6.33、4.56、2.34和1.85倍,在MDR中的表达上调9.06倍,差异有统计学意义( P<0.05);与 MDR相比,PhoR基因在INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB 和EB-MTB 中的表达下调0.36、0.54、0.35和0.19倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在结核分枝杆菌临床分离药物敏感菌株、INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB、EB-MTB和MDR中,结核杆菌PhoP和PhoR基因的表达有差异,结核杆菌PhoPR双组分系统与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌的耐药性具有相关性。 李文娟 宝音 王霞 张峰 梁晨 庄睿 樊超 庹清章 张春军 张辉 吴芳 吴江东 章乐 张万江关键词:结核分枝杆菌 耐药性 结核分枝杆菌Pup-蛋白酶体系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性的相关性研究 被引量:6 2014年 目的通过比较分析不同毒力结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达差异,探讨Pup-蛋白酶体系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性的相关性。方法分别提取卡介苗菌株(BCG)、结核分枝杆菌国际标准无毒珠(H37Ra)、结核分枝杆菌国际标准强毒珠(H37Rv)、新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株总RNA,并进行纯度鉴定。运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达,比较分析不同毒力结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达差异。结果 H37Rv菌株和新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株与BCG菌株相比,Pup基因表达分别上调1.67、2.65倍,Dop基因表达分别上调2.42、3.69倍,PafA基因表达分别上调4.09、7.36倍,Mpa基因表达分别上调2.65、3.91倍,差异有统计学意义(P<0.05);BCG、H37Ra、H37Rv菌株与新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株相比,Pup基因表达分别下调62%、59%、37%倍,Dop基因表达分别下调63%、64%、34%倍,PafA基因表达分别下调87%、86%、44%倍,Mpa基因表达分别下调64%、67%、32%倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在BCG、H37Ra、H37Rv、新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达有差异性,且与菌株毒力呈正相关。Pup-蛋白酶体系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性具有相关性。 朱彬 吴芳 章乐 吴江东 张辉 张春军 曹旭东 邬博 何丽 张玉清 李瑞山 王钊 庄睿 李文娟 梁晨 樊超 张万江关键词:结核分枝杆菌 毒力 PhoPR双组分信号转导系统对结核分枝杆菌持留性的调控机制研究 2015年 目的本研究通过诱导结核分枝杆菌在低氧环境中进入持留状态,来比较分析不同时间不同低氧环境下结核分枝杆菌中的PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异,探讨研究PhoPR双组分信号转导系统对结核分枝杆菌持留性的调控机制。方法首先对结核分枝杆菌国际标准无毒株(H37Ra)和结核分枝杆菌国际标准强毒株(H37Rv)在不同低氧环境下进行培养,提取每个样本菌株的总RNA,并进行完整性鉴定;运用SYBR Green I实时荧光定量PCR检测每个样本菌株中PhoP基因和PhoR基因的表达水平;比较分析不同时间不同低氧环境下的结核分枝杆菌菌株PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异。结果在不同时间点对低氧环境的结核分枝杆菌PhoP基因和PhoR基因的表达水平进行检测,结果显示:与第10d相比,培养至第15d时H37Rv菌株和H37Ra菌株中的PhoP基因和PhoR基因的表达水平均显著上调,差异有统计学意义(P<0.05);并且培养至第25d时,H37Rv菌株中的PhoP基因和PhoR基因的表达水平比H37Ra菌株表达均上调2.34倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在不同时间点相同毒力的结核分枝杆菌的PhoPR双组分信号转导系统中PhoP基因和PhoR基因在不同低氧环境下的表达存在差异,而且在相同时间点不同毒力结核分枝杆菌的PhoPR双组分信号转导系统中PhoP基因和PhoR基因在不同低氧环境下的表达也存在差异,表明PhoPR双组分信号转导系统对结核分枝杆菌的持留性具有调控作用。 邬博 雷英 吴芳 章乐 吴江东 曹旭东 朱彬 何丽 李瑞山 张玉清 王钊 王君 柳小玲 张培培 梁粟 张万江关键词:结核分枝杆菌 耐药结核分枝杆菌PhoPR双组分系统基因表达的研究 被引量:3 2014年 目的比较结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)原始耐药菌株与经过含不同浓度培养基培养后的菌株中PhoPR双组分系统基因表达水平的差异,研究MTB PhoPR双组分系统与MTB耐药的相关性。方法分别在原始状态下和用低浓度含药培养基及高浓度含药培养基培养单纯耐异烟肼MTB临床分离株(INH-MTB)、单纯耐利福平的MTB临床分离株(RFP-MTB)、单纯耐链霉素MTB临床分离株(SM-MTB)、单纯耐乙胺丁醇的MTB临床分离株(EB-MTB)、耐多药MTB临床分离株(MDR)养至对数期,提取各组MTB总RNA,并进行纯度鉴定;运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR,检测各组MTB的PhoP基因和PhoR基因的表达,比较不同耐药的MTB临床分离株PhoP基因和PhoR基因表达水平的差异。结果在低浓度抗结核药物条件下培养的INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB和MDR组MTB与原始状态下MTB相比,PhoP基因表达分别上调2.19、2.04、1.72、2.73倍,PhoR基因分别上调1.57、2.57、1.56和2.83倍,差异有统计学意义(P<0.05);在高浓度抗结核药物条件下培养,INH-MTB、RFP-MTB、SMMTB、EB-MTB和MDR组MTB中的PhoP基因表达分别上调1.79、1.44、2.10、1.27和1.97倍,PhoR基因在INHMTB、RFP-MTB、SM-MTB和MDR组MTB分别上调1.05、1.91、1.76和2.13倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PhoP和PhoR基因的差异表达与MTB的耐药性相关,提示PhoPR双组分系统与MTB耐药具有相关性。 李文娟 宝音 王霞 张峰 章乐 吴芳 吴江东 庄睿 邬博 梁晨 樊超 张春军 张辉 张万江关键词:结核分枝杆菌 耐药性