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国家自然科学基金(30371423)

作品数:7 被引量:14H指数:2
相关作者:陈志强叶章群刘冠琳郭辉孔德波更多>>
相关机构:华中科技大学浙江大学医学院附属第一医院中山大学附属第二医院更多>>
发文基金:国家自然科学基金湖北省科技攻关计划更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 7篇中文期刊文章

领域

  • 6篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 3篇草酸
  • 2篇细胞
  • 2篇小鼠
  • 2篇基因
  • 2篇肠道
  • 1篇蛋白
  • 1篇选择性培养基
  • 1篇阴性
  • 1篇阴性杆菌
  • 1篇源性
  • 1篇真核
  • 1篇真核细胞
  • 1篇质粒
  • 1篇中国人
  • 1篇受性
  • 1篇培养基
  • 1篇人肝
  • 1篇人肝细胞
  • 1篇人肝细胞系
  • 1篇细胞系

机构

  • 5篇华中科技大学
  • 2篇浙江大学医学...
  • 1篇南京大学
  • 1篇宁波大学
  • 1篇南京大学医学...
  • 1篇武警总医院
  • 1篇中山大学附属...

作者

  • 5篇叶章群
  • 5篇陈志强
  • 4篇刘冠琳
  • 3篇郭辉
  • 2篇姚林方
  • 2篇余虓
  • 2篇孔德波
  • 1篇程跃
  • 1篇朱旭慧
  • 1篇杨为民
  • 1篇袁鹤胜
  • 1篇蔡丹
  • 1篇严泽军
  • 1篇曾令启
  • 1篇余建华

传媒

  • 2篇中华实验外科...
  • 1篇中华医学杂志
  • 1篇临床泌尿外科...
  • 1篇现代实用医学
  • 1篇现代泌尿外科...
  • 1篇Journa...

年份

  • 1篇2018
  • 1篇2009
  • 2篇2008
  • 2篇2007
  • 1篇2005
7 条 记 录,以下是 1-7
排序方式:
人肠道产甲酸草酸杆菌的分离培养被引量:11
2005年
目的探讨产甲酸草酸杆菌分离培养及鉴定方法.方法应用选择性培养基,在37 ℃厌氧环境下分离培养人肠道产甲酸草酸杆菌.通过观察菌落形态、细菌涂片染色镜检、离子色谱仪及核酸序列分析,对细菌进行鉴定.结果产甲酸草酸杆菌菌落形态为白色点状或梭状,大小约(0.1~0.5) mm×(1.0~3.0) mm;菌落周边出现直径约3.5~4.5 mm的清晰透明圈.该细菌为革兰氏阴性杆菌,大小约(1.0~1.6) μm×(3.0~6.5) μm.液体培养基中草酸浓度随细菌浓度增加而逐渐下降.与文献报道核酸序列比较,该细菌分解草酸的功能基因frc、oxc的核酸同源性分别为95.8%及93.6%.结论产甲酸草酸杆菌可通过选择性培养基、在厌氧环境下从人粪便中分离出来.
陈志强郭辉叶章群朱旭慧余建华曾令启
关键词:细菌分离细菌培养革兰氏阴性杆菌肠道核酸序列分析选择性培养基
小鼠肠干细胞群对外源性草酸耐受性的研究
2008年
目的探索利用体外细胞培养技术构建的小鼠肠干细胞群对外源性草酸的耐受能力。方法利用细胞体外原代培养技术分离并培养小鼠肠干细胞群,将获得的细胞群种植于24孔板中;选取8孔生长状态较好的细胞,分别加入含终浓度为40、35、30、25、20、15、105、mmol/L草酸钠的细胞培养液,置入CO2恒温培养箱内培养72h后观察细胞状态。结果经反复实验可见草酸钠浓度为25 mmol/L的孔中,细胞生长速度减慢,出现少许空泡样改变;而浓度大于或等于30 mmol/L孔中,细胞出现大量空泡样改变,甚至崩解、死亡;草酸钠浓度小于或等于20 mmol/L的孔中细胞没有出现异常,生长状态较好。结论培养基中草酸浓度小于或等于20 mmol/L时,小鼠肠干细胞群能正常生长分化。
刘冠琳叶章群陈志强余虓郭辉蔡丹
关键词:草酸钠空泡
Cloning and Identification of frc Gene from Oxalobacter Frmigenes
2007年
The cloning and identification offrc gene from Oxalobacterformigenes in the intestines of Chinese people were conducted. The genomic DNA of Oxalobacterformigenes was extracted, frc gene fragment was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and linked with pEGFP-CI. The recombinant plasmid was designated pEGFP-frc and was identified by restriction-enzyme digestion and sequencing. Human embryo kidney 293 cells were transfected with pEGFP-frc, then RT-PCR and Western blotting were performed to detect the expression of fro gene. The length of frc gene was found to be 1287 bp, and the homology of nucleotides and amino-acid residue with the sequence in GenBank was 95.88% and 99.07%. Bright green fluorescent light could be observed in 293 cells transfected with the pEGFP-frc, frc mRNA and fusion protein FCoAT-EGFP were detected in the cells. It is concluded thatfrc gene cloned from the Oxalobacterformigenes in the intestines of Chinese people can be expressed in eucaryotic 293 cells and keep its enzyme activity.
孔德波陈志强叶章群杨为民姚林方郭辉刘冠琳曾令启
关键词:FRCUROLITHIASIS
中国人肠道产甲酸草酸杆菌oxc基因的克隆及其在真核细胞中的表达被引量:2
2008年
目的观察中国人肠道产甲酸草酸杆菌(Ox.F)草酰辅酶A脱羧酶基因(oxc)的分离、克隆及其在293细胞中的表达。方法提取中国人肠道Ox.F的基因组DNA,PCR扩增oxc基因片段并克隆人真核表达载体pEGFP—C1,通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定基因片段。将重组质粒脂质体转染至293细胞,利用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测oxc基因在真核细胞中的表达。结果中国人肠道产甲酸草酸杆菌oxc基因全长1707bp,与Gene Bank中的序列比较,碱基序列的同源性为93.61%,氨基酸残基序列的同源性为97.18%。重组质粒转染293细胞后24~48h,可观察到明亮的绿色荧光,从mRNA和蛋白水平上可以检测到oxc基因在真核细胞中的表达。结论中国人肠道产甲酸草酸杆菌中可以分离出oxc基因;中国人肠道产甲酸草酸杆菌oxc基因存在一定的变异;oxc基因可在真核细胞293细胞中表达。
叶章群孔德波陈志强郭辉杨为民姚林方刘冠琳
关键词:基因表达克隆
表达产甲酸草酸杆菌草酸分解基因的人肝细胞系的构建被引量:3
2007年
目的:构建表达产甲酸草酸杆菌(Ox.F)草酸分解基因的人肝细胞系,探索高草酸尿的治疗方法。方法:分离培养人肠道Ox.F并克隆其功能基因oxc和frc,构建同时表达oxc和frc的真核双表达载体质粒pIRES-oxc-frc,将pIRES-oxc-frc转染人正常肝细胞系L-02。用RT-PCR和Western blot技术了解转基因细胞的目的基因表达状况;用离子色谱法测定转基因后细胞培养液中草酸浓度,了解其草酸分解功能。结果:转基因后人肝细胞系L-02在mRNA和蛋白质水平均成功表达oxc和frc基因,其草酸分解功能较转染前明显增强(P<0.01)。结论:Ox.F分解草酸的两个重要功能基因oxc和frc能在体外转入人正常肝细胞(L-02)中,并使后者草酸分解能力明显增强。转草酸分解基因的人肝细胞系的构建,有望用于高草酸尿,尤其是PH的病因治疗,值得进一步研究。
陈志强刘冠琳叶章群
关键词:高草酸尿基因治疗肝细胞
培养基血清质量和浓度的不同对肠干细胞群分离培养的影响被引量:1
2018年
目的通过改变细胞培养基中血清的质量和浓度,探索构建小鼠肠干细胞群更合适的血清及浓度。方法取孕17 d昆明系小白鼠的胚胎鼠肠组织,予肠干细胞的培养,将获得的细胞溶于8组细胞培养液,种于24孔板中。细胞培养液共有8组,采用DMEM培养基和新生牛血清或胎牛血清配制,血清的浓度分别为5%、10%、15%及20%,除此以外还含有胰岛素、谷铵酰胺、表皮生长因子以及双抗(青霉素、链霉素)等成分。最后进行角蛋白抗体及波形蛋白抗体免疫组化染色鉴定细胞来源。结果 24~48 h后,细胞开始贴壁生长。显微镜下可见,除采用10%新生牛血清的组外,其他组细胞均含有大量的间质细胞,上皮细胞所占比例不足10%。而如采用含10%的新生牛血清培养基培养,则贴壁生长的细胞绝大部分为上皮细胞。经传代后,所培养出的肠干细胞群角蛋白18亚型染色阳性。而其他组的细胞,则基本上为间质细胞。结论构建肠干细胞群应选用10%的新生牛血清。
刘冠琳程跃谢国海严泽军袁鹤胜
关键词:表皮生长因子角蛋白
可分解草酸小鼠肠干细胞群的构建被引量:1
2009年
目的通过提取草酸分解菌的分解草酸功能基因frc和oxc,转染小鼠肠干细胞群使之获得草酸分解功能。方法(1)构建能同时表达oxc和frc基因的双表达载体质粒pIRES—oxc—frc。(2)分离培养小鼠肠干细胞群,并了解其生长分化功能。(3)将pIRES-oxc-ffc通过脂质体转染至小鼠肠干细胞群中,经过G418筛选后,了解验证转基因肠干细胞群生长、分化及基因表达状况。(4)用离子色谱法测定转基因后细胞培养液中草酸浓度,鉴定其草酸分解功能。结果oxc和frc基因片段与GenBank提供的序列比较有极高的同源性。带有oxc和frc基因片段的重组质粒能顺利转染小鼠肠干细胞群,并能在后者中表达。转基因小鼠肠干细胞群培养液中草酸浓度[(2.48±0.03)g/L]低于普通小鼠肠干细胞群和空白对照组[(2.69±0.01)、(2.69±0.01)g/L,P〈0.01]。结论产甲酸草酸杆菌分解草酸的重要功能基因oxc和frc基因能在体外转入小鼠肠干细胞群,并使后者具有草酸分解功能;原核细胞的多个基因能在一定条件下通过基因工程技术转入真核细胞。
叶章群刘冠琳陈志强孔德波姚林方余虓
关键词:草酸质粒
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