中国博士后科学基金(2004035045)
- 作品数：15 被引量：98H指数：4
- 相关作者：成军刘妍张黎颖郭江宋方洲更多>>
- 相关机构：北京地坛医院解放军第302医院重庆医科大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生动力工程及工程热物理生物学交通运输工程更多>>
- 乙型肝炎病毒前-S2蛋白下调诱导型一氧化氮合酶基因启动子的转录活性被引量：3
- 2005年
- 目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前-S2(pre-S2)蛋白对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因启动子转录的调节作用。方法利用生物信息学技术确定iNOS基因的启动子区域(iNOSp)和3个缺失突变体的基因序列,聚合酶链反应(PCR)分别扩增iNOSp和3个缺失突变体的基因序列,分别克隆至报告基因表达载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-iNOSp载体;以构建的这4种报告基因表达载体,分别转染人肝母细胞瘤细胞系HepG2,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并与真核表达载体pcDNA3.1(-)-HBV pre-S2共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性。结果成功获得iNOS基因启动子和3个缺失突变体的正确克隆,p1-iNOSp、p3-iNOSp启动子和pcDNA3.1 (-)-HBV pre-S2瞬时共转染HepG2细胞时,iNOS启动子的转录活性明显下降,HBV pre-S2蛋白对p1- iNOSp、p3-iNOSp表达活性的抑制率分别是54.7%和79.5%,p2-iNOSp、p4-iNOSp与pcDNA3.1(-)-HBV pre-S2共转染HepG2细胞后,HBV pre-S2蛋白对p2-iNOSp、p4-iNOSp表达活性没有明显的调节作用。重复试验得到了相似的结果。结论HBV pre-S2蛋白在细胞内的表达对iNOS启动子的转录活性具有明显的下调作用。
- 郭风劲成军纪冬刘妍张黎颖宋方洲
- 关键词：启动子PRES2蛋白基因启动子转录活性下调作用
- 人肝再生增强因子下调钙结合蛋白S100A11基因表达的研究被引量：4
- 2006年
- 目的探讨人肝再生增强因子(ALR)对钙结合蛋白S100A11启动子(S100A11p)转录的调节作用。方法利用生物信息学技术确定S100A11p区域,聚合酶链反应(PCR)扩增S100A11p,克隆至真核报告载体pCAT3中,构建pCAT3S100A11p报告载体;以该质粒转染HepG2细胞系,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测报告基因编码产物氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性,并以人ALR的真核表达载体pcDNA3.1(-)ALR共转染的HepG2细胞系,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测CAT的表达活性。结果pCAT3S100A11p在HepG2细胞中具有CAT的表达活性;以pcDNA3.1(-)ALR和pCAT3S100A11p共转染HepG2细胞,CAT表达活性是单独转染细胞组pCAT3S100A11p的0.42倍。结论所克隆的S100A11启动子有启动子的转录活性,ALR的转基冈表达具有对S100A11基因的下调作用。
- 邵凤娟成军马英骥洪源郭江王巧侠杨倩纪冬王琳
- 关键词：基因表达钙结合蛋白
- 轴流式水轮机全流道内非定常空化湍流的数值模拟被引量：40
- 2006年
- 为了研究轴流式水轮机内部的空化流动,将Fluent 6．1商用软件中的一种完整空化模型和一种混合流体两相流模型相结合,对某水电站原型轴流式水轮机全流道内的非定常空化湍流进行了数值模拟。根据模拟结果,预测了水轮机在特定工况下运行时流道内空化发生的部位和程度,并对水轮机的能量性能进行了预估。数值预测的空化流动现象与模型水轮机空化试验中所观察到的现象基本一致,说明数值模拟结果可为轴流式水轮机的运行性能预测提供参考。
- 陈庆光吴玉林刘树红吴墒锋张永建王涛
- 关键词：轴流式水轮机全流道数值模拟
- 轴流式水轮机内部空化流动的数值预测被引量：27
- 2006年
- 将一种完整空化模型和一种混合流体两相流模型相结合,应用于轴流式水轮机全流道内定常空化流动的数值模拟。根据模拟结果,分别预测了水轮机在正常和较低尾水位情况下运行时,流道内空化发生的部位和程度,重点考察了尾水位的降低对水轮机空化性能的影响,为水轮机在特定运行工况下的空化性能预测提供参考。
- 陈庆光吴墒锋吴玉林刘树红张永超王涛
- 关键词：轴流式水轮机空化流动空化性能
- 人肝再生增强因子上调细胞周期素B2基因的表达被引量：4
- 2006年
- 目的研究人肝再生增强因子(ALR)转基因表达对细胞周期素B2启动子(cyclin B2p)转录的调节作用,从而进一步探讨ALR的生物学作用及机制。方法根据文献确定细胞周期素B2p区域,聚合酶链反应(PCR)扩增细胞周期素B2p,克隆至报告基因表达载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-cyclin B2p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系,同时与ALR的真核表达载体pcDNA3．1(-)-ALR共转染HepG2细胞系,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测报告基因氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。结果成功构建pCAT3- cyclin B2p报告基因表达载体;pCAT3-cyclin B2p与pcDNA3．1(-)-ALR共转染HepG2细胞系的CAT表达活性是pCAT3-Basic空载体的25．13倍,是pCAT3-cyclin B2p单转染的2．60倍。结论人ALR对细胞周期素B2p基因的转录表达具有反式激活作用。
- 邵凤娟成军马英骥郭江刘妍王巧侠
- 关键词：肝再生增强因子启动子反式激活
- 重组β-干扰素上调HepG2细胞表达基因抑制性消减杂交技术筛选
- 2006年
- 目的利用抑制性消减杂交技术筛选重组β-干扰素（IFN-β）上调HepG2细胞表达基因。方法以重组IFN-β2000U·mL^-1刺激对数生长期HepG2细胞，设经0．9％氯化钠注射液作用的HepG2细胞为阴性对照组；制备HepG2细胞裂解液，从中提取mRNA并逆转录合成cDNA，经RsaⅠ酶切后，将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头衔接，再与阴性对照组cDNA进行两次消减杂交和两次抑制性聚合酶链反应（PCR），将产物与T／A栽体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠埃希菌进行基因文库扩增，随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析。结果成功构建了重组IFN-β作用HepG2后差异表达的cDNA消减文库。扩增后得到50个200～1000bp插入片段的克隆，随机挑选其中31个插入片段测序，通过生物信息学分析获得其全长基因序列，共获得20种编码基因，其中1种为未知功能的新基因。结论通过该方法可筛选得到IFN-β作用于HepG2细胞后上调表达的部分基因，包括与细胞生长调节、物质代谢和细胞凋亡密切相关的一些蛋白编码基因。
- 钟彦伟成军曲建慧张黎颖郭江李晓东
- 关键词：抑制性消减杂交反式调节
- 乙型肝炎表面抗原基因启动子ⅠDNA结合蛋白1对诱导型一氧化氮合酶基因启动子转录活性的双向调节
- 2007年
- 目的探讨HBV表面抗原基因启动子ⅠDNA结合蛋白1(SBP1)对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因启动子转录的调节作用。方法利用生物信息学技术确定iNOS基因的启动子区域(iNOSp)和3个缺失突变体的基因序列,PCR分别扩增iNOSp和3个缺失体的基因序列,分别克隆至报告基因表达载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-iNOSp报告载体;以构建的这4种报告质粒分别转染人肝母细胞瘤细胞系HepG2,用ELISA检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并与构建的真核表达载体pcDNA3.1(-)-HBV SBP1共转染HepG2细胞系,用ELISA检测CAT的表达活性。结果成功获得iNOS基因启动子和3个缺失突变体的正确克隆,其中p1-iNOSp和pcDNA3.1(-)-HBV SBP1瞬时共转染HepG2细胞时,iNOS启动子的转录活性上升1.54倍;p3-iNOSp启动子和pcDNA3.1(-)-HBV SBP1瞬时共转染HepG2细胞时,iNOS启动子的转录活性下降31.3%,重复实验得到相似结果。结论克隆的新基因SBP1在细胞内的表达,对iNOS基因反式激活iNOS启动子的转录活性具有明显的双向调节作用,双向调节的部位是iNOS启动子的核因子(NF)-IL6、A-激活域结合位点(AABS)和NF-κB这3个结合位点。
- 郭风劲成军纪冬刘妍王琳张黎颖宋方洲
- 关键词：一氧化氮合酶
- X-盒结合蛋白1生物学功能研究进展被引量：4
- 2006年
- 研究发现X-盒结合蛋白1(X-box binding protein1,XBP1)与内质网中蛋白质的折叠密切相关,参与调控未折叠蛋白的折叠、修饰、分选与包装;此外,XBP1是联系未折叠蛋白反应元件、脂类生物合成和内质网生物合成的纽带。细胞在异常情况下会诱导内质网压力,导致蛋白质不能折叠或者错误折叠,XBP1作为未折叠蛋白反应元件的转录调控因子,指导蛋白质再折叠和降解,帮助细胞缓解内质网压力。了解与阐明细胞中XBP1的分子生物学作用机制,有利于揭示内质网中蛋白质加工、包装的作用机理。
- 郭风劲成军宋方洲
- 关键词：内质网
- 应用抑制性消减杂交技术筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白2反式调节基因被引量：3
- 2005年
- 目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白2(NS2)反式调节基因cDNA消减文库,研究HCVNS2蛋白的反式调节基因。方法:应用抑制性消减杂交(SSH)技术筛选转染pcDNA3.1(-)NS2和空载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞差异性表达基因,并进行生物信息学分析。结果:获得12个差异表达的已知蛋白基因和3个未知功能基因序列,包括:磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican3,GPC3)、酸性核糖体磷蛋白PO、核糖体蛋白L13a、整合素β1、天冬酰胺合成酶、信号肽酶、α2HS糖蛋白、小核糖体蛋白多肽G、蛋白酶样亚单位、黄体酮受体、SDR家族脱氢酶8、Ras家族RAB4A、具有BTB/POZ结构的新蛋白、具有coiled coil helix结构的新蛋白、未知功能基因。结论:成功构建HCVNS2反式调节的相关基因cDNA消减文库,为今后进一步分析、研究病毒蛋白的致病机制提供了线索。
- 张黎颖成军刘妍郭江黄燕萍吴顺华吴煜邵清
- 关键词：反式调节基因抑制性消减杂交技术CDNA消减文库PCDNA3黄体酮受体
- 轴流式水轮机内三维空化湍流的数值研究被引量：14
- 2006年
- 采用一种完整空化模型和一种混合流体两相流模型,对轴流式水轮机全流道内的定常空化湍流流动进行了数值模拟。根据模拟结果,考察了水轮机在低尾水位下运行时流道内空化发生的部位和程度,并对水轮机的空化性能进行了预估。数值预测的空化流动现象与模型水轮机空化试验中所观察到的现象基本一致,说明数值模拟结果可为水轮机的空化性能预测提供参考。
- 陈庆光吴玉林刘树红王涛张永建
- 关键词：水力机械轴流式水轮机数值模拟
