重庆市自然科学基金(2009BB5411) 作品数:4 被引量:10 H指数:2 相关作者: 肖明朝 罗家宇 聂永华 曾李 何跃 更多>> 相关机构: 重庆医科大学附属第一医院 更多>> 发文基金: 重庆市自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
BKca下调RhoA/ROCK信号通路改善糖尿病大鼠阴茎勃起功能 被引量:3 2014年 目的:观察大电导钙激活钾通道(big conductance Ca2+-activated K+channel,BKca)对糖尿病勃起功能障碍(diabetes mellitus-induced erectile dysfunction,DMED)大鼠阴茎海绵体平滑肌Rho A/ROCK信号通路的影响。方法:实验大鼠分为空白对照组8只,DMED组8只,NS1619组(DMED治疗组)7只,NS1619组大鼠采用特异性BKca激活剂(NS1619)阴茎海绵体注入2周。观察各组勃起行为,并电刺激检测阴茎海绵体内压(intracavernous pressure,ICP)/平均动脉压(mean arterial pressure,MAP),取各组阴茎海绵体平滑肌检测肌张力,采用Western blot和定量PCR(real-time PCR)方法检测Rho A、ROCK1、ROCK2表达,反应Rho A/ROCK信号通路差异,同时检测MYPT-1表达反应肌球蛋白轻链磷酸酶(myosin light chain phosphatase,MLCP)磷酸化程度。结果:成功构建DMED大鼠模型,NS1619组大鼠与DMED组大鼠比较,勃起次数和ICP/MAP明显改善(P=0.025、0.024),阴茎海绵体平滑肌舒缩顺应性提高(P=0.031、0.024)并且Rho A、ROCK2以及肌球蛋白磷酸酶靶向结合亚基(myosin phosphatase target subunit,MYPT)-1蛋白和m RNA表达水平下调(P=0.029、0.003、0.002),但仍未达到正常对照组大鼠水平(P=0.018、0.040、0.003),ROCK1表达无明显差异(P=0.533)。结论:DMED大鼠因Rho A/ROCK信号通路上调和MLCP磷酸化增强导致阴茎海绵体平滑肌舒缩顺应性降低以致勃起功能障碍发生,激活BKca可以通过下调Rho A/ROCK信号通路和抑制MLCP磷酸化,改善勃起功能。 罗家宇 吴方昊 曾李 赵亮 肖明朝关键词:勃起功能障碍 大电导钙激活钾通道 糖尿病 骨髓间充质干细胞改善糖尿病大鼠勃起功能障碍的研究 被引量:5 2012年 目的:探讨骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)移植到大鼠阴茎海绵体组织后对勃起功能的影响。方法:体外分离培养BMMSCs并利用形态学及流式细胞术进行鉴定证实。用腹腔注射链脲左菌素(Streptozotocin,STZ)建立糖尿病性大鼠模型,并用阿扑吗啡(Apomorphine,APO)筛选出糖尿病勃起功能障碍(Diabetes mellitus induced erectiledysfunction,DMED)大鼠模型,成模后将BMMSCs(2×106个)移植于大鼠阴茎海绵体内。2周后,分别对正常组、糖尿病组及治疗组进行海绵体内压(Intracorporeal pressure,ICP)及平均动脉压(Mean arterial blood pressure,MAP)测定并取大鼠阴茎海绵体组织,荧光显微镜下观察BMMSCs的局部存活情况,苏木素-伊红染色(Hematoxylin and eosin,HE)观察阴茎海绵体组织中血管。结果:荧光显微镜观察提示BMMSCs能在糖尿病大鼠体内存活;勃起功能测定结果表明治疗组大鼠ICP/MAP比值明显高于糖尿病组;HE染色结果显示在治疗组大鼠阴茎海绵体中血管数目[(12.75±1.89)根/HP]多于糖尿病组[(8.05±1.43)根/HP]。结论:BMMSCs能够有效改善糖尿病性大鼠勃起功能。 聂永华 肖明朝 苟欣 汤为学 陈力学 蔡贤福关键词:骨髓间充质干细胞 勃起功能障碍 糖尿病 慢病毒介导KCNMA1体外转染大鼠间充质干细胞及功能测定 被引量:2 2012年 间充质干细胞具有高度增殖、自我更新和多向分化的潜能。大电导钙离子激活的钾通道M亚族α亚基(potassium large conductance calcium-activated channel,subfamily M,alpha member 1,KCNMA1)介导细胞内K+的外流,使细胞膜超极化,降低细胞的兴奋性。该研究通过制备KCNMA1重组慢病毒载体和空白对照慢病毒载体,将其转染至间充质干细胞内,测定转染复数值(MOI),并通过RT-PCR和Western blot比较转染前后KCNMA1的表达变化情况,检测转染前后细胞微环境中电解质浓度变化。结果成功包装了KCNMA1慢病毒载体和空白病毒载体并转染入干细胞内;含有目的基因的慢病毒转染间充质干细胞后,RT-PCR和Western blot提示KCNMA1过表达,且细胞微环境中K+浓度升高。证实成功地将含KCNMA1的慢病毒载体转染进入大鼠间充质干细胞内,并在细胞内过表达且发挥功能,为体内研究KCNMA1结合干细胞治疗相关疾病奠定了基础。 何跃 肖明朝 聂永华 何卫阳 秦国东 罗家宇关键词:慢病毒 大电导钙激活钾通道对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响 被引量:1 2014年 为了观察开放和拮抗大电导钙激活钾通道(big conductance Ca2+-activated K+channel,BKca)对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖的影响并探讨其机制,该研究分离培养了大鼠BMSCs,采用BKca通道特异性开放剂(NS1619)和拮抗剂(IBTX)干预,MTT、平板克隆测定细胞增殖活力及细胞克隆形成能力;流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期分布;Western blot、定量PCR检测周期蛋白cyclin D1基因和蛋白表达水平;整细胞膜片钳技术分析细胞膜电生理特性。结果显示,NS1619干预组与对照组相比,BMSCs细胞膜K+通道外向电流振幅增大,细胞增殖能力和克隆形成能力增强,凋亡减少。此外,开放BKca通道明显促进细胞从G1期向S期过渡,cyclin D1蛋白及mRNA表达上调,而拮抗BKca通道则相反。推测,BKca通道通过调节细胞周期进程最终影响细胞增殖,该作用可能与其具有调控细胞膜K+电流的电生理特性有关。 罗家宇 吴方昊 何跃 曾李 肖明朝关键词:大电导钙激活钾通道 骨髓间充质干细胞 细胞增殖 细胞周期 钾离子电流