国家自然科学基金(81201340)
- 作品数：3 被引量：21H指数：3
- 相关作者：吴文娟郭建范齐文钱雪琴方欢英更多>>
- 相关机构：同济大学附属东方医院复旦大学附属公共卫生临床中心贵州省人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市卫生局青年科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌rdESAT-6抗原在耻垢分枝杆菌中的制备及其血清学诊断研究被引量：5
- 2014年
- 目的构建结核分枝杆菌(MTB)融合基因2×esat-6原核表达载体,利用耻垢分枝杆菌诱导表达、纯化早期分泌抗原ESAT-6重组二聚体(rdESAT-6),Western blot分析其抗原性,并评估其在结核病患者中的血清学诊断价值。方法以DNA疫苗HG856A2为模板扩增2×esat-6基因,构建pMF41-2×esat-6原核表达载体,电转化耻垢分枝杆菌,诱导表达rdESAT-6蛋白,Western blot分析其抗原性。收集126例确诊的结核病患者和42名健康体检者的血清,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和结核斑点金免疫渗滤试验(TB-DOT)检测血清结核抗体,评估rdESAT-6在结核血清学诊断中的价值。结果成功构建了pMF41-2×esat-6重组质粒,以包涵体形式表达了rdESAT-6蛋白,纯化的蛋白纯度在95%以上,可与小鼠抗ESAT-6血清发生特异性反应。126例结核病患者血清检测结果表明,rdESAT-6蛋白在MTB阳性组和阴性组患者血清学诊断的敏感性分别为79.75%(63/79)、61.70%(29/47),好于TB-DOT的62.03%(49/79)、44.68%(21/47)(P<0.05)。2种方法对42名健康体检者血清诊断特异性均为95.24%(40/42)。结论 MTB的融合蛋白rdESAT-6用于结核病血清学检测具有较好的敏感性和特异性,可作为结核病血清学诊断的优选抗原。
- 郭建范齐文范小勇马辉钱雪琴胡香南吴文娟
- 关键词：结核分枝杆菌ESAT-6融合蛋白免疫学诊断
- 血流感染的快速诊断:从病原到宿主的整体策略被引量：7
- 2015年
- 血流感染是世界范围内发病率和死亡率最高的疾病之一,血流感染的早期诊断是启动正确抗感染治疗和干预措施的保证。血培养仍是目前诊断细菌性血流感染的金标准,但其阳性率低、耗时长,是快速诊断血流感染面临的难题。近年来,随着血流感染病原菌分子检测方法和生物标志物新技术的迅速崛起,其已被广泛用于临床检测和评估。因此,临床医生和实验室必须理解影响这些技术在临床应用中的价值和诊断准确性的关键因素和性能特征,以形成科学、适宜、互为补充的血流感染早期检测整体策略。
- 吴文娟
- 关键词：血流感染病原宿主
- 结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药相关分子特征分析被引量：9
- 2015年
- 目的：探讨结核分枝杆菌（ Mycobacterium tuberculosis，MTB）吡嗪酰胺（ pyrazinamide， PZA）耐药表型与耐药相关基因pncA的关系，对未发现pncA突变的菌株进行panD、rpsA基因分析。方法采用MGIT960仪器法检测108株结核分枝杆菌临床分离株对一线抗结核药物（包括PZA）的敏感性，采用PCR DNA测序技术对菌株进行16S rDNA和pncA、panD、rpsA基因扩增及序列分析。结果78株耐多药结核分枝杆菌（MDR-TB）及利福平单耐菌株中PZA耐药47株（60％），30株对一线抗结核药物（乙胺丁醇、异烟肼、利福平、链霉素，简称EIRS）敏感的菌株中PZA耐药4株（13％），耐药结核分枝杆菌中PZA耐药率显著高于EIRS敏感株。51株PZA耐药MTB菌株中49株（96％） pncA基因发生了突变，57株PZA敏感株中4株（7％）发生突变， PZA耐药株pncA基因突变率显著高于PZA敏感株。 PZA耐药菌株的pncA基因改变以碱基置换为主，His57 Asp氨基酸改变较为常见。碱基突变区域集中在160～169、203～289、309～396和413～467。 pncA基因突变序列分析发现7个新的突变位点：T175 C、C188 A、68位碱基插入G、235位碱基插入AGC、339位碱基插入C、392位碱基插入CC、395位碱基缺失GT。 PZA敏感菌株中发现的4个pncA基因突变位点与耐药株突变位点均不相同。 PZA表型耐药但pncA基因及上游调控序列无突变的菌株NJ108存在panD G419A突变，但rpsA基因为野生型。结论耐药结核分枝杆菌中PZA耐药率较高。吡嗪酰胺耐药结核分枝杆菌中pncA基因突变较为常见，panD基因突变的出现亦值得关注。
- 罗振华钱雪琴范齐文方欢英郭建吴文娟
- 关键词：结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药分子特征
