国家自然科学基金(30471760)
- 作品数：15 被引量：29H指数：3
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- 相关机构：同济大学附属同济医院上海市普陀区人民医院复旦大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学水利工程更多>>
- 内皮抑素基因重组腺病毒载体的构建及其对新生血管的影响被引量：1
- 2008年
- 目的构建腺病毒介导的小鼠内皮抑素并观察其在体内、外的表达及对血管的抑制作用。方法以mEndostatin质粒为模板通过PCR方法扩增回收mEndostatin基因,将mEndostatin基因连接到腺病毒载体DC315中,构建PDC315-mEndo表达质粒。将此表达质粒与腺病毒重组质粒pBGHE3通过lipofectamine 2000共同转染293细胞,经同源重组产生重组腺病毒Ad-mEndo,用氯化铯密度梯度超速离心法纯化。用50%组织培养感染剂量法测定病毒滴度。体外转染骨肉瘤细胞株MG-63,用western印迹检测感染的骨肉瘤细胞上清夜mEndostatin的表达并通过鸡胚绒毛尿囊膜实验(chorioallantoic membrane,CAM)观察其抑制血管生成的活性。结果酶切、PCR及DNA测序鉴定表明成功构建了携带内皮抑素(Endostatin,ES)融合基因的重组腺病毒载体,而在鸡胚绒毛尿囊膜血管生成实验中加入培养物上清的实验组与对照组相比鸡胚尿囊膜血管密度稀疏,平均血管数差异明显(P<0.01)。结论腺病毒介导的小鼠内皮抑素基因在体外获得高效表达,并可显著抑制血管生成。
- 窦帮马晓辉梅炯童天朗蔡宣松
- 关键词：腺病毒载体内皮抑素抗血管生成
- 骨肉瘤裸鼠移植瘤模型中的仿血管生成被引量：2
- 2008年
- 目的观察肿瘤仿血管生成在骨肉瘤裸鼠移植瘤中的结构特点。方法建立荷人骨肉瘤裸鼠模型,切取肿瘤标本制作组织切片,应用CD147免疫荧光标记染色骨肉瘤细胞,观察骨肉瘤中肿瘤仿血管生成的结构特点。结果骨肉瘤细胞CD147染色呈阳性,在肿瘤中心区域可清楚观察到肿瘤仿血管结构。结论在骨肉瘤裸鼠移植瘤中存在典型的肿瘤仿血管通道,参与肿瘤的血液供应。
- 王子凡梅炯
- 关键词：骨肉瘤CD147免疫荧光裸鼠
- 腺病毒介导人VEGF-siRNA对裸鼠移植骨肉瘤的抑制作用被引量：2
- 2008年
- 目的:研究腺病毒介导人VEGF-siRNA对裸鼠移植骨肉瘤的治疗作用。方法:利用腺病毒重组技术将VEGF- siRNA基因克隆人增殖缺陷型腺病毒基因组中,构建重组腺病毒Ad-VEGF-siRNA,重组腺病毒体外感染骨肉瘤MG63细胞,RT-PCR检测MG63细胞VEGF的表达水平。建立荷人骨肉瘤MG63裸小鼠动物模型,以Ad-VEGF-siRNA瘤组织注射治疗,检测移植瘤组织中VEGF的表达情况及Ad-VEGF-siRNA对肿瘤生长和肺转移的抑制作用。结果:成功构建了表达VEGF- siRNA的重组腺病毒载体Ad-VEGF-siRNA;体外与体内实验检测Ad-VEGF-siRNA转染骨肉瘤细胞MG63后显著抑制VEGF表达。荷人骨肉瘤裸鼠经Ad-VEGF-siRNA治疗后,显示其对移植骨肉瘤生长有明显抑制作用(P<0.05),并且对骨肉瘤的肺转移有显著的抑制作用(P<0.05)。结论:所构建的Ad-VEGF-siRNA可以有效抑制骨肉瘤中VEGF表达,使裸鼠移植骨肉瘤生长减慢,并且显著抑制荷瘤裸小鼠肺转移的发生。
- 高悠水梅炯童天朗胡牧薛华明蔡宣松
- 关键词：腺病毒骨肉瘤RNA干扰基因治疗抗血管生成治疗
- 骨肉瘤动物模型的研究进展
- 2007年
- 实验动物模型是研究人类骨肉瘤的重要手段之一。动物模型有多种不同建立方法。全文对动物模型的建立方法、模型特点及目前应用等进行综述。
- 倪明梅炯
- 关键词：骨肉瘤疾病模型实验性动物
- 皮质旁骨肉瘤被引量：6
- 2006年
- 童天朗梅炯
- 关键词：皮质旁骨肉瘤病理预后
- 腺病毒介导的血管内皮生长因子小干扰RNA对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的研究被引量：2
- 2008年
- 目的观察腺病毒介导的血管内皮生长因子（VEGF）的短发夹状小分子干扰RNA（siRNA）对骨肉瘤细胞株MG63增殖和凋亡的影响。方法将携带VEGF短发夹状siRNA的腺病毒载体Ad．VEGF—siRNA感染MG63。噻唑蓝（MTT）比色分析细胞体外增殖力，Hochst染色、流式细胞术观察细胞凋亡。建立30只裸鼠移植瘤模型，Ad—VEGF—siRNA组瘤内注射Ad—VEGF—siRNA病毒纯化液0．2ml，通过免疫组织化学技术，观察肿瘤组织中MG63细胞的增殖和凋亡。结果与对照组比较，Ad．VEGF．siRNA组MG63细胞生长减慢，Hoechst染色可见到典型的凋亡细胞，24、48、72h凋亡率分别为7．27％、12．01％和20．09％。Ad—VEGF—siRNA明显抑制移植瘤生长，抑瘤率达40．7％。Tunel染色可见MG63细胞典型凋亡特征，同时肿瘤组织中PCNA、bcl-2表达明显减少（P〈0．01）。结论Ad—VEGF．siRNA可高效而特异地阻断VEGF基因表达，抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡。
- 钱光梅炯董有海胡牧薛华明蔡宣松
- 关键词：血管内皮生长因子腺病毒基因疗法骨肉瘤
- 重组腺病毒介导小鼠内皮抑素对荷骨肉瘤MG-63细胞裸鼠肺转移的抑制被引量：5
- 2008年
- 目的:构建携小鼠内皮抑素(endostatin,ES)基因的重组腺病毒载体,观察其对荷骨肉瘤裸鼠肺转移的抑制,探讨内皮抑素表达水平与骨肉瘤肺转移的关系。方法:构建pDC315-mEndo表达质粒,同源重组产生重组腺病毒Ad-mEndo。裸鼠右前肢皮下注射骨肉瘤MG-63细胞建立移植瘤裸鼠模型;随机分为4组:小鼠内皮抑素腺病毒(Ad-mEndo)组,携带EGFP基因腺病毒(Ad-EGFP)组,PBS组,未接种肿瘤细胞裸鼠空白对照组。各组裸鼠每周分别注射相应药物200μl,连续5次,观察各组动物移植瘤体积、瘤组织病理,ELISA法检测各组裸鼠血ES水平;7周后处死动物,观察有无肺转移及肺转移灶病理。结果:Ad-EGFP组肿瘤体积为(1.53±0.05)cm3,PBS组为(1.56±0.07)cm3,Ad-mEndo组为(0.91±0.03)cm3,Ad-mEndo治疗的抑瘤率达40.7%。Ad-mEndo组裸鼠血内皮抑素表达水平明显高于Ad-EGFP组和PBS组(P<0.05)。Ad-mEndo组裸鼠肺部未发现肿瘤转移灶,其他两组肺部见大量散在转移灶,肺转移率分别为80%和90%。未发生肺转移裸鼠的ES水平显著高于发生肺转移的裸鼠(P<0.05)。结论:腺病毒介导的小鼠内皮抑素显著抑制了荷骨肉瘤裸鼠肺转移,内皮抑素表达水平与肺转移有着直接的关系。
- 梅炯窦帮马晓辉童天朗蔡宣松
- 关键词：骨肉瘤内皮抑素肺转移抗血管生成
- 骨肉瘤标本血管铸形观察
- 2007年
- 目的观察骨肉瘤肿瘤血管的形态学特点并探讨其病理学意义。方法应用次氯酸钠溶液混合腐蚀法对6例骨肉瘤截肢标本进行腐蚀,制作骨肉瘤血管铸型标本,分析其血管形态特点。结果6例骨肉瘤血管铸型标本均可以观察到肿瘤血管系统形态,标本上肿瘤血管增多,增粗,管腔粗细不一,大量血湖形成,动脉移位,血管直角分支,中心血管缺如、中心血管盲端等特点十分明显。结论骨肉瘤,这种高度恶性肿瘤其高侵袭性、高生长性、高转移率与其自身丰富异常肿瘤血管形成具有直接的解剖学关系。
- 毕刚王家骐胡牧薛华明钱光梅炯
- 关键词：骨肉瘤血管铸型血管形态
- 绿色荧光蛋白在肿瘤研究中的应用被引量：2
- 2010年
- 自20世纪60年代被发现以来，绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）因其化学性质稳定、无光漂白现象、用甲醛固定和石蜡包埋亦不影响其荧光性质等引起科学家的广泛关注。目前．GFP基因作为报告基因广泛应用于细胞生物学、分子生物学以及临床医学等研究中。
- 杨旭津梅炯
- 关键词：绿色荧光蛋白荧光标记肿瘤基因
- pSilencer-VEGF-siRNA诱导骨肉瘤细胞系MG63凋亡并上调caspase-3表达
- 2009年
- 目的研究pSilencer—VEGF—siRNA转染骨肉瘤细胞系MG63后诱导其凋亡以及对caspase-3表达能力的影响。方法体外常规培养骨肉瘤细胞系MG63并构建人类特异性的pSilencer-VEGF-siRNA；分为pSilencer-VEGF—siRNA转染组和空载体组。转染后48—72h，流式细胞仪AnnexinV-FITC／PI染色检测细胞凋亡、分析细胞周期；Westernblot法测定caspase-3表达。结果MG63转染pSilencer—VEGF—siRNA表达质粒后，早期出现细胞凋亡及明显的G。期阻滞以及G1期细胞数增加；pSilencer．VEGF转染组caspase-3的表达较空载体组和对照组明显上调。结论pSilencer-VEGF-siRNA可诱导MG63细胞早期凋亡；并可上调caspase-3的表达。
- 高悠水张立智钱光童天朗胡牧梅炯蔡宣松
- 关键词：凋亡CASPASE-3
