国家自然科学基金(30471905)
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
- 相关作者：王佐林李琳程杰金啸更多>>
- 相关机构：同济大学附属口腔医院同济大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科委科研计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 转录后水平的基因沉默技术在HSP47中的应用
- 2006年
- 李琳王佐林
- 关键词：热休克蛋白47基因沉默反义技术RNA干扰
- siRNA对鼠成纤维细胞株中HSP47表达的抑制作用被引量：2
- 2006年
- 目的:构建小鼠热休克蛋白47(47 kDa heat shock protein,HSP47)基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)表达载体,及HSP47第一外显子克隆表达载体,观察其在小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞株)中对HSP47基因表达的抑制作用。方法:针对小鼠HSP47的mRNA序列,在368、718位点分别设计两对21nt的,编码HSP47siRNA基因片断的寡核苷酸,退火成双链后将其连接到pSilencer1.0质粒的U6启动子下游,构建pSilencer-HSP47siRNA重组质粒;同时构建HSP47第一外显子重组质粒。经酶切、测序鉴定后,用脂质体介导的基因转染方法,转入NIH3T3细胞,用半定量RT-PCR法检测HSP47表达水平的变化。结果:经酶切、测序鉴定,成功构建了siRNA真核表达载体及靶基因克隆表达载体。经脂质体转染NIH3T3细胞后,RT-PCR显示NIH3T3细胞中HSP47基因的mRNA表达水平明显降低,所构建的HSP47-siRNA基因的真核表达载体,成功地抑制了目的基因的表达。结论:构建的小鼠HSP47基因的RNA干扰真核表达载体pSilencer-HSP47siRNA,在NIH3T3细胞中有效地发挥了对HSP47基因表达的干涉作用,从而提示HSP47特异的siRNA具有抑制皮肤瘢痕形成的潜力。
- 李琳王佐林
- 关键词：热休克蛋白47小干扰RNA细胞转染
- 大鼠热休克蛋白47真核表达载体的体外构建被引量：2
- 2007年
- 目的:体外构建大鼠热休克蛋白47(47kDa heat shock protein,HSP47)的荧光真核表达载体,并检测其在鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3中的表达。方法:应用RT-PCR方法从大鼠肝脏中分离、扩增目的片断,双酶切定向克隆到真核表达载体pTracer-CMV中,构成重组质粒pTracer-CMV-HSP47,测序验证。通过脂质体介导质粒瞬时转染NIH/3T3细胞,Western blotting和免疫细胞化学检测HSP47及Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)的表达变化。结果:通过RT-PCR获得1.3kb的cDNA片断,测序发现除个别碱基差异外,其余cDNA序列与基因库(Genebank)中序列一致,且编码的氨基酸序列完全一致。转染后经Western blotting和免疫细胞化学检测证实HSP47和collagenⅠ表达明显增强。结论:本研究成功构建了大鼠HSP47荧光真核表达载体pTracer-CMV-HSP47,并能在NIH/3T3细胞中表达,同时证实HSP47能促进collagenⅠ的表达。
- 程杰王佐林
- 关键词：热休克蛋白47基因克隆基因转染质粒
- 热休克蛋白47在糖尿病大鼠皮肤创口愈合过程中的表达被引量：1
- 2007年
- 目的:使用糖尿病大鼠模型探讨热休克蛋白47(47kDa heat shock protein,HSP47)在糖尿病大鼠皮肤创口愈合过程中的表达水平。方法:在距正常大鼠和糖尿病大鼠头部1cm的背部做一直径1cm的圆形全层皮肤创口,糖尿病大鼠分为不注射组、注射空质粒组和注射重组质粒组,在创口愈合的第3、5、7天分别取对照组和实验组大鼠的创周皮肤,应用免疫组织化学和Western免疫印记法(Western blotting)检测HSP47在各组大鼠皮肤创口愈合过程中的表达水平。结果:正常大鼠皮肤创周组织中HSP47的表达,在愈合过程中呈明显增高的趋势。同正常大鼠相比,糖尿病大鼠皮肤创口愈合缓慢,皮肤创口组织中HSP47的表达明显减少。注射重组质粒pTracer-CMV-HSP47的糖尿病大鼠皮肤创周组织中HSP47的表达增强。结论:HSP47在糖尿病大鼠皮肤创口组织中的低表达与糖尿病大鼠皮肤创口愈合缓慢密切相关。通过体外构建HSP47的重组质粒再注入糖尿病大鼠皮肤创周组织中的方法,可以增强HSP47在体内的表达。
- 金啸王佐林
- 关键词：热休克蛋白47质粒糖尿病创口愈合
