国家自然科学基金(30960124)
- 作品数：20 被引量：102H指数：5
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- LDLR启动子区DNA甲基化调控同型半胱氨酸致平滑肌细胞增殖的作用机制被引量：3
- 2012年
- 目的探讨低密度脂蛋白受体(LDLR)在同型半胱氨酸(Hcy)致血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中的作用机制。方法原代培养VSMCs,用50、100、200及500μmol/L Hcy干预72 h;MTT法观察VSMCs增殖的活性,ELSIA法和同位素法分别检测VSMCs中ox-LDL含量和DNA甲基转移酶活性;实时定量PCR和巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测LDLR的表达和启动子区DNA甲基化的状态。结果随着Hcy浓度的增加,VSMCs中ox-LDL含量和DNA甲基转移酶活性明显增加,而VSMCs增殖活性下降,同时LDLR mRNA表达增高,且LDLR基因启动子区呈低甲基化状态,与对照组比较有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。结论 LDLR基因启动子区DNA低甲基化致LDLR表达增高可能是Hcy引起VSMCs损伤的重要机制之一。
- 姜怡邓孙炜炜马长剑王菊马胜超巩慧慧梁宇
- 关键词：低密度脂蛋白受体同型半胱氨酸血管平滑肌细胞
- 枸杞多糖对泡沫细胞泡沫化与胆固醇酯流出的影响及内质网应激作用机制的研究被引量：1
- 2012年
- 目的研究枸杞多糖(LBP)对单核细胞源性泡沫细胞泡沫化与胆固醇酯流出的影响及内质网应激的作用机制。方法原代培养单核细胞源性泡沫细胞后,用50、100、200μg.mL-1 LBP孵育72 h,油红O染色法检测泡沫细胞的数量;用荧光分光光度法分析细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量;用酶联免疫吸附法检测细胞中氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)及内质网应激蛋白(Grp78,CHOP,Xbp-1)的含量。结果 LBP可减少泡沫细胞的形成和细胞内TC、FC、CE的含量,同时可降低细胞内ox-LDL与内质网应激蛋白的含量(P<0.05,P<0.01)。结论 LBP通过降低ox-LDL及内质网应激蛋白的含量引起泡沫细胞内胆固醇的含量下降从而发挥抗动脉粥样硬化的作用。
- 姜怡邓马胜超杨安宁马长剑阮建桥王树人
- 关键词：枸杞多糖氧化低密度脂蛋白泡沫细胞泡沫化胆固醇酯
- 小鼠组织SAM和SAH在动脉粥样硬化评价中的应用被引量：1
- 2012年
- 目的探讨S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosyl Homocysteine,SAH)和S-腺苷甲硫氨酸(S-Adenosyl-methionine,SAM)在载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)评价中的应用。方法采用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)检测各组ApoE-/-小鼠(模型对照组、高蛋氨酸饮食组、叶酸和维生素B12治疗组)心脏、肝脏、肾脏组织中SAM和SAH含量的变化,并与正常对照组比较。HE染色光镜观察各组主动脉病理学改变。结果 HPLC实验数据表明,正常对照组、模型对照组、高蛋氨酸饮食组的小鼠心脏、肝脏、肾脏组织中SAM、SAH的含量依次增加,治疗组小鼠心脏、肝脏、肾脏组织中SAM、SAH的含量则有所降低,与正常对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组比较,肾脏高蛋氨酸饮食组SAM、SAH含量差异有统计学意义(P<0.05),治疗组肝脏、肾脏SAM、SAH含量差异有统计学意义(P<0.01)。与高蛋氨酸饮食组比较,肝脏、肾脏治疗组SAM、SAH含量有明显差异(P<0.01)。同时,HE染色显示高蛋氨酸饮食组主动脉AS的病理改变明显。结论 SAM、SAH含量升高可能是高蛋氨酸饮食促进ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化发生的重要机制之一。
- 梁宇廖国玲马琳娜曹成建姜怡邓
- 关键词：S-腺苷同型半胱氨酸S-腺苷甲硫氨酸APOE-/-小鼠
- 线粒体DNA氧化损伤在高同型半胱氨酸血症致载脂蛋白E-/-鼠心肌损伤中的作用
- 目的：探讨线粒体氧化损伤在高蛋氨酸饮食诱导载脂蛋白E-/-鼠心肌病变中的作用.方法：以12只健康5周龄雄鼠(SPF级C57BL/6J)作为对照组,饲以普通饮食.另选5周龄雄性纯合子载脂蛋白-/-鼠(SPF级近交系C57B...
- 杨晓玲马长剑马胜超巩慧慧孙炜炜王菊姜怡邓
- 关键词：高同型半胱氨酸血症线粒体DNA心肌损伤
- 基因组DNA甲基化在同型半胱氨酸致平滑肌细胞增殖的作用机制研究被引量：3
- 2010年
- 目的探讨基因组DNA甲基化变化在Hcy致VSMCs增殖的作用机制。方法原代培养VSMCs并鉴定,用0、50、100、200、500μM浓度Hcy干预,MTT法检测VSMCs活性;SssI甲基转移酶法分析基因组DNA甲基接受能力,甲基化敏感性限制性内切酶法分析基因组DNA甲基接受能力及DNA甲基转移酶活性。结果 MTT法表明在50μM Hcy时,VSMCs活性明显增加,其余活性下降,与各浓度组并不呈量效依赖关系;Hcy可增加DNA甲基接受能力,以50μM Hcy组效应最显著(P<0.05);HpalI限制核酸内切酶消化,与对照组比较,基因组DNA甲基化接受能力减少了50.1%、41.7%、46.1%和25.5%(50、100、200、500μM Hcy组),BssHII限制核酸内切酶消化后,基因组DNA甲基化接受能力减少了约25.5%、18.1%、17.4%和18.0%(50、100、200、500μM Hcy组)。结论 Hcy引起VSMCs基因组DNA去甲基化是平滑肌细胞增殖的重要机制之一,其效应偏重发生于CpG二核苷酸序列,CpG岛所受影响相对较小,其最大效应在50μMHcy组,且无明显的量-效依赖关系。
- 姜怡邓马琳娜韩学波王菊徐支芳于海娇
- 关键词：同型半胱氨酸平滑肌细胞增殖
- p38MAPK通路介导胰高血糖素样肽-1对人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制被引量：2
- 2012年
- 本文旨在探讨胰高血糖素样肽-1 (glucagon-like peptide-1, GLP-1)对棕榈酸盐诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbili-cal vein endothelial cells, HUVECs)凋亡的影响及其机制。体外培养HUVECs,用棕榈酸盐诱导其凋亡,同时加入GLP-1干预。酶联接免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbnent assay, ELISA)法分别测定Caspase-3活性和DNA碎片含量,Westernblot测定磷酸化细胞丝裂原活化蛋白激酶(phospho-p38 mitogen-activated protein kinase, p-p38 MAPK)表达。结果显示,与对照组相比,棕榈酸盐处理的HUVECs中Caspase-3活性和DNA碎片含量显著增多;而GLP-1可呈剂量依赖性降低棕榈酸盐所诱导升高的Caspase-3活性和DNA碎片。另外,GLP-1显著抑制由棕榈酸盐诱导的HUVECsp-p38 MAPK表达上调。以上结果提示,GLP-1可以抑制棕榈酸盐诱发的HUVECs脂性凋亡,其机制可能是对p-p38 MAPK表达的下调。
- 徐华李海龙牛自勇李桂忠曹军姜怡邓
- 关键词：胰高血糖素样肽-1P38MAPK凋亡
- HHcy对ApoE^(-/-)鼠动脉粥样硬化的影响及叶酸、VB_(12)的干预效应被引量：3
- 2011年
- 目的探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对ApoE-/-鼠动脉粥样硬化(AS)形成的影响及叶酸、维生素B1(2VB12)的干预效应。方法健康5周龄雄鼠(SPF级C57BL/6J)作为对照组,饲以普通饮食。另选5周龄雄性纯合子ApoE-/-鼠(SPF级近交系C57BL/6J)36只,随机平均分为高脂血症组、HHcy组、干预组。喂养14周后,取血测定血清Hcy及血脂水平,取主动脉进行石蜡包埋并切片,HE染色后检测主动脉斑块面积及内中膜厚度。结果 HHcy组血清同型半胱氨酸(Hcy)水平明显高于对照组与干预组(P<0.001),与对照组比较,其血脂LDL、TG、CHOL分别升高约2.2、7.6、7.2倍,HDL下降约63%(P<0.001)。HE染色可见三组ApoE-/-鼠均有AS斑块形成,HHcy组主动脉斑块面积6.21×105μm2明显大于高脂血症组3.99×105μm2与干预组4.41×105μm(2P<0.05)。AS斑块面积与其血清Hcy水平呈正相关(r=0.4898,P<0.001)。结论 HHcy导致ApoE-/-鼠AS病变形成,且病变程度依赖血清Hcy水平,叶酸和VB12的干预可有效缓解HHcy引起的血管损伤。
- 巩慧慧王菊孙炜炜马胜超马琳娜姜怡邓
- 关键词：叶酸维生素B12动脉粥样硬化
- 糖尿病并发症相关性氧化应激的实验研究被引量：3
- 2012年
- 目的链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠1型糖尿病模型的基础上,探讨糖尿病氧化应激指标的变化。方法采用一次性腹腔注射STZ的方法,监测不同时点大鼠的空腹血糖、体质量及血浆中的丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)等指标,并对结果进行统计学处理。结果大鼠注射STZ 72h后血糖值达到成模标准,并逐渐出现糖尿病表现,观察7周,始终满足成模标准,未见转复。DM组大鼠肾脏及肝脏肥大指数较CON组显著增加。氧化应激相关指标测定表明,较对照组相比,实验组大鼠血浆中脂质过氧化产物MDA水平显著升高,而SOD水平显著下降。结论本实验Ⅰ型糖尿病模型大鼠造模成功且模型稳定,氧化应激指标改变。
- 徐华纳春祥李海龙李桂忠曹军姜怡邓
- 关键词：糖尿病链脲佐菌素氧化应激
- 凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1甲基化在同型半胱氨酸作用下对人内皮细胞存活的影响被引量：5
- 2013年
- 目的 :探讨凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)对动脉粥样硬化过程中降低内皮细胞存活率的作用机制研究。方法 :按不同浓度的Hcy对人脐静脉内皮细胞作用分组:对照组(0μM Hcy)、50μM Hcy组、100μM Hcy组、200μM Hcy组和500μM Hcy组;②100μM Hcy+30μM维生素B12+30μM叶酸组(拮抗剂组),各组(n=5)培养液孵育72 h后,采用3-(4,5)-双甲基-2-噻唑-(2,5)-2苯基溴化四氮唑蓝试验检测Hcy对内皮细胞活性的影响;用分光光度比色法检测各组细胞中过氧化氢;酶免法检测氧化低密度脂蛋白、甲基转移酶-1(DNMT-1)含量;荧光定量聚合酶链式反应(PCR)测LOX-1和DNMT-1 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法测LOX-1蛋白的表达;巢式降落式PCR法测LOX-1基因甲基化的改变。结果 :同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞存活率的影响:拮抗剂组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。100、200、500μMHcy组与对照组比较:氧化低密度脂蛋白和过氧化氢的含量、LOX-1信使核糖核酸(mRNA)相对甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)表达量及LOX-1蛋白相对β-肌动蛋白表达量均增加;DNMT-1的含量和mRNA表达、LOX-1基因甲基化程度均降低,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 :LOX-1低甲基化可能是Hcy致内皮细胞损伤的重要机制之一,其中过氧化氢、氧化低密度脂蛋白和DNMT-1可能起了重要的作用。
- 马胜超孙炜炜巩慧慧马长剑王菊田珏姜怡邓
- 关键词：同型半胱氨酸甲基化人脐静脉内皮细胞凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1
- MMP-9 DNA甲基化变化在ApoE^(-/-)小鼠肾脏中的作用及高蛋氨酸饮食的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)DNA甲基化变化在载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)C57BL/6J小鼠肾脏中的作用及高蛋氨酸饮食的影响。方法将ApoE-/-小鼠随机分成模型组、高蛋氨酸组和叶酸及维生素B12治疗组,并设正常C57BL/6J小鼠为正常对照组,喂养14周后采血,分离肾脏。全自动生化分析仪检测血清同型半胱氨酸(Hcy)、尿素(Urea)和肌酐(Cr)水平;免疫组织化学法分析肾脏MMP-9蛋白表达;荧光定量RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达;巢式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)和降落式PCR检测MMP-9 DNA甲基化变化程度。结果模型组血清Hcy、Urea、Cr浓度均明显升高,MMP-9甲基化程度降低,mRNA和蛋白表达增强(均P<0.05),与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);高蛋氨酸组各项指标变化较模型组更为明显(均P<0.05);而叶酸及维生素B12治疗组MMP-9 mRNA和蛋白表达减少,甲基化程度升高(P<0.05)。结论 MMP-9 DNA甲基化变化可能是ApoE-/-小鼠高蛋氨酸饮食致肾功能损伤的重要机制之一。
- 梁宇马琳娜杨晓玲王菊巩慧慧姜怡邓
- 关键词：基质金属蛋白酶-9DNA甲基化
